基于MATLAB軌跡跟蹤研究重金屬銅對鰱幼魚自發(fā)游泳行為的影響

靖錦杰 黃應(yīng)平, 袁 喜 雷幫軍 蔣 清 涂志英,

(1. 三峽大學(xué)水利與環(huán)境學(xué)院, 宜昌 443002; 2. 三峽大學(xué)三峽地區(qū)地質(zhì)災(zāi)害與生態(tài)環(huán)境湖北省協(xié)同創(chuàng)新中心, 宜昌 443002;3. 三峽大學(xué)計算機(jī)與信息學(xué)院, 宜昌 443002; 4. 三峽庫區(qū)生態(tài)環(huán)境教育部工程研究中心, 宜昌 443002)

銅是水體常見的重金屬污染物, 對水生無脊椎動物、兩棲動物和魚類等水生生物均具有較強(qiáng)的毒性, 能通過生物富集和生物放大效應(yīng)對水生生態(tài)系統(tǒng)產(chǎn)生重要影響[1—3], 日益引起人們對其的普遍關(guān)注[4]。

鰱(Hypophthalmichthys molitrix) 屬鯉形目鯉科, 是我國四大家魚之一, 也是長江重要的經(jīng)濟(jì)魚類且廣泛分布在全國各大水系[5]。已有研究表明重金屬對鰱幼魚和魚胚胎均具有明顯的毒性[6], 且對鰱肝組織SOD和CAT活性影響顯著[7]。此外, 長江沉積物中銅的富集系數(shù)較高, 對中華倒刺鲃(Spinibarbus sinensis)的游泳能力[8]和草魚(Ctenopharyngodon idellus)幼魚的臨界游速和耗氧率均有顯著抑制作用[9]。

視頻是記錄魚類行為的一般形式。魚類行為研究的主要問題就是怎樣從拍攝的視頻中高效準(zhǔn)確的提取魚類行為數(shù)據(jù)。用傳統(tǒng)方法獲取諸如魚的位置、方向、擺幅、頻率等數(shù)據(jù)一般是通過手動測算實現(xiàn)的。手動測算具有勞動密集、主觀依賴性強(qiáng)等缺點, 從而導(dǎo)致監(jiān)測效率低、行為精準(zhǔn)度受限[10]。 近幾年來, 計算機(jī)視覺技術(shù)也應(yīng)用到魚類的行為學(xué)研究之中, Rillahan等[11]采用多臺攝影機(jī)記錄實驗魚的三維坐標(biāo)信息, 通過HTI模型291超聲波遙測系統(tǒng)精確描繪其運(yùn)動軌跡, 定量研究運(yùn)動行為, 石小濤等[12]利用Swis Track軟件分析鰱幼魚游泳行為, Huang等[13]利用一套實時監(jiān)測系統(tǒng)分析了斑馬魚(Barchydanio rerio var)對不同濃度的溴氰菊酯行為響應(yīng)關(guān)系。本研究利用MATLAB軟件, 研究重金屬銅離子濃度對鰱幼魚自發(fā)游泳行為的影響,采用原子吸收分光光度法檢測魚體內(nèi)各部位重金屬含量的變化, 從生理上分析運(yùn)動行為變化的原因,探索環(huán)境因子對魚類的影響, 為生物預(yù)警和水質(zhì)監(jiān)測等方面提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

實驗所用的鰱幼魚由宜都水產(chǎn)市場提供, 魚體長為(10.4±0.5) cm, 體質(zhì)量為(13.7±1.3) g。實驗魚在180 cm×40 cm×60 cm的魚缸中馴化2周。按照魚體重的5%, 每天08:00投喂?jié)O用配合飼料(粗蛋白質(zhì)≥45%, 脂肪≥10%, 粗纖維≤3%, 粗灰分≤17%)。用空氣泵向魚缸內(nèi)充氧, 光照為自然光照,水溫用一套循環(huán)冷水儀控制, 保證實驗裝置中水溫為(20±1)℃。實驗前禁食48h, 避免消化活動對實驗產(chǎn)生影響[14]。

