梅花鹿鹿茸的質(zhì)量分析及開(kāi)發(fā)利用

高銘坤，杜智恒

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，哈爾濱 150040)

梅花鹿(Cereusnippon)，又稱花鹿、鹿，隸屬于哺乳綱偶蹄目反芻亞目鹿科鹿屬，是國(guó)家II級(jí)重點(diǎn)保護(hù)動(dòng)物。其廣泛分布于北美大陸、歐亞大陸及非洲大陸。在我國(guó)華北、東北、西南及西北等地皆有分布[1]。前者習(xí)稱花鹿茸，后者習(xí)稱馬鹿茸，鹿茸末端呈圓形，外面被有絨狀的茸毛，內(nèi)部為結(jié)締組織和軟骨組織，其間布滿血管，有血液流通，代謝旺盛，生長(zhǎng)速度快[2]。鹿茸性溫、味甘咸，歸肝、腎二經(jīng)[3]。鹿茸作為藥材，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，有壯元陽(yáng)，補(bǔ)氣血，益精髓，強(qiáng)筋骨之功效?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，鹿茸具有多種藥理學(xué)功能，如抗氧化、抗炎鎮(zhèn)痛、促進(jìn)創(chuàng)傷愈合、抗衰老、抗疲勞、抗腫瘤、改善記憶力、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等[4-7]。由于其生理活性強(qiáng)、功效彰、效益顯等特點(diǎn)，在我國(guó)中藥材市場(chǎng)具有巨大潛力和重要地位，在臨床上的作用和功效也無(wú)可替代。

近幾年，由于花鹿茸價(jià)格昂貴且在市場(chǎng)中求大于供，使得國(guó)內(nèi)的鹿茸制品在中藥材市場(chǎng)上偽劣品、混淆品越來(lái)越多，而目前關(guān)于鹿茸的品質(zhì)鑒定體系還不完善。因此，完善鹿茸鑒定方法，建立綜合評(píng)價(jià)鹿茸質(zhì)量對(duì)花鹿茸的開(kāi)發(fā)與利用有著極其深遠(yuǎn)的意義。本文經(jīng)過(guò)查閱大量相關(guān)文獻(xiàn)，將花鹿茸的鑒定方法及其開(kāi)發(fā)與利用進(jìn)行了歸納總結(jié)，希望為梅花鹿茸的進(jìn)一步研究提供借鑒。

1 花鹿茸的營(yíng)養(yǎng)與成分分析

鹿茸中含有豐富的多糖、蛋白質(zhì)、氨基酸以及礦物元素等營(yíng)養(yǎng)成分，這些營(yíng)養(yǎng)元素與鹿茸的品質(zhì)特征密切相關(guān)，可作為鹿茸的質(zhì)量控制和藥效研究的依據(jù)。但是，關(guān)于鹿茸品質(zhì)特征的研究很少，僅有少量文章對(duì)鹿茸的營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行了初步報(bào)道[8-9]。趙磊等[10]研究發(fā)現(xiàn)花鹿茸中除了含有水分(11.63%)、粗蛋白(角蛋白、膠原蛋白、生長(zhǎng)因子及一些蛋白質(zhì)酶類[11-14]，總含量占53.25%)、粗脂肪(2.43%)外，還含有礦物元素(Ca、P、Mg、Na、K、Fe等，其中鈣和磷的含量較高，且二者比例基本為2∶1，此外花鹿茸的Na含量較高)和氨基酸(甘氨酸、 谷氨酸、 脯氨酸、丙氨酸、賴氨酸、天冬氨酸等，前三種含量最高)。通過(guò)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，梅花鹿與馬鹿鹿茸中水分、粗蛋白、粗脂肪的含量相差較小，但氨基酸含量相差較大，花鹿茸的氨基酸含量為30.53%～39.87%[10]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道, 鹿茸中還含有豐富的維生素，如維生素B1、B2、B6、A 、E 、C等[15-16]。楊若明等[8]通過(guò)對(duì)比馬鹿茸、梅花鹿和麋鹿茸的維生素發(fā)現(xiàn)，三者均含有維生素B2和微量尼克酸，但是維生素E只存在于馬鹿茸中。

