廣泛性腦萎縮者血漿tau蛋白、磷酸化tau蛋白水平與認(rèn)知功能的關(guān)系

申瀟竹 董燕 汪玲玲 龔晨 高鵬翔 包勤文 王新 田昌榮

廣泛性腦萎縮（global brain atrophy）是眾多疾病的病理特征，如阿爾茨海默病、帕金森氏病、皮層下缺血性血管病、腦多發(fā)性硬化等，往往伴隨大腦功能的損害[1]。然而，廣泛性腦萎縮也發(fā)生在正常老化過程中[2]。體檢或檢查中發(fā)現(xiàn)廣泛性腦萎縮的認(rèn)知功能正常者，對自身認(rèn)知功能的進(jìn)一步發(fā)展及預(yù)后充滿擔(dān)憂。Tau蛋白是一種微管相關(guān)性蛋白，具有維持微管正常生理的作用，病理狀況下，tau蛋白的某些磷基位點即可和磷酸結(jié)合發(fā)生異常過度磷酸化形成p-tau蛋白，p-tau蛋白使微管結(jié)合區(qū)自相結(jié)合而導(dǎo)致微管螺旋絲異常纏繞，形成神經(jīng)元纖維纏結(jié) （NFT）[1]。阿爾茨海默病(Alzheimer disease，AD)是影響老年人認(rèn)知功能的常見疾病，其特征性病理改變之一是NFT。目前在腦脊液中檢測tau蛋白和p-tau蛋白水平已成為AD診斷的重要生物學(xué)標(biāo)記物。研究顯示，AD患者的腦脊液中總Tau蛋白或p-tau蛋白升高，總Tau蛋白診斷的靈敏度81%，特異性90%；p-tau蛋白診斷的靈敏度80%和特異性92%[2]。NFT在腦內(nèi)的分布有一定的模式，以海馬最多，其次是杏仁核和顳葉，晚期可擴(kuò)展到額葉和顳頂聯(lián)合皮層。其分布腦區(qū)和密度與癡呆的程度相關(guān)[3]。通過比較不同認(rèn)知功能腦萎縮者血漿tau蛋白、p-tau蛋白水平差異，研究tau蛋白、p-tau蛋白水平變化是否參與腦萎縮者認(rèn)知功能損害的病理生理過程，是本研究著重解決的問題。

1 對象與方法

1.1 研究對象納入2010年1月至2017年2月在連云港市第二人民醫(yī)院就診或體檢發(fā)現(xiàn)中、重度廣泛性腦萎縮者105例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡大于等于60歲；②接受磁共振成像(MRI)掃描，且存在中度到重度的廣泛性腦萎縮。排除標(biāo)準(zhǔn)：①診斷精神分裂癥、情感性障礙、器質(zhì)性精神障礙及精神發(fā)育遲滯；②明顯失明、耳聾及言語表達(dá)困難的；③認(rèn)知功能正常，但已服用膽堿酯酶抑制劑的者。

在這些患者返院隨訪或電話通知來院隨訪時簽署知情同意書，自愿配合完成實驗要求的量表測試及血漿生化值檢測，課題設(shè)計已獲得院內(nèi)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 研究方法

1.2.1 一般資料收集 包括各組受試者性別、年齡、受教育程度、Y/X等一般情況。

1.2.2 研究分組 納入研究者按照美國精神障礙診斷與統(tǒng)計手冊（第4版）癡呆診斷標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)MMSE癡呆劃分標(biāo)準(zhǔn)：文盲≤17分，小學(xué)程度≤20分，中學(xué)程度(包括中專)≤22分，大學(xué)程度(包括大專)≤23分。按認(rèn)知功能不同分為2組，A組：認(rèn)知功能正常組52人，其中2例因血樣標(biāo)本不合格退出，實際完成實驗者50例；B組：癡呆組53例，其中3例因血樣標(biāo)本不合格退出，實際完成實驗者50例。

1.2.3 磁共振成像掃描 采用西門子Magnetom Harmoney 1.5T磁共振成像(MRI)掃描儀，測量XMonro孔水平的側(cè)腦室寬度和Y-Monro孔水平的頭顱最大內(nèi)橫徑，根據(jù)Vassilouthis法，計數(shù)Y／X值，5.0～6.5 為輕度腦萎縮，4.0～5.0 為中度腦萎縮，小于4.0為重度腦萎縮[4]。

1.2.4 tau蛋白、p-tau蛋白含量測定 所有受試者取空腹靜脈血5 mL置于聚丙烯EDTA抗凝管，采血后1 h內(nèi)4℃低溫離心機(jī)1000轉(zhuǎn)／分離心5 min，分離上清，分裝入Appendoff管，并存入-80°C冰箱保存。標(biāo)本采集工作結(jié)束后，統(tǒng)一進(jìn)行tau蛋白、p-tau蛋白濃度的檢測。采用上海酶研生物技術(shù)有限公司試劑盒，應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法 (ELISA)測定樣本tau蛋白、p-tau蛋白含量。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS16.0軟件，計量資料采用（±s）表示，相互比較采用t檢驗；計數(shù)資料以頻數(shù)表示，相互比較采用卡方檢驗；相關(guān)分析采用Linear線性回歸分析。檢驗水準(zhǔn)α=0.05，雙側(cè)檢驗。