1.2 實驗裝置

本文所有的視頻數(shù)據(jù)采集通過簡易計算機(jī)視覺系統(tǒng)(圖1), 該系統(tǒng)包括1個白色LED燈組成的光源、一臺攝像機(jī)和一臺含圖像采集卡電腦。LED光源安裝在水槽的正下方用來增加亮度和減少陰影, 并確保實驗魚處于均勻光照背景下進(jìn)行拍攝。攝像機(jī)安裝在實驗水槽的正上方, 鏡頭正對下方水面, 將攝像頭調(diào)到能正常覆蓋全部水槽即可[15]。試驗拍攝得到的視頻圖像分辨率為720×480像素, 幀率為15幀/s。實驗使用玻璃水槽的長×寬×高為50 cm×40 cm×25 cm, 實驗時水位為10 cm。

圖1 魚類行為視頻監(jiān)控裝置Fig. 1 The video monitoring device for fish behavior

1.3 實驗步驟

正式實驗前, 根據(jù)水質(zhì)對淡水魚急性毒性測定方法(GB 12997-91)完成預(yù)實驗, 設(shè)置5個不同水體銅濃度曝露96h, 選50尾魚測定96h-LC50的值為4.05 mg/L; 根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果, 設(shè)置5個不同濃度組(0、1、2、3、4 mg/L), 將健康的30尾魚隨機(jī)放入5個梯度水槽中暴露96h, 暴露期間不喂食, 每日定時換水(日換水量為水體的50%)并補(bǔ)充相應(yīng)濃度的CuSO4溶液以保持水體銅濃度基本恒定, 其他實驗條件不變。之后逐一將實驗魚轉(zhuǎn)移到視頻監(jiān)控裝置中(濃度和之前暴露水槽一致), 監(jiān)控記錄魚60min的行為變化, 取最后5min的運(yùn)動視頻[10], 觀察魚的呼吸頻率, 再用MATLAB軟件將圖像分割, 用光流法分析出魚體中心點的位子, 最后利用坐標(biāo)得到速度、加速度、運(yùn)動路程等關(guān)系圖; 實驗結(jié)束后, 立即將魚麻醉, 解剖, 取其肝臟、鰓、肌肉組織,利用原子吸收儀得到不同部位的重金屬銅含量。

1.4 測試方法及主要參數(shù)

呼吸頻率的測定實驗全程由高清攝像頭記錄, 現(xiàn)場視頻觀測得到魚5min呼吸頻率Vf, 呼吸頻率計算公式如下:

式中,N表示記錄時間段魚呼吸的總次數(shù),T表示記錄時長。

游泳速度、加速度及總路程的測定將實驗錄好的視頻, 導(dǎo)入到由MATLAB編程得到的CT函數(shù)中, 處理成圖片格式后進(jìn)行標(biāo)記, 運(yùn)行MATLAB軟件, 即可自動輸出實驗魚的位置坐標(biāo),利用兩點之間距離公式和速度加速度運(yùn)動學(xué)基本公式, 可得到運(yùn)動路程, 速度, 加速度等主要實驗參數(shù), 計算公式如下:

式中, ΔS表示連續(xù)兩幀時間內(nèi)實驗魚的運(yùn)動距離;Xn,Yn表示前一幀實驗魚的位置坐標(biāo);Xn+1,Yn+1表示連續(xù)的后一幀的位置坐標(biāo);Sn表示前n幀的運(yùn)動總距離;V表示實驗魚的運(yùn)動速度;a表示實驗魚的運(yùn)動加速度;Vn,Vn+1表示連續(xù)兩幀的速度; Δt表示每幀所用的時間(幀率為15幀/s)。

各組織中重金屬含量的測定在視頻錄制完畢后, 將實驗魚用丁香酚溶液(丁香酚溶液/乙醇=1/9, 5 mL混合液溶入10 L水中)麻醉(5min), 取其肝臟、鰓、肌肉組織并于-40℃低溫保存。將各組織樣本(以相同處理方法的6尾魚組織為1個樣本)稱量, 取濕重, 放置于消解罐(50 mL)中消解, 采用原子吸收分光光度計測定組織Cu2+含量。

