DRD4基因rs752306多態(tài)性與蒙古族學(xué)齡兒童攻擊行為的相關(guān)性研究

王燕

摘要：為了解DRD4基因rs752306多態(tài)性與蒙古族學(xué)齡兒童攻擊行為的相關(guān)性，選取內(nèi)蒙古赤峰市天山鎮(zhèn)蒙古族實(shí)驗(yàn)小學(xué)302名7～12歲蒙古族兒童為調(diào)查對(duì)象，運(yùn)用Achenbach兒童行為量表（CBCL）評(píng)價(jià)了兒童攻擊行為得分;采集所有兒童口腔上皮細(xì)胞并提取DNA，采用iMLDR法測(cè)定了位點(diǎn)基因型;利用廣義線性模型（GLM）檢驗(yàn)了主效應(yīng)及交互作用大小。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：DRD4基因rs752306住點(diǎn)有三種基因型GG、GA、AA，攜帶A等位基因的蒙古族學(xué)齡兒童攻擊行為得分高于其他兩種基因型;蒙古族學(xué)齡兒童年齡和父親職業(yè)對(duì)蒙古族兒童攻擊行為有影響，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;蒙古族兒童年齡和rs752306多態(tài)性的主效應(yīng)及兩者的交互作用對(duì)蒙古族兒童攻擊行為有顯著影響（P<0.05）。因此，DRD4基因rs752306多態(tài)性與蒙古族兒童攻擊行為問題可能存在一定相關(guān)性。

關(guān)鍵詞：蒙古族;學(xué)齡兒童;攻擊行為;基因多態(tài)性

中圖分類號(hào)：R72

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1674-9944（2018）01-0220-04

1 引言

攻擊行為可以用多種方式評(píng)估，研究采用蘇林雁等標(biāo)準(zhǔn)化的常模評(píng)價(jià)兒童行為問題得分高低。攻擊行為是兒童青少年最常見的一種社會(huì)行為，其發(fā)生率較高。學(xué)齡期兒童的攻擊行為會(huì)持續(xù)影響其身心發(fā)展，導(dǎo)致青少年期的行為問題及成年期精神障礙甚至犯罪等[1]。雙生子研究表明，兒童攻擊行為的遺傳度為中等偏高水平51%～72%[2，3]。

近年來，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，多巴胺D4受體（D4 dopamine receptor，DRD4）基因多態(tài)性與不同行為存在相關(guān)性，包括暴力攻擊行為[4]、帕金森病[5]、酒精中毒[6]、注意缺陷多動(dòng)障礙[7]、精神分裂癥[8]、雙相情感障礙[9]、獵奇的人格特征[10]等。目前共發(fā)現(xiàn)DRD4基因有21種多態(tài)性，非編碼區(qū)存在至少18種多態(tài)性，其中rs752306（ MAF—0.18）位于DRD4基因第1內(nèi)含子中，為非編碼標(biāo)記位點(diǎn)，但其位置與編碼區(qū)非常接近。rs752306多態(tài)性干擾轉(zhuǎn)錄因子與至少5種以上位點(diǎn)的結(jié)合。Zhang等11]研究發(fā)現(xiàn)，DRD4基因rs752306多態(tài)性與兒童智力發(fā)育遲緩存在弱相關(guān)性。Docherty等[12]對(duì)基因間協(xié)同作用的機(jī)制進(jìn)行了探究，發(fā)現(xiàn)rs752306多態(tài)性與DNA甲基化相關(guān)。目前，國內(nèi)外對(duì)兒童攻擊性行為的同類研究較少，內(nèi)蒙古自治區(qū)是一個(gè)以蒙古族為主體，多民族聚居的少數(shù)民族地區(qū)，擁有多元化的文化特點(diǎn)。不同民族存在遺傳背景、文化等差異，對(duì)個(gè)體的行為發(fā)展可能會(huì)造成一定影響。因此，本研究以蒙古族學(xué)齡兒童為研究對(duì)象，報(bào)道DRD4基因rs752306多態(tài)性與攻擊行為的相關(guān)性，對(duì)于加強(qiáng)相關(guān)研究深入了解蒙古族學(xué)齡兒童心理行為問題的影響因素將有重要意義。

2 材料與方法

2.1 研究對(duì)象

以學(xué)校為單位，隨機(jī)整群抽取赤峰市天山鎮(zhèn)蒙古族實(shí)驗(yàn)小學(xué)7～12歲蒙古族學(xué)齡兒童進(jìn)行問卷調(diào)查及口腔上皮組織采集，有效樣本量302名，兒童平均年齡為9. 22±1.52歲。按照統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)篩選，被試兒童直系三代均為蒙古族，且所有個(gè)體均無心理疾病和明顯行為異常，家中無精神疾病史。本研究均在取得學(xué)校、家長的知情同意基礎(chǔ)上完成。

2.2 研究方法

2.2.1 問卷調(diào)查

由家長填寫Achenbach兒童行為量表（ChiLd Be-havior Checklist，CBCL） [13]并計(jì)算攻擊行為得分，得分越高，表明攻擊行為水平越高。該量表具有較高的信度和效度。同時(shí)，家長填寫家庭一般情況調(diào)查問卷，問卷中包括兒童性別、年齡、父母職業(yè)及文化程度等一系列家庭一般狀況。

