一例肉雞新城疫與大腸桿菌病混合感染的診斷

董冠波

2016年10月，山東省某肉雞場33日齡商品肉雞發(fā)生了一起以體溫升高、精神沉郁、呼吸困難、下痢、排黃白色或黃綠色稀糞并混有黏液或血液等、呼吸道和消化道均出現(xiàn)典型癥狀的疫病。為對此次疫病及時確診，筆者進行了發(fā)病情況、臨床癥狀和病理變化等臨床診斷以及細菌分離與鑒定、病毒分離與鑒定等實驗室檢測，現(xiàn)將整個診斷過程介紹如下。

1臨床診斷

1.1發(fā)病情況

某養(yǎng)殖場飼養(yǎng)的4，000余只33日齡商品肉雞突然發(fā)病，剛發(fā)病時零星死亡，3d后死亡數(shù)量迅速增加，1周內(nèi)共死亡800余只，死亡率達20%。疫病發(fā)生后養(yǎng)殖場曾先后利用紅霉素、慶大霉素進行藥物治療，均未能有效控制疫情。

1.2臨床癥狀

發(fā)病雞出現(xiàn)體溫升高，精神沉郁，呼吸困難，具有呼嚕聲，咳嗽，眼半閉或全閉，食欲廢絕，鼻腔和口腔分泌物增加，口角常有酸臭黏液流出，有搖頭和吞咽動作，下痢，糞便呈黃白色或黃綠色稀糞并混有黏液或血液等癥狀。

1.3病理變化

解剖病死雞可見嗉囊內(nèi)充滿酸臭味液體；喉頭和氣管內(nèi)含大量黏液、充血、出血；心包膜渾濁、增厚、附著灰白色絨毛狀滲出物；肝臟腫大、邊緣鈍圓、附著黃白色纖維素性滲出物；腺胃腫脹、出血、潰瘍，腸管變?。荒c道內(nèi)腫脹，腸黏膜呈廣泛性出血。

2細菌分離與鑒定

2.1細菌分離培養(yǎng)與鏡檢觀察

將采集的病死雞的心臟、肝臟等病料樣品分別接種于麥康凱瓊脂和營養(yǎng)瓊脂，37℃培養(yǎng)至24h后，營養(yǎng)瓊脂和麥康凱瓊脂分別生長出圓形、隆起、光滑、邊緣整齊的無色和粉紅色菌落。單菌落經(jīng)涂片、革蘭氏染色及鏡檢均可見兩端鈍圓的革蘭氏陰性短桿菌，符合大腸桿菌的形態(tài)特征。

2.2生化試驗

取純培養(yǎng)的分離菌株接種于各生化反應管中，37℃培養(yǎng)至24h后，可見分離菌株能夠發(fā)酵葡萄糖、蔗糖、核糖、麥芽糖、乳糖和半乳糖，不能夠發(fā)酵甘露糖，甲基紅試驗、吲哚試驗均為陽性，H2S產(chǎn)生試驗、枸櫞酸鹽利用試驗和V-P試驗均為陰性，符合大腸桿菌的生化特征。

2.3致病性試驗

將20只昆明系小白鼠隨機分為2組（攻毒組和對照組），每組10只，攻毒組小鼠腹腔接種純培養(yǎng)的分離菌株，0.2mL/只，對照組小鼠接種培養(yǎng)基，隔離飼養(yǎng)。攻毒組小鼠在接種后12h內(nèi)全部死亡，死亡小鼠的心臟、肝臟等組織經(jīng)涂片、革蘭氏染色和鏡檢可見革蘭氏陰性小桿菌。對照組小鼠無死亡，飲食、精神狀態(tài)等良好。

2.4藥敏試驗

分離菌株對13種獸醫(yī)臨床常見藥物表現(xiàn)出了不同程度的敏感性，其中高敏藥物5種（氟苯尼考、環(huán)丙沙星、氧氟沙星和頭孢噻肟等），中敏藥物3種（阿莫西林等），低敏藥物3種（紅霉素、四環(huán)素等），耐藥藥物2種（土霉素、慶大霉素）。

3病毒分離與鑒定

3.1病毒分離

取病死雞的氣管、肝臟和心臟等病料樣品加入5倍體積滅菌生理鹽水搗碎，經(jīng)0.45μm濾膜過濾除菌后尿囊腔接種10日齡SPF雞胚10枚，0.2mL/胚，雞胚在接種后60～72h集中死亡，死亡雞胚具有全身充血、出血及爪子發(fā)紅等典型特征，無菌收集死亡雞胚的尿囊液。

3.2血凝試驗（HA）

采用常規(guī)HA試驗操作方法測定分離毒株尿囊液對1%雞紅細胞的凝集效價為27。

3.3中和試驗（VN）

取分離毒株尿囊液與新城疫陽性血清等量混合均勻，置于4℃過夜，次日尿囊腔接種10日齡SPF雞胚10枚，雞胚接種后均未死亡，至接種后120h，剖檢雞胚可見雞胚發(fā)育正常，未見充血、出血等癥狀。收集雞胚的尿囊液，測定其對1%雞紅細胞的凝集效價為20。

3.4致病性試驗

將20只7日齡SPF雛雞20只隨機分為2組（攻毒組和對照組），每組10只，攻毒組雛雞滴鼻接種分離毒株尿囊液，0.1mL/只，對照組雛雞接種生理鹽水，隔離飼養(yǎng)。攻毒組雛雞在接種后72h內(nèi)全部死亡，死亡雛雞表現(xiàn)出高熱、呼吸困難、黏膜和漿膜出血等典型癥狀。對照組雛雞無死亡，飲食、精神狀態(tài)等良好。

4綜合診斷結果

綜合臨床診斷以及實驗室細菌學和病毒學檢測結果，診斷為新城疫和大腸桿菌病混合感染。

5討論

新城疫和大腸桿菌病均是雞的常發(fā)病和多發(fā)病，當雞群同時感染這2種疫病時，疫情更加嚴重，死亡率更高。疫苗免疫接種和藥物治療分別是新城疫和大腸桿菌病的主要防治方法，如防治措施得當則可避免2種疫病的發(fā)生。但在獸醫(yī)臨床中受母源抗體干擾、疫苗質量、免疫技術和雞群的健康狀態(tài)等多種因素困擾，往往造成新城疫疫苗的免疫失敗。養(yǎng)殖單位長期大量濫用抗菌藥物導致了菌株的耐藥性，造成藥物預防與治療大腸桿菌病失敗。本病例的發(fā)生原因應該是雞舍通風不良，潮濕，氨氣濃度較大，雞群體液免疫水平降低，雞群新城疫抗體水平未能有效保護新城疫病毒感染，同時并發(fā)大腸桿菌病，而養(yǎng)殖場長期使用的抗菌藥物已使大腸桿菌產(chǎn)生了耐藥性，導致了藥物治療效果不明顯，造成死亡率增加。養(yǎng)殖場收到診斷結果后通過新城疫疫苗緊急免疫接種以及交替使用氟苯尼考等敏感性藥物，迅速控制了疫病，將經(jīng)濟損失降至了最低。故在獸醫(yī)臨床養(yǎng)殖中保持通風，避免受潮、受寒、擁擠和刺激等，定期消毒，定期進行抗體監(jiān)測，保持雞群具有較高的抗體滴度，交替輪流使用藥物，可有效預防新城疫和大腸桿菌病的發(fā)生。endprint