1.5 數(shù)據(jù)處理

實驗數(shù)據(jù)以Excel 2003 進(jìn)行常規(guī)計算, 實驗數(shù)據(jù)在SPSS20.0中進(jìn)行單因素方差分析(One-way ANOVA)和最小顯著差數(shù)法(LSD)檢驗差異顯著性。統(tǒng)計數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SE), 顯著性水平為P=0.05。

2 結(jié)果

2.1 水體銅離子對鰱幼魚運(yùn)動時長和呼吸頻率的影響

急性水體銅暴露對鰱幼魚的運(yùn)動時長影響顯著(F5,29= 74.39,P≈0.000＜0.001)。隨著水體銅離子濃度增加, 運(yùn)動時長逐漸減小, 與對照組相比, 在2.00和4.00 mg/L時影響顯著(圖2)。分別比對照組減少了37.90%和72.41%; 由圖3可知, 呼吸頻率在1.00 mg/L時略有升高但不顯著, 當(dāng)濃度升至2.00和3.00 mg/L, 呼吸頻率顯著下降(P＜0.05), 在4.00 mg/L時銅離子的影響極其顯著(P＜0.001), 此時鰱呼吸壓迫明顯。

圖2 急性銅暴露對鰱幼魚運(yùn)動時間比的影響Fig. 2 The effect of acute copper exposure on the moving of juvenile silver carp

圖3 急性銅暴露對鰱幼魚呼吸頻率的影響Fig. 3 The effect of acute copper exposure on respiratory rate of juvenile silver carp

2.2 水體銅離子對鰱幼魚5min的運(yùn)動速度及加速度和總路程的影響

圖4 是在每個濃度下隨機(jī)選取一條魚分析其運(yùn)動坐標(biāo)而生成的[10]。結(jié)果表明隨著濃度的增大, 鰱幼魚的平均速度逐漸減小, 在正常情況下平均速度為44.86 mm/s, 而在最大濃度4 mg/L時, 其平均速度為29.50 mm/s, 利用最小顯著差數(shù)法(LSD)檢驗可知兩者差異顯著(組距15.36＞LSD0.01=4.146)。

加速度可以看作魚突遇危險快速逃避的能力,由圖4可知隨著濃度增加, 加速度逐漸減小, 0時的正加速度為66.98 mm/s2, 2 mg/L時為68.13 mm/s2, 但兩者差異性不明顯, 而與4 mg/L時加速度為45.18 mm/s2存在顯著差異(P＜0.05), 且所有組的實驗魚在加速運(yùn)動過程中的數(shù)值要大于減速運(yùn)動的值。

由速度圖形中提取的實驗魚運(yùn)動5min總距離可以被看作一個描述實驗魚運(yùn)動行為的單一行為參數(shù)[10]。這個總距離可以通過公式(2)得到相鄰兩點的距離再將所有小段求和得到的, 通過統(tǒng)計學(xué)分析得到5min內(nèi)運(yùn)動距離的均值和標(biāo)準(zhǔn)誤。在0和1 mg/L時并無顯著差異, 0與2和3 mg/L相比差異性明顯(P＜0.05)而在4 mg/L時差異性更加顯著(P＜0.001), 隨濃度增大, 實驗魚的總運(yùn)動距離下降(圖5)。

2.3 鰱幼魚鰓、肝臟和肌肉組織銅含量特征

采用靜水急性毒性試驗法測定銅對鰱的毒性,統(tǒng)計銅污染暴露24h、48h、96h后鰱幼魚的死亡率,由直線內(nèi)插法計算[9]獲得LC50分別為8.03、6.54和4.05 mg/L, 根據(jù)96 hLC50×0.1計算安全濃度為0.4 mg/L, 急性銅離子暴露對鰱幼魚鰓(F=1.69;P=0.498)、肝臟(F=2.37;P=0.095)和肌肉(F=1.73;P=0.298)組織干重的銅含量均無顯著影響。重金屬含量大小順序為肝臟＞鰓＞肌肉(圖6)。

