丹參顆粒劑的制備及質(zhì)量考察

王樹巍，任君剛 ,趙 賀

(1.哈爾濱商業(yè)大學 生命科學與環(huán)境科學研究中心，哈爾濱 150076; 2.哈爾濱商業(yè)大學 藥學院，哈爾濱 150076)

丹參又名赤參，唇形科植物，產(chǎn)地廣闊，丹參是我國應用最廣泛的藥用植物之一，丹參顆粒劑具有活血化瘀，理氣止痛的作用，主要用于冠心病、心絞痛、高血脂及心腦血管循環(huán)功能障礙引起的頭痛、心肌缺血、記憶力減退等癥.顆粒劑是指與適宜的輔料制成具有一定粒度的干燥顆粒狀的制劑[1-5].顆粒劑與其他劑型相比，顆粒劑有許多特點，顆粒劑可分散在水和其他適宜的液體中服用，也可直接吞服[6].顆粒劑有不同的分類，有泡騰式顆粒劑、可溶性顆粒劑、混懸性顆粒劑，各類型各有優(yōu)點[7-9].顆粒劑與散劑相比，顆粒劑有許多特點：飛散性、附著性、聚集性、吸濕性、等[10-11]；但顆粒劑由于粒子大小不一，在用容量法分劑量時不易準確，且?guī)追N密度不同及數(shù)量不同的顆粒相混合是容易發(fā)生分層現(xiàn)象[12-14].丹參顆粒劑對多種疾病有治療作用，例如：其對實驗性缺血心肌有保護作用，并且對凝血系統(tǒng)也有保護作用，丹參顆粒劑可以定向的作用于某一部位，增強藥物的作用[15].丹參顆粒劑有利于丹參的有效成分在人體機體內(nèi)的吸收分布及代謝排除，丹參的質(zhì)量檢查對其也有重要意義，丹參顆粒劑要嚴格按照質(zhì)量標準進行質(zhì)量比測定，質(zhì)量檢查對其顆粒劑的制備是否合格具有重要意義[16].中藥制劑是中藥中非常重要的組成部分，隨著古今劑型的演變、形成和發(fā)展，以及社會的進步，科學技術(shù)的發(fā)展，中藥顆粒劑已發(fā)揮了它無可替代的作用.

1 材料

1.1 主要試劑及樣品

丹參粉(Z20013179)(上海綠谷制藥有限公司), 淀粉(GB/T 8885)(華潤賽力事玉米有限公司), 甲醇(上海振興化一工廠), 乳糖(山東豐泰生物科技有限公司), 異丙醇(天津市福晨化學試劑廠), 無水乙醇(上海振興化工一廠), 正丁醇(上海振興化工一廠), 醋酸(鄭州化學試劑三廠), 氨水(武漢市聯(lián)堿廠), 已腈(上海振興化工一廠), 微粉硅膠(湖州展望化學藥業(yè)有限公司), 微晶纖維素(湖州展望化學藥業(yè)有限公司), 丹參酮IIA對照品(110766-200619)(中國藥品生物制品檢定所), 乙酸乙酯(天津市耀華化學試劑廠), 苯(天津市耀華化學試劑廠), 三氯甲烷(天津市耀華化學試劑廠).

1.2 主要儀器

LC-20A高效液相色譜儀(上海伍豐科學儀器有限公司), AG285電子天平(上海精密儀器儀表有限公司), SHZ-95B循環(huán)水式多用真空泵(鞏義市科瑞儀器有限公司), DHG-9140A型鼓風干燥箱(上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠), KQ2200型超聲波過濾器(昆山市超聲波儀器有限公司), 標準檢驗篩(上海豐行篩網(wǎng)制造有限公司), 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(鄭州長城科工貿(mào)有限公司), HH-2型數(shù)顯恒溫水浴鍋(江蘇榮華儀器制造有限公司), 薄層層析缸(上海信誼), 98-1-B型電子調(diào)溫電熱套(天津市泰斯特儀器有限公司).