2 結(jié)果

2.1 一般情況各組受試者性別、年齡、受教育程度、Y/X等一般情況比較未見統(tǒng)計學(xué)差異，癡呆組MMSE評分明顯低于正常組，P<0.05（詳見表1）。

2.2 tau蛋白、p-tau蛋白水平正常組和癡呆組tau蛋白、p-tau蛋白水平均明顯高于正常組，均P＜0.05.（詳見表 2）。

2.3 tau蛋白、p-tau蛋白與MMSE的Linear線性回歸分析以MMSE值為自變量，分別以tau蛋白、p-tau蛋白為因變量行線性回歸分析，tau蛋白、p-tau蛋白與MMSE呈負(fù)相關(guān)，P＜0.05（詳見表 3）。

表3 tau蛋白、p-tau蛋白與MMSE的Linear線性回歸分析

2.4 tau蛋白、p-tau蛋白與Y／X值的Linear線性回歸分析以Y／X值為自變量，分別以tau蛋白、p-tau蛋白為因變量行線性回歸分析，tau蛋白、ptau蛋白與Y／X值的回歸分析均未見明顯相關(guān)性，P＞0.05（詳見表 4）。

表4 tau蛋白、p-tau蛋白與Y／X值的Linear線性回歸分析

3 討論

外周血漿中可檢測出tau、p-tau蛋白，一方面與血腦屏障功能下降腦內(nèi)tau、p-tau蛋白外溢有關(guān)。血腦屏障破壞的原因可能是淀粉樣蛋白的神經(jīng)毒性作用，誘發(fā)一系列炎性反應(yīng)和氧化應(yīng)激，作用于腦微循環(huán)血管內(nèi)皮細(xì)胞，破壞內(nèi)皮細(xì)胞間的緊密連接，增加血腦屏障的通透性和滲透性[5]。另一方面，tau蛋白在人體多種組織，如血管肌細(xì)胞，也有表達(dá)。且腦脊液中異常增多的tau蛋白可能啟動了外源性tau蛋白分泌[6]。

有研究認(rèn)為腦脊液中的tau和p-tau蛋白水平越高，認(rèn)知功能損害越嚴(yán)重，外周血漿p-tau蛋白水平越高，認(rèn)知功能損害也越嚴(yán)重。p-tau蛋白水平是診斷AD的可靠生物學(xué)標(biāo)記物[7]。本研究發(fā)現(xiàn)在中、重度腦萎縮患者外周血漿中tau與p-tau蛋白在癡呆組均高于對照組。由此推斷，腦萎縮老年人血漿tau、p-tau蛋白水平升高者較tau、p-tau蛋白水平偏低者，出現(xiàn)認(rèn)知功能損害的可能性更大。國內(nèi)學(xué)者許二赫等[8]檢測中晚期AD患者血漿p-tau蛋白水平較健康對照組（未明確指出是否存在腦萎縮）升高，與本研究結(jié)論一致?？到ㄈA 等[9]研究發(fā)現(xiàn)血漿p-tau蛋白在AD組明顯高于健康組與本研究結(jié)論一致；而血漿tau在AD組和健康組的差異無統(tǒng)計學(xué)意義與本研究結(jié)論不同，tau蛋白在不同認(rèn)知功能組差異的可靠結(jié)論，有待擴(kuò)大樣本量及進(jìn)行遠(yuǎn)期隨訪調(diào)查等進(jìn)一步探討。本研究中tau蛋白與p-tau蛋白均與MMSE評分呈負(fù)相關(guān)，與腦萎縮嚴(yán)重程度Y/X值無明顯相關(guān)性，即在中、重度腦萎縮患者中，認(rèn)知水平越低，外周血漿中檢測到的tau與p-tau蛋白越高。張媚等[10]的研究亦發(fā)現(xiàn)隨著癡呆程度的加重，血漿p-tau蛋白呈上升趨勢，結(jié)論與本研究基本一致。在王珊珊等[11]的研究中，p-tau蛋白與MMES評分的相關(guān)性在輕度認(rèn)知功能障礙 （Mild cognitive impairment,MCI）組與AD組不同，MCI組MMSE評分與血清p-tau蛋白濃度呈負(fù)相關(guān)，AD組MCI組MMSE評分與血清p-tau蛋白濃度呈正相關(guān)，結(jié)論與本研究的差異可能與分組條件、MMSE評分基線水平不同有關(guān)。

綜上所述，由本研究可得出結(jié)論，tau蛋白、p-tau蛋白水平可以作為廣泛性腦萎縮患者認(rèn)知功能損害的生物學(xué)標(biāo)記物?？蔀轶w檢或臨床發(fā)現(xiàn)腦萎縮的老年人判斷或預(yù)測是否存在認(rèn)知功能損害提供依據(jù)。

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