2 花鹿茸質(zhì)量分析的鑒定方法

鹿茸的傳統(tǒng)鑒定主要包含性狀鑒定、顯微鑒定、理化鑒定等。近20多年來(lái)，不少藥學(xué)工作者不斷嘗試應(yīng)用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)來(lái)解決鹿茸類中藥的質(zhì)量評(píng)價(jià)問(wèn)題，目前已取得一定的進(jìn)展。王靜竹等[17]測(cè)定鹿茸與鹿角中氨基酸的含量時(shí)發(fā)現(xiàn)，各等級(jí)鹿茸、鹿角中氨基酸總含量存在一定的差異，其大小可排列為臘片>粉片>紗片>鹿茸粉>鹿角，經(jīng)過(guò)評(píng)定分析認(rèn)為：多糖與鉀鈉鈣磷和鎂質(zhì)量分?jǐn)?shù)變化的規(guī)律性可以作為評(píng)定鹿茸質(zhì)量的內(nèi)在指標(biāo)。

2.1 性狀鑒定

性狀鑒定是根據(jù)物理方法如外觀，氣，味，色澤，質(zhì)地以及斷面等感官特征來(lái)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，從而得出結(jié)論的一種方法。這種方法是相對(duì)最快捷方便，并且節(jié)約的方法。就花鹿茸性狀來(lái)看，外皮呈紅棕色或棕色，表面被有紅黃色或棕黃色細(xì)茸毛，形狀呈圓柱狀分枝，具有一個(gè)分枝，習(xí)稱“二杠”，主枝習(xí)稱“大挺”，長(zhǎng)170～200mm，鋸口直徑40～50mm，離鋸口1cm左右分出的側(cè)枝習(xí)稱“門莊”，長(zhǎng)90～150mm，直徑比主枝略細(xì)[18]。相對(duì)馬鹿茸來(lái)說(shuō)，花鹿茸的側(cè)枝較少，性狀鑒別快捷方便，但是這種方法的主觀性較強(qiáng)，對(duì)鑒別人員的技術(shù)與經(jīng)驗(yàn)要求高，且只能鑒別具有特定宏觀可視特征的鹿茸藥材、飲片或粉末，而對(duì)于一些不具外觀可視特征的鹿茸深加工產(chǎn)品來(lái)說(shuō)，鑒定則較為困難。

2.2 顯微鑒定

利用顯微鏡觀察藥材切片的內(nèi)部組織構(gòu)造、細(xì)胞形態(tài)，從而進(jìn)行品種和質(zhì)量鑒定的方法。這種方法主要適用于外形不適用于采用性狀鑒定、藥材有破損或者呈粉末狀的。陳代賢等[19]對(duì)商品中出現(xiàn)的11 種鹿茸進(jìn)行了主要顯微組織比較鑒別。這里主要對(duì)比一下馬鹿和梅花鹿的區(qū)別，分別從茸毛直徑、鱗片的排列方式以及髓質(zhì)形狀來(lái)進(jìn)行說(shuō)明。馬鹿的中部直徑為15～70μm，鱗片排列方式為平行狀，髓質(zhì)形狀多為梯紋狀；梅花鹿的中部直徑13～60μm，鱗片排列方式多為復(fù)瓦狀，髓質(zhì)形狀多為連珠狀。劉麗[20]等對(duì)馬鹿、梅花鹿等6種鹿茸茸毛進(jìn)行顯微特征比較發(fā)現(xiàn)，不同鹿茸茸毛在長(zhǎng)度、顏色、髓質(zhì)直徑、毛尖無(wú)髓質(zhì)長(zhǎng)等方面存在顯微特征差異。魏曉明等[21]通過(guò)顯微組織特征比較對(duì)鹿角及商品中常見(jiàn)的8種類似品，發(fā)現(xiàn)其外表層、頹廢層、環(huán)形骨板紋理及骨疏質(zhì)部等存在差異。雖然顯微鑒定從微觀的方面補(bǔ)充了對(duì)鹿茸鑒別的知識(shí)，但是這一方法由于不能揭示細(xì)胞內(nèi)在的信息，因此無(wú)法完成近源物種的精準(zhǔn)鑒別。