2 實驗方法

2.1 顆粒劑制備方法的建立

準確量取適量的丹參粉末，提取2次，每次1 h，將2次提取所得溶液混合，濃縮制成稠浸膏，減壓處理使稠浸膏的相對密度為1.10-～1.14(80 ℃熱測).加入輔料，混勻，60 ℃干燥處理，繼續(xù)加入適量輔料，混勻，90%乙醇潤濕，制備軟材，均勻噴入物料，過16目篩，在50～60 ℃的環(huán)境下進行干燥，在相對濕度73%以下的環(huán)境中整粒，以5g/袋的標準分裝即得.

2.2 測定方法學的建立

2.2.1 丹參顆粒劑的定性分析

本實驗采用薄層色譜法對丹參顆粒劑進行定性分析.

1)供試品溶液的制備

①準確量取丹參粉5.00 g置于錐形瓶中，加入一定量的正己烷，超聲提取1 h，過濾，回收溶液，得樣品溶液A.②準確量取丹參粉5.00 g置于錐形瓶中，加入適量的石油醚，超聲提取1 h，過濾，回收溶液，得樣品溶液B.③取丹參酮IIA樣品溶液，作為樣品溶液C.

2)丹參酮IIA對照品溶液的制備

準確稱取丹參酮IIA對照品0.500 g，加入甲醇溶液進行超聲溶解，將溶液轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶，甲醇定容至刻度，搖勻，得丹參酮IIA對照品溶液.

3)丹參酮IIA的薄層鑒定

取實驗中所配置的對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液，分別點樣于薄層色譜板上，以展開劑苯-氯仿-乙醇(49∶49∶2)展開.

2.2.2 丹參顆粒劑的定量分析

本實驗采用高效液相色譜法對丹參顆粒劑進行定量分析.

1)色譜柱的選擇

本實驗色譜柱為Optimusil C18(250 mm×4.6 mm，5 μL)，檢測波長270 nm，流動相為已腈-0.2%乙酸，實驗溫度為25 ℃，流速為0.6 mL/min.

2)樣品溶液的制備

精準的量取丹參粉末一定量，加入正己烷，在KQ2200型超聲波過濾器中進行過濾處理，回收濾液，將所剩殘渣按上述步驟重新處理，回收濾液，將倆次所得濾液混合置于容量瓶中，用正己烷定容至刻度線，即得樣品溶液.

3)對照品溶液的制備

準確的稱取丹參酮IIA對照品一定量置于燒杯中，加入適量的甲醇溶液進行超聲溶解，將所得溶液置于容量瓶中，甲醇定容置刻度，搖勻，即得對照品溶液.

4)供試品制備

吸取一定量的樣品溶液，蒸干得固體，加入甲醇進行超聲溶解，將所得藥品置于容量瓶中，甲醇定容至刻度，搖勻，即得供試品溶液.

5)樣品測定

樣品溶液和供試品溶液進樣量各5 μL，在色譜柱為Optimusil C18(250 mm×4.6 mm，5 μL)，已腈-0.2%乙酸為流動相，流動速度大約為0.6 mL/min，檢測波長為270 nm的條件下進行測定.

3 實驗結(jié)果

3.1 丹參酮IIA的薄層鑒定

結(jié)果如圖1所示.

圖1 丹參薄層色譜圖

3.2 丹參酮IIA的質(zhì)量比測定結(jié)果

3.2.1 丹參酮IIA質(zhì)量比的測定

分別精確量取樣品溶液和供試品溶液各5μL，按上述色譜條件進行測定，樣品色譜峰如圖2所示，對照品色譜峰如圖3所示.

圖2 樣品色譜峰I

3.2.2 標準曲線的繪制

分別取對照標準品溶液5、10、15、20、25 μL點在同一薄層板上,以石油醚一乙酸乙酯為展開劑,上行展開,在波長520 nm下掃描,測量峰面積積分值,結(jié)果列于表1，以對照標準品的質(zhì)量濃度為橫坐標(X),相應的峰面積積分值為縱坐標(Y)，繪制標準曲線圖，進行線性回歸.結(jié)果在0.1 ～0.5 mg/mL范圍內(nèi)與峰面積關(guān)系良好，回歸方程為y=106 599x+31 130，R2=0.999 6.標準曲線如圖4所示.