3 討論

3.1 水體銅離子對鰱幼魚運(yùn)動時長和呼吸頻率的影響

運(yùn)動時長和呼吸頻率可作為直觀判斷鰱幼魚運(yùn)動能力強(qiáng)弱的參數(shù)指標(biāo), 本研究發(fā)現(xiàn), 隨著銅離子濃度升高, 鰱幼魚對應(yīng)的運(yùn)動時長和呼吸頻率均減小。相關(guān)研究表明低溫脅迫對南方鲇(Silurus meridionalis)和瓦氏黃顙魚(Pelteobaggrus vachelli)呼吸頻率影響明顯[16], 姜禮潘等[6]也發(fā)現(xiàn)熱污染對魚類呼吸頻率影響顯著, 隨著溫度的升高而逐漸變大。水體銅離子對雜交鱘白細(xì)胞、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性的影響表現(xiàn)出一定劑量效應(yīng)關(guān)系: 同一濃度時, 隨著暴露于銅離子的時間延長, 各指標(biāo)逐漸降低且白細(xì)胞和抗氧化酶活性明顯降低, 說明高濃度水體銅抑制其免疫和抗氧化功能, 隨著濃度的增大, 雜交鱘的呼吸頻率和擺尾頻率逐漸減小[17];黃溢明等[18]在研究重水體銅離子對鯽(Carassius auratus)和鯉(Cyprinus carpio)呼吸機(jī)能影響時發(fā)現(xiàn), 鯉科魚對重金屬離子較為敏感, 銅離子易與鰓上皮分泌的黏液結(jié)合成一種不溶解性的金屬蛋白質(zhì)化合物, 影響呼吸作用, 濃度越大, 影響越嚴(yán)重,結(jié)果與本研究相似。

圖4 急性銅暴露對鰱幼魚5min內(nèi)速度和加速度的影響Fig. 4 The effect of acute copper exposure on the velocity and acceleration of juvenile silver carp in 5min period

圖5 急性銅暴露對鰱幼魚5min運(yùn)動總距離的影響Fig. 5 The effect of acute copper exposure on total distance of juvenile silver carp in a 5-min period

圖6 急性銅暴露后銅離子在鰱幼魚鰓, 內(nèi)臟及肌肉中的含量Fig. 6 Copper contents of gill, liver and muscle of juvenile silver carp after acute exposure

3.2 水體銅離子暴露對鰱幼魚游泳行為的影響

游泳速度是魚類游泳能力最為直接的評價指標(biāo), 主要包括巡航(續(xù)航)游泳速度、沖刺游泳速度、臨界游泳速度等。目前, 越來越多的學(xué)者傾向于使用臨界游泳速度評價魚類的游泳能力, 但在整個魚類生活史來看, 魚類的巡航速度是最常用的1個指標(biāo), 并且魚類對環(huán)境變化反應(yīng)敏銳, 因此研究魚類自發(fā)游泳速度的變化可以作為檢測水體污染嚴(yán)重程度的一個重要指標(biāo)。Huang等[13]利用視頻技術(shù)研究斑馬魚對不同溴氰菊酯濃度短暫暴露后行為響應(yīng)關(guān)系時發(fā)現(xiàn), 在實驗開始階段, 游泳速度先增加后降低; Zhu等[12]在利用立體視覺系統(tǒng)實時監(jiān)測水生生物的3D行為時發(fā)現(xiàn), 隨著酒精濃度的增加, 金魚(Carassius auratus)的速度, 5min運(yùn)動的總路程呈增加趨勢, 這些游泳速度, 總路程, 總轉(zhuǎn)角等可以很好的描述魚類的自發(fā)運(yùn)動, 這種詳細(xì)、連續(xù)振蕩型動物運(yùn)動信息更有說服力, 更利于系統(tǒng)分類和精確區(qū)分復(fù)雜的動物表型。中華倒刺鲃幼魚在急性銅暴露96h后, 其相對臨界游泳速度、相對爆發(fā)游泳速度、最大代謝率受銅暴露影響顯著, 銅暴露導(dǎo)致以上各參數(shù)值下降[8]; 草魚幼魚的相對臨界游泳速度以及耗氧率均暴露96h后呈下降趨勢[9], 本研究發(fā)現(xiàn)隨著銅離子濃度增大, 運(yùn)動平均速度, 加速度和運(yùn)動總路程均被抑制, 結(jié)果與上述研究相似[19—21]。據(jù)文獻(xiàn)[22]報道, 水體中的銅會影響魚體內(nèi)琥珀酸脫氫酶(SDH)的活性, 從而影響體內(nèi)有氧代謝, 使魚類游泳速度, 運(yùn)動路程降低, 這也可能是本研究中的鰱在銅溶液中暴露后游泳能力下降的原因。標(biāo)記與監(jiān)測技術(shù)直接決定了行為學(xué)研究的尺度和精度, 近年來, 水生動物行為學(xué)的研究開始采用基于計算機(jī)視覺系統(tǒng)的圖像處理技術(shù), 潘洋等[23]通過視頻檢測方法, 建立了刺參運(yùn)動行為評價體系,以運(yùn)動路程、累積運(yùn)動時間、平均運(yùn)動速度和最大運(yùn)動速度為實驗指標(biāo), 綜合評價刺參的運(yùn)動行為生態(tài)特征, 為刺參的野外檢測和水產(chǎn)養(yǎng)殖提供了精確的數(shù)據(jù)支持。通過魚的游泳速度、加速度、運(yùn)動總路程等行為特征來反應(yīng)水體的污染程度, 比使用致死率更迅速、準(zhǔn)確, 且更適合用于野外在線監(jiān)測。