2.3 現(xiàn)代生物技術(shù)鑒定

鹿茸傳統(tǒng)的鑒定主要是從外觀、質(zhì)地、形態(tài)、顏色等方面進(jìn)行分辨，需要豐富的經(jīng)驗(yàn)。但是，由于鹿茸價(jià)格高且供不應(yīng)求使得我國(guó)的市場(chǎng)中鹿茸混淆品較多，單純從外在形態(tài)等方面對(duì)其進(jìn)行鑒定存在一定的難度[22]。隨著生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，現(xiàn)代生物技術(shù)越來(lái)越多地應(yīng)用于中藥材的鑒別研究中，如紫外光譜法、電泳法、X射線衍射Fourier指紋圖譜、紅外光譜等。

2.3.1 紫外光譜法。安宏等[22]將花鹿茸、馬鹿茸、鹿茸片、鹿茸粉和花鹿茸骨化部分按照一定方法提純后，測(cè)定了其在200～350nm處的吸收光譜，研究發(fā)現(xiàn)花鹿茸、馬鹿茸和鹿茸片在波長(zhǎng)253nm和238±2nm處有最大和最小吸收峰，而鹿茸粉和花鹿茸骨化部分在此外無(wú)最大吸收。該研究表明可以利用各鹿茸制品提取物的紫外光譜對(duì)其進(jìn)行真假及品質(zhì)鑒定。

2.3.2 HPLC指紋圖譜鑒定。曹越等[23]采用HPLC-DAD 方法對(duì)不同產(chǎn)地的梅花鹿茸藥材進(jìn)行了指紋圖譜分析，同時(shí)運(yùn)用主成分分析對(duì)馬鹿茸和花鹿茸進(jìn)行模式識(shí)別研究，發(fā)現(xiàn)10批不同梅花鹿茸藥材的指紋圖譜有10 個(gè)共有峰，且相似度較好，均在在0.8以上。此外，通過(guò)主成分分析發(fā)現(xiàn)可以將梅花鹿茸、東馬鹿茸和西馬鹿茸清楚的分開(kāi)。曹越等所建立的花鹿茸HPLC 指紋圖譜及花鹿茸、馬鹿茸的主成分分析模式方法具有快速穩(wěn)定的特點(diǎn)，能夠?qū)?lái)自不同產(chǎn)地的花鹿茸藥材進(jìn)行質(zhì)量鑒定，也可為其他動(dòng)物來(lái)源藥材的質(zhì)量鑒別與控制方法的研究提供參考。

2.3.3 電泳法鑒定。丁倩男等[24]對(duì)不同部位鹿茸的蛋白圖譜差異進(jìn)行了比較，表明不同部位總蛋白含量及蛋白點(diǎn)數(shù)從頂端到基部呈現(xiàn)依次降低的趨勢(shì)，其中有18個(gè)蛋白點(diǎn)存在差異，為從蛋白組成的角度建立鹿茸質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)的方法提供了參考及依據(jù)。朱云飛等[25]采用蛋白溶解液法提取不同鹿茸中的蛋白，利用SDS-PAGE凝膠電泳法分析馬鹿、新西蘭赤鹿、花鹿茸和馴鹿的蛋白差異，結(jié)果表明，用7.5%分離膠系統(tǒng)分離得到的4種鹿茸的水溶性蛋白，其蛋白條帶存在差異，且在該分離膠系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)梅花鹿排血紗片在 34 KD 和 35 KD 處有明顯的蛋白條帶，而其余3種鹿茸未出現(xiàn)該蛋白條帶，因此，該條帶可能是花鹿茸區(qū)別于其他3 種鹿茸的特征條帶。

2.3.4 紅外光譜鑒定。董思敏[26]采用紅外光譜對(duì)花鹿茸、馴鹿茸、新西蘭赤鹿、中國(guó)馬鹿進(jìn)行了分析，結(jié)果表明不同來(lái)源的鹿茸特征吸收峰、峰數(shù)、峰強(qiáng)、峰位存在差異，因此，可以通過(guò)紅外光譜對(duì)不同鹿源鹿茸及不同品種的花鹿茸進(jìn)行區(qū)分，為鹿茸的鑒定和質(zhì)量控制提供一種方法和手段。