圖3 丹參色譜峰及陰性色譜峰

對照標準品體積/μL對照標準品質(zhì)量濃度/(mg·mL-1)峰面積50.141487100.252489150.363565200.473954250.584054

圖4 丹參酮IIA質(zhì)量濃度測定標準曲線

3.2.3 丹參酮IIA質(zhì)量比測定結(jié)果(n=3)

對不同批次的丹參顆粒劑處理3個樣品，進行測定，求平均值，丹參酮IIA質(zhì)量比如圖如表2所示.

表2測定結(jié)果

批號丹參酮IIA質(zhì)量比/(mg·g-1)丹參酮IIA質(zhì)量比平均值/(mg·g-1)201604208.231201604218.3928.305201604228.293

3.2.4 精密度實驗結(jié)果

準確量取對照品溶液和供試品溶液，重復進樣5次，丹參重現(xiàn)性RSD<2%,見表3.

表3精密度實驗結(jié)果

藥物質(zhì)量濃度/(mg·mL-1)峰面積RSD/%1.5485578231.5485619450.581.5485619531.5485619181.548561723

試驗證明，精密度良好.

3.2.5 穩(wěn)定性實驗結(jié)果

取樣品供試品溶液，在同一工作日不同時間段進行測量.測得樣品峰面積<2%，結(jié)果見表4.

表4穩(wěn)定性實驗結(jié)果

t/h質(zhì)量濃度/(mg·mL-1)進樣/μL峰面積RSD/%01.5482028753331.5482028547061.5482028817291.548202915100.76121.54820288605

實驗證明，穩(wěn)定性良好.

3.2.6 重現(xiàn)性實驗結(jié)果

取本品6份放在容量瓶中配成溶液，過濾作為供試品，如表5.

表5重現(xiàn)性實驗結(jié)果

序號質(zhì)量濃度/(mg·mL-1)進樣/μL峰面積質(zhì)量比10.51620831165.1621.0322015464110.3231.5482028655315.4842.0642055663220.6452.5802065652225.8063.09620128446530.96

實驗結(jié)果表明，重復性較好.

3.2.7 回收率測定結(jié)果

每組測3次，共測3組，如表6.

表6回收率結(jié)果

序號加入量實測量回收率/%平均值/%RSD/%110.3410.34100210.3410.2899.4199.70310.3410.3199.70420.6420.6198.89520.6420.5899.7099.460.665620.6420.6099.80730.9630.97100.03830.9630.8599.6499.85930.9630.9399.90

實驗結(jié)果表明，回收率良好.

4 結(jié) 語

在顆粒劑制備過程中，輔料的選擇對制劑成型是否成功至關(guān)重要，要按照嚴格的配比要求來進行配比，如果配比有所偏差，會嚴重影響顆粒劑的流動，制劑成型率和顆粒劑的效果的考察，同時輔料的選擇也非常重要，每種所加的輔料的性質(zhì)不同所起到的效果也有所差異.相比于干法制粒，濕法制粒是醫(yī)藥工業(yè)生產(chǎn)中最為廣泛的方法，經(jīng)過表面潤濕后顆粒劑具有外形美觀、耐磨性強、壓縮成型性好、顆粒質(zhì)量好等優(yōu)點，本實驗選擇高效液相法作為質(zhì)量比測定方法是因為高效液相法是中藥化學最為常用的一種測定中藥中有效化學成分的方法，實驗中采用高效液相色譜法分析一個樣品一般需要20 min左右，相比與其他方法，高效液相色譜法更高效，高效液相色譜法的靈敏度高，在實驗室中可測得微升數(shù)量級的進樣量，此外HPLC的色譜柱可多次使用，不易破壞樣品及易回收等優(yōu)點，此方法為本實驗帶來了諸多便利，節(jié)約了大量時間及成本，實驗所測得的主要數(shù)據(jù)如下：丹參酮IIA在0.1～0.5 mg/mL的范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，(R=0.999 6)，丹參酮IIA的平均回收率為99.67%，RSD值為0.665%，3個批號的丹參顆粒劑中丹參酮IIA的平均質(zhì)量比為8.305mg/g，所得結(jié)果均在質(zhì)量標準之內(nèi)，實驗較為成功，顆粒劑具有方便、易于患者攜帶、口感好、吸收快等特點，深受廣大患者的青睞，極具市場潛力，顆粒劑更深層次的研發(fā)也將是未來科研工作者的努力方向.

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