3.3 鰱幼魚鰓、肝臟和肌肉組織銅含量特征

高濃度的Cu對于魚類的行為反應(yīng)、生理指標(biāo)和組織結(jié)構(gòu)等產(chǎn)生較大影響, 可表現(xiàn)出較強(qiáng)的毒性,引起魚類中毒甚至死亡[24], 但是由于不同區(qū)系生物受生活環(huán)境等因素的影響, 對銅的耐受性和敏感度存在很大的差異[25], Gioda等[1]對脂鯉(Leporinus obtusidens)進(jìn)行了長期銅暴露研究發(fā)現(xiàn)銅暴露處理后脂鯉肝和肌肉中的銅含量與對照組無顯著差異;而張怡等[8]對中華倒刺鲃用急性銅暴露96h后發(fā)現(xiàn),魚體肝臟、鰓和肌肉組織銅含量無顯著變化的情況, 袁喜等[9]在研究急性銅對草魚的影響時也發(fā)現(xiàn)類似規(guī)律。在本研究中, 水體銅暴露對鰱幼魚肝臟、鰓和肌肉組織銅含量影響均不顯著, 和上述結(jié)果相近, 鰓直接暴露在重金屬環(huán)境中, 因而測得積累較大; 肝臟是金屬硫蛋白(Cu-MT)合成的主要場所, 含量增加明顯; 而肌肉代謝較慢, 而且沒有直接暴露于重金屬[26,27]。因此, 魚類對重金屬的累積量為肝臟＞鰓＞肌肉。Cu-MT含量增加, 加速了Cu2+在魚體內(nèi)的代謝進(jìn)程, 多余的Cu2+結(jié)合蛋白進(jìn)入血液循環(huán), 并排泄到體外[28]。因此急性銅暴露后, 各組織重金屬累積量均無顯著差異。重金屬產(chǎn)生的環(huán)境脅迫產(chǎn)生的應(yīng)激行為反應(yīng)機(jī)理十分復(fù)雜, 有待進(jìn)一步的研究。

[1]Gioda C R, Loro V L, Pretto A,et al. Sublethal zinc and copper exposure affect acetylcholinesterase activity and accumulation in different tissues ofLeporinus obtusidens[J].Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology, 2013, 90(1): 12—16

[2]Eyckmans M, Celis N, Horemans N,et al. Exposure to waterborne copper reveals differences in oxidative stress response in three freshwater fish species [J].Aquatic Toxicology, 2011, 103(1): 112—120

[3]Barwick M, Maher W. Biotransference and biomagnification of selenium copper, cadmium, zinc, arsenic and lead in a temperate seagrass ecosystem from Lake Macquarie Estuary, NSW, Australia [J].Marine Environmental Research, 2003, 56(4): 471—502

[4]Hu Z Z. Biomagnincation of Heavy Metalsin Common Fish from Mangrove Areas of China [D]. Xiamen University, 2009 [虎貞貞. 紅樹林地區(qū)常見魚類對重金屬的生物放大作用的研究. 廈門大學(xué), 2009]