2.2.2 全基因組DNA提取

兒童用清水漱口后，采用一次性口腔拭子刮取口腔上皮細(xì)胞，置于含樣本保存液的離心管中保存。天根試劑盒提取全基因組DNA，利用紫外分光光度計(jì)、瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)其濃度和純度。

2.2.3

DRD4基因rs752306多態(tài)性檢測(cè)

檢索與DRD4基因相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性（SingleNucleotide Polymorphisms，SNP）位點(diǎn)，采用的iMLDR（improved multiple ligase detection reaction）法測(cè)定位點(diǎn)基因型，上游引物：5- AGACGCCCACCAACTC-CTTCAT -3;下游引物：5- GTAGGGACAGGGACGGGGAAC -3。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（ polymerasechain reaction，PCR）體系：lx GC -I buffer，3.o mMMg2+，0.3 mM dNTP，l U HotStarTaq polymerase，lμL樣本DNA和上下游各1μL引物。PCR循環(huán)程序：95℃2 min預(yù)變性，94℃20 s變性，65℃40 s退火，72℃1.5 min延伸，72℃2 min后延伸，4℃forever。然后進(jìn)行產(chǎn)物純化：在20 μL PCR產(chǎn)物中加入5 U SAP酶和2 U Exonuclease I酶，37℃溫浴th然后75℃滅活15 min。連接引物：FC; TTCCGCGTTCGGACT-GATATGGCYGCACGAGCATCCTGAC

FT： TACGGTTATTCGGGCTCCTGTGGCYGCACGAGCATCCTGAT

RP： CTGCTCCTCGGTTCCCCGTTTTTTTTT

連接反應(yīng)體系：連接緩沖液lμL、高溫連接酶0. 25μL、5連接引物混合液（μM）0.4μL，3連接引物混合液（2 μM）O.4 μL、純化后多重PCR產(chǎn)物2μL、ddH206μL混勻。連接程序：94℃1 min變性，56℃4 min退火延伸，38次循環(huán)，4℃保存。取0.5μL稀釋后的連接產(chǎn)物，上ABI3730XL毛細(xì)管電泳儀，收集數(shù)據(jù)分析。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS 16.O統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與分析。運(yùn)用KoLmogorow Smirnov檢驗(yàn)對(duì)攻擊行為得分進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)。單因素分析采用非參數(shù)檢驗(yàn)，兩個(gè)獨(dú)立樣本比較采用Kolmogorov - Smirnov Z檢驗(yàn)（簡稱K-S檢驗(yàn)），多個(gè)獨(dú)立樣本間比較采用Kruskal Wallis檢驗(yàn)（簡稱K-W檢驗(yàn)）;多因素分析采用廣義線性模型（GeneraLized Linear Models，GLM）檢驗(yàn)主效應(yīng)及交互作用大小。

3 結(jié)果

3.1 Hardy- Weinberg平衡的吻合度檢驗(yàn)

對(duì)DRD4基因rs752306位點(diǎn)進(jìn)行Hardy - Weinberg平衡吻合度檢驗(yàn)。結(jié)果顯示，該位點(diǎn)的基因型（GG、GA、AA）期望值與觀測(cè)值吻合度較好（x²=2. 733，P>O05），符合Hardy- Weinberg平衡定律。

3.2 DRD4基因rs752306多態(tài)性對(duì)蒙古族學(xué)齡兒童攻擊行為得分的影響

經(jīng)非參數(shù)檢驗(yàn)分析，DRD4基因rs752306多態(tài)性與蒙古族兒童攻擊行為問題得分可能存在相關(guān)性（ x²=5.908，P=O.05），P值接近統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)臨界值（見表1），攜帶A等位基因的蒙古族學(xué)齡兒童攻擊行為得分高于其他兩種基因型。

3.3 影響蒙古族學(xué)齡兒童攻擊行為得分的單因素分析

以蒙古族學(xué)齡兒童攻擊行為得分為因變量，以可能影響攻擊行為得分的性別、年齡、父母職業(yè)、父母文化程度等因素為自變量，進(jìn)行單因素分析。結(jié)果顯示，年齡、父親職業(yè)是蒙古族兒童攻擊行為得分的影響因素（P<0.05），11～12歲蒙古族兒童攻擊行為得分明顯高于其他年齡段，父親職業(yè)為企事業(yè)的蒙古族兒童攻擊行為得分明顯低于其他職業(yè)，見表2。因此，將年齡分為低年齡段（7～lO歲）和高年齡段（11～12歲）兩組，父親職業(yè)分為“企事業(yè)”和“其他”兩組進(jìn)行多因素分析。