2.3.5 其他。除了上述這些方法外，隨著分子生物學(xué)技術(shù)及光譜等的進(jìn)一步深入，人們逐漸采用基因鑒定等方法對(duì)不同品種的鹿茸進(jìn)行區(qū)分及鑒定。

3 花鹿茸的開(kāi)發(fā)及應(yīng)用

鹿茸茸血、茸皮、茸膠是用來(lái)開(kāi)發(fā)及應(yīng)用的主要材料如鋸茸血、抽茸血、鹿茸膠等等。根據(jù)鹿茸的主要化學(xué)成分和生物活性進(jìn)行概述。鹿(茸)血液主要成分是水， 約占80%以上。干物質(zhì)中所含成分如酶類、糖類、氨基酸、維生素、脂類、礦物質(zhì)、激素等與鹿茸成分相似，但是茸血激素含量高于鹿茸。

3.1 茸血

鋸茸血是鋸鹿茸時(shí)收集的血，對(duì)鹿茸和鋸茸血所含的氨基酸和無(wú)機(jī)元素進(jìn)行分析，結(jié)果表明，鋸茸血中除色氨酸外，還含有與鹿茸相同的17種氨基酸，其中7種為非必須氨基酸，總含量最高可達(dá)50.62%，而花鹿茸為57.32%。尤其是鋸茸血中的組氨酸及賴氨酸含量分別是馬鹿鹿茸的1.5倍和3.2倍。此外，花鹿茸中僅含有微量胱氨酸。經(jīng)對(duì)無(wú)機(jī)元素的分析測(cè)定可得花鹿茸與鋸鹿茸中都含有輔酶、酶、激素維生素等，但是花鹿的鋸茸血中的鈣鎂磷含量低于花鹿茸[27]。

3.2 茸皮和茸膠

鹿茸表面帶有絨毛的皮膚叫做茸皮，是其頭部皮膚延伸的產(chǎn)物，由真皮、表皮及一些附屬器官構(gòu)成，對(duì)鹿茸的生長(zhǎng)及再生起著一定的營(yíng)養(yǎng)與保護(hù)作用，會(huì)在茸角生長(zhǎng)結(jié)束后自行脫落[28-30]。此外，茸皮可以與茸干保持同步生長(zhǎng)，且鹿茸頂部的茸皮還能不斷分化出新的毛囊[28]。其理化性質(zhì)與鹿角膠極其相似，且氨基酸種類和含量與鹿角膠、阿膠基本相同。鹿茸膠是生產(chǎn)鹿茸精過(guò)程中的副產(chǎn)品，仍含有多種有效成分[31]。陳建南等[27]研究發(fā)現(xiàn)去了茸皮的茸膠中含16～18種氨基酸，且各氨基酸含量大都比鹿角膠較高。高品奇等[31]對(duì)鹿茸膠中的磷脂類成分進(jìn)行了分析，結(jié)果表明，鹿茸膠中含有豐富的棕櫚酸、硬脂酸、油酸等。因此，從蛋白質(zhì)的補(bǔ)充，增加機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)，補(bǔ)充微量元素來(lái)看，茸皮及茸膠的利用與開(kāi)發(fā)有著很好的前景。

3.3 鹿茸的化學(xué)成分

3.3.1 堿基成分。堿基成分是鹿茸中研究較多的一類具有抗氧化和抗衰老功效的成分，宗穎等[32]從梅花鹿茸中分離得到了11個(gè)化合物，經(jīng)鑒定分別為尿嘧啶、尿苷、次黃嘌呤、肌苷、鳥(niǎo)苷、鳥(niǎo)嘌呤、胸苷、胸腺嘧啶、腺苷、胞苷及2’-脫氧鳥(niǎo)苷。且通過(guò)對(duì)11種化合物細(xì)胞增殖活性的研究發(fā)現(xiàn)總堿、尿嘧啶、腺苷具有顯著的促小鼠脾細(xì)胞增值的活性。