[5]Wang S Y, Liao W G, Chen D Q,et al. Analysis of ecohydrological characteristics of the four chinese farmed carps spawning grounds In the middle reach of the Yangtze River [J].Resources and Environment in the Yangtze Basin, 2008, 17(6): 892—897 [王尚玉, 廖文根,陳大慶, 等. 長江中游四大家魚產(chǎn)卵場的生態(tài)水文特性分析. 長江流域資源與環(huán)境, 2008, 17(6): 892—897]

[6]Jiang L P, Huang M G. The influence of heavy metals to embryonic development of grass carp, silver carp [J].Environmental Science, 1979, 1(2): 2 [姜禮燔, 黃穆桂. 重金屬對草魚、鰱魚胚胎發(fā)育的影響. 環(huán)境科學(xué), 1979,1(2): 2]

[7]Gao X L, Yue S Q,W L M,et al. Primary report on effects of heavy metals on activities of SOD and CAT in the liver tissue of Silver carp [J].Journal of Agricultural University of Hebei, 2003, 26(4): 130 [高曉莉, 岳淑芹, 王麗敏,等. 重金屬對鰱魚肝組織SOD和CAT活性影響研究簡報. 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報, 2003, 26(4): 130]

[8]Zhang Y, Xia J G, Cao Z D,et al. Effects of acute copper exposure on the swimming performances of juvenile Spinibarbus [J].Chinese Journal of Ecology, 2013, 32(9):2451—2456 [張怡, 夏繼剛, 曹振東,等. 急性銅暴露對中華倒刺鲃幼魚游泳能力的影響. 生態(tài)學(xué)雜志, 2013,32(9): 2451—2456]

[9]Yuan X, Huang Y P, Jing J J,et al. Effect of copper exposure on metabolism behavior of juvenile grass carp(Ctenopharyngodon idella) [J].Journal of Agro-Environment Science, 2016, 35(2): 261—265 [袁喜, 黃應(yīng)平, 靖錦杰, 等. 銅暴露對草魚幼魚代謝行為的影響. 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報, 2016, 35(2): 261—265]

[10]Zhu L, Weng W. Catadioptric stereo-vision system for the real-time monitoring of 3D behavior in aquatic animals[J].Physiology & Behavior, 2007, 91(1): 106—119

[11]Rillahan C, Chambers M D, Howell W H,et al. The behavior of cod (Gadus morhua) in an offshore aquaculture net pen [J].Aquaculture, 2011, 310(3): 361—368

[12]Shi X T, Hu Y S, Wang B,et al. Using free software Swis Track to learn swimming behavior of silver carp [J].Acta Hydrobiologica Sinica, 2014, 1(3): 588—591 [石小濤,胡運(yùn)燊, 王博,等. 運(yùn)用免費(fèi)計算機(jī)軟件Swis Track分析鰱幼魚游泳行為. 水生生物學(xué)報, 2014, 1(3): 588—591]

[13]Huang Y, Zhang J, Han X,et al. The use of zebrafish(Danio rerio) behavioral responses in identifying sublethal exposures to deltamethrin [J].International Journal of Environmental Research and Public Health, 2014,11(4): 3650—3660

[14]McKenzie D J, Martinez R, Morales A,et al. Effects of growth hormone trans genesis on metabolic rate, exercise performance and hypoxia tolerance in tilapia hybrids [J].Journal of Fish Biology, 2003, 63(2): 398—409

[15]Yu X, Hou X J, Lu H D,et al. Anomaly detection of fish school behavior based on features statistical and optical flow methods [J].Transactions of the Chinese Society of Agricultural Engineering, 2014(2): 162—168 [于欣, 侯曉嬌, 盧煥達(dá), 等. 基于光流法與特征統(tǒng)計的魚群異常行為檢測. 農(nóng)業(yè)工程學(xué)報, 2014(2): 162—168]