3.4 DRD4基因rs752306多態(tài)性與環(huán)境因素交互作用對(duì)蒙古族學(xué)齡兒童攻擊行為的影響

將蒙古族兒童攻擊行為得分作為因變量，年齡、父親職業(yè)為自變量，進(jìn)行廣義線性模型（Generalized Line-ar Models，GLM）分析主效應(yīng)及交互作用對(duì)攻擊行為的影響。由于rs752306的AA基因型出現(xiàn)次數(shù)很少，因此，在進(jìn)行主效應(yīng)與交互作用時(shí)將AA基因型與GA基因型進(jìn)行了合并。結(jié)果顯示，兒童年齡和rs752306多態(tài)性的主效應(yīng)及兩者的交互作用對(duì)蒙古族兒童攻擊行為有顯著影響（P<0.05），見表3。

4 討論

據(jù)WHO報(bào)告顯示，全世界10%～20%的兒童青少年患有精神障礙，精神疾病是導(dǎo)致自殘、自殺等的主要原因。由中國兒童中心（CNCC）最近公布的數(shù)據(jù)顯示，在中國至少有3000萬名17歲以下兒童青少年表現(xiàn)出一系列的行為問題[14]。近年來，隨著城鎮(zhèn)化進(jìn)程加快，大多數(shù)來自牧區(qū)或農(nóng)村的蒙古學(xué)齡兒童到城市求學(xué)，他們寄宿在學(xué)校、親戚家或者由爺爺奶奶等陪讀，父母沒有更多時(shí)間照顧兒童的身心問題，導(dǎo)致父母與兒童關(guān)系越來越緊張，兒童出現(xiàn)的心理行為問題可能得不到及時(shí)指導(dǎo)和治療。攻擊行為是一種最常見的心理行為問題，嚴(yán)重會(huì)導(dǎo)致暴力、犯罪等行為的發(fā)生[15]。Ettekal等[1]研究發(fā)現(xiàn)，兒童早期的攻擊行為會(huì)隨年齡不斷增加，持續(xù)到兒童后期且更具有敵意。與本研究結(jié)果相似，11～12歲兒童的攻擊行為得分明顯高于其他年齡段。因此，兒童心理行為問題應(yīng)早預(yù)防、早發(fā)現(xiàn)及早治療，對(duì)其健康成長非常重要。此外，父親職業(yè)是企事業(yè)的蒙古族兒童攻擊行為得分低于其他父親職業(yè)的兒童（P

DRD4基因位于人類第11號(hào)染色體短臂15區(qū)5帶（11P15.5），具有5個(gè)外顯子，4個(gè)內(nèi)含子。DRD4基因mRNA主要集中分布于大腦皮層的邊緣系統(tǒng)，提示在認(rèn)知與情緒方面具有重要作用[17]。目前，DRD4基因第3外顯子48bp多態(tài)性及編碼區(qū)SNP位點(diǎn)如rs1800955、rs936461是注意缺陷多動(dòng)障礙、攻擊行為、認(rèn)知能力及人格特質(zhì)等研究的熱點(diǎn)[18～20]，而位于非編碼區(qū)SNP位點(diǎn)相關(guān)研究較為罕見，非編碼區(qū)序列有與RNA聚合酶的結(jié)合位點(diǎn)，它的調(diào)控作用不容忽視。研究表明rs752306多態(tài)性具有干擾轉(zhuǎn)錄因子與位點(diǎn)結(jié)合的功能[12]。

本研究中rs752306多態(tài)性基因型出現(xiàn)頻率（GG：79.14%，GA：18. 54%，AA：2.31%）與Lee等[21]對(duì)韓國人群研究結(jié)果基本一致。另外，經(jīng)非參數(shù)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，rs752306多態(tài)性與攻擊行為可能存在相關(guān)性，攜帶A型等位基因的蒙古族學(xué)齡兒童攻擊行為得分最高，更容易發(fā)生攻擊行為。因此，對(duì)于攜帶有A型等位基因的兒童，教養(yǎng)時(shí)更應(yīng)注意適度關(guān)注兒童的發(fā)展，給與其多方面的愛護(hù)，從而減少兒童心理行為問題的發(fā)生。本研究還發(fā)現(xiàn)，rs752306多態(tài)性與年齡的交互作用對(duì)攻擊行為得分的影響具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示攜帶A等位基因的高年齡段蒙古族兒童可能更容易發(fā)生攻擊行為，G等位基因的保護(hù)作用只有在低年齡段時(shí)才能體現(xiàn)。因此，攜帶A等位基因蒙古族兒童攻擊行為在低年齡段就應(yīng)該需要得到較多關(guān)注。

以往的研究中忽略DRD4基因非編碼區(qū)多態(tài)性的作用及功能，本研究以蒙古族學(xué)齡兒童為對(duì)象探討了rs752306多態(tài)性與攻擊行為的相關(guān)性問題，其研究結(jié)果可為相關(guān)研究提供一定線索。今后可考慮對(duì)更多蒙古族族群兒童心理行為問題進(jìn)行研究，同時(shí)考慮分析多個(gè)基因?qū)γ晒抛鍍和睦硇袨閱栴}的協(xié)同作用，并結(jié)合蒙古族兒童家系、雙生子及表觀遺傳學(xué)的角度開展更深入的研究。

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