3.3.2 甾體類化合物。甾體化合物也是鹿茸中一類具有重要活性的物質(zhì)，吉靜嫻等[33]的研究表明，鹿茸中所含甾類衍生物具有強(qiáng)心、抗炎等生物活性。研究發(fā)現(xiàn)[34-37]，甾體化合物中含有重要的活性物質(zhì)，如性激素(睪酮、雌酮、孕酮等)和膽固醇(膽固醇內(nèi)豆蔻酸酯、膽固醇油酸酯、膽固醇軟脂酸酯及膽固醇硬脂酸酯等)等。楊若明等[37]采用不同的方法分析和測(cè)定了麋鹿茸中多種性激素的含量。此外，有學(xué)者從鹿茸層提取出了前列腺素樣物質(zhì)。

3.3.3 蛋白質(zhì)、氨基酸及多肽。鹿茸除富含膠原蛋白、角蛋白、生長(zhǎng)因子(胰島素樣生長(zhǎng)因子、神經(jīng)生長(zhǎng)因子等)等多肽類物質(zhì)外，還含有一些蛋白質(zhì)酶類，如SOD酶(超氧化物歧化酶)、磷酸酶、琥珀酸脫氫酶及乳酸脫氫酶等[38-39,13]。此外，研究發(fā)現(xiàn)[10,40]鹿茸富含氨基酸，且種類高達(dá)19種，其總量通常介于30%～50%之間，其中以馬鹿茸含量最高達(dá)50%，其中以谷氨酸、甘氨酸、亮氨酸、脯氨酸、精氨酸最多，而蛋氨酸含量最低。

3.3.4 無(wú)機(jī)元素、多糖。鹿茸中含有大量的無(wú)機(jī)成分，這些無(wú)機(jī)元素特別是微量元素也發(fā)揮著一定的藥理作用，逐漸引起大家對(duì)這類成分的研究。有學(xué)者[10]從茸角和鹿茸精檢測(cè)出了多種無(wú)機(jī)元素，包括Ca、P、Mg、Na、K、Fe等，其中鈣和磷的含量較高。汪樹(shù)理等[41]對(duì)10支東北梅花鹿鹿茸的各部位的多糖和無(wú)機(jī)成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)進(jìn)行了分析，結(jié)果表明各部位多糖和無(wú)機(jī)元素質(zhì)量間差異極顯著或顯著。從臘片到骨片部位， 多糖、K和Na的質(zhì)量分?jǐn)?shù)呈現(xiàn)降低趨勢(shì)，而Ca、P、Mg的質(zhì)量分?jǐn)?shù)呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。Cu、Zn、Fe和Mn的質(zhì)量分?jǐn)?shù)無(wú)規(guī)律性。因此，多糖與K、Na、Ca、P和Mg的質(zhì)量分?jǐn)?shù)變化的規(guī)律性可以作為評(píng)價(jià)東北梅花鹿茸的內(nèi)在指標(biāo)。

3.4 鹿茸的生物活性及開(kāi)發(fā)應(yīng)用

研究表明鹿茸具有抗氧化、延緩衰老、保護(hù)心血管系統(tǒng)、促進(jìn)骨折愈合、抗應(yīng)激、抑制輻射誘導(dǎo)脊髓神經(jīng)細(xì)胞凋亡、提高性功能、增強(qiáng)免疫功能、保護(hù)肝臟、防治骨質(zhì)疏松、提高耐力、抗腫瘤等作用。雖然鹿茸含有各種營(yíng)養(yǎng)成分且具有多種生物活性，但是，各生物活性的作用機(jī)制尚不明確，目前很少應(yīng)用于臨床。因此，對(duì)于鹿茸的生物活性及安全性等需要進(jìn)一步的探討與研究。

4 展望

隨著對(duì)鹿茸產(chǎn)品功能性質(zhì)研究的深入，鹿茸的開(kāi)發(fā)利用也變得更具有價(jià)值。目前，鹿茸作為一種名貴的中藥材，己被廣泛應(yīng)用于我國(guó)保健食品、保健藥品、生物制藥等行業(yè)中。此外，隨著醫(yī)療保健用途的擴(kuò)大和市場(chǎng)開(kāi)發(fā)，我國(guó)鹿駕及鹿源系列中藥的來(lái)源將更為復(fù)雜多樣，因此對(duì)于鑒別方法準(zhǔn)確度的要求更高，需要由簡(jiǎn)單的性狀、顯微和理化鑒別發(fā)展為多學(xué)科、多層次、多組分指紋圖譜技術(shù)的綜合鑒定。

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