[16]Peng J L, Cao Z D, Fu S J. Effect of acute low temperature stress on oxygen consumption rate and ventilation frequency inSilurus meridionalisandPelteobag vachelli[J].Agricultural Science & Technology, 2007, 35(25):73—78 [彭姜嵐, 曹振東, 付世建. 急性低溫脅迫對南方鲇和瓦氏黃顙魚耗氧率和呼吸頻率的影響. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2007, 35(25): 73—78]

[17]Zhang H. Effect of four kinds of heavy metal ions on the behavioral and physiological index of hybrid sturgeon[D]. Agricultural University of Hebei. 2014 [張華. 四種重金屬離子對雜交鱘行為及生理指標(biāo)的影響. 河北農(nóng)業(yè)大學(xué), 2014]

[18]Huang Y M, Mou L Y, Ma J C,et al. The effects of heavy metal ions on the respiratory movements in carp and crueian carp [J].Acta Scifntiarum Naturalium Universitatis Sunyaatseni, 1987(4): 84—89 [黃溢明, 牟凌云, 馬際春, 等. 重金屬離子對鯽魚和鯉魚呼吸運(yùn)動機(jī)能的影響. 中山大學(xué)學(xué)報: 自然科學(xué)版, 1987(4): 84—89]

[19]Mallatt J. Fish gill structural changes induced by toxicants and other irritants: a statistical review [J].Canadian Journal of Fisheries & Aquatic Sciences, 1985,42(4): 630—648

[20]John K R, Jayabalan N. Sublethal effects of endosulfan on the histology and protein pattern of Cyprinuscarpio, gill[J].Journal of Applied Ichthyology, 1993, 9(9): 49—56

[21]Pinkney A E, Wright D A, Hughes G M. A morphometric study of the effects of tributyltin compounds on the gills of the mummichog,Fundulus heteroclitus[J].Journal of Fish Biology, 2006, 34(5): 665—677

[22]Thirumavalavan R. Effect of copper on carbohydrate metabolism fresh water fish, Catlacatla [J].Asian Journal of Science and Technology, 2010, 5: 95—99

[23]Pan Y. Quantitative research on motor behavioral rhythms of sea cucumberApostichopus japonicus(Selenka)[D]. Institute of Oceanology, Chinese Academy of Sciences. 2015 [潘洋. 刺參運(yùn)動節(jié)律行為的數(shù)量化研究. 中國科學(xué)院研究生院(海洋研究所). 2015]

[24]Cai W C, Qu Y J. Toxicity of Cu2+to fish during early developmental stages [J].South China Fisheries Science,2009, 5(5): 75—79 [蔡文超, 區(qū)又君. 重金屬離子銅對魚類早期發(fā)育階段的毒性. 南方水產(chǎn), 2009, 5(5): 75—79]

[25]Wang Z, Jin X W, Wang Z J. Taxon-specific sensitivity differences of copper to aquatic organisms [J].Asian Journal of Ecotoxicology, 2014, 9(4): 640—646 [王振,金小偉, 王子健. 銅對水生生物的毒性:類群特異性敏感度分析. 生態(tài)毒理學(xué)報, 2014, 9(4): 640—646]

[26]Zhou X W, Zhu G N, Jilisa M,et al. Effects of the interaction of copper, zinc and cadmium on the accumulation of lead in the tissues of theCarassius auratus[J].Agro-environmental Protection, 2002, 21(1): 23—25 [周新文, 朱國念, Jilisa M, 等. 重金屬離子Cu Zn Cd的相互作用對Pb在鯽魚組織中積累的影響. 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報, 2002,21(1): 23—25]

[27]Zhou Y F, You Y, Wu W,et al. Dynamic changes of metallothioneinn in different tissues ofCarassius auratusexposed to different concentrations of zinc [J].JiangsuJournal of Agricultural Sciences, 2009, 25(4): 18—21 [周彥鋒, 尤洋, 吳偉, 等. 重金屬鋅脅迫下鯽魚不同組織中金屬硫蛋白的動態(tài)變化. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報, 2009, 25(4):18—21]

[28]Ghedira J, Jebali J, Bouraoui Z,et al. Metallothionein and metal levels in liver, gills and kidney of Sparusaurata exposed to sublethal doses of cadmium and copper [J].Fish Physiology & Biochemistry, 2010, 36(1): 101—107