不孕癥患者宮頸分泌物沙眼衣原體和解脲支原體的檢測(cè)及臨床意義

宋玉美

(周口市疾病預(yù)防控制中心專(zhuān)科病醫(yī)院 檢驗(yàn)科 河南 周口 466000)

隨著社會(huì)生活節(jié)奏加快，工作壓力不斷增大，女性不孕癥的發(fā)病率呈逐年增長(zhǎng)趨勢(shì)，其影響因素主要有排卵因素、輸卵管因素、子宮因素等，給患者造成較大痛苦[1-2]。宮頸分泌物沙眼衣原體(chlamydia trachomatis，CT)與解脲支原體(ureaplasm urealyticum，UU)容易對(duì)生殖道產(chǎn)生感染，引發(fā)宮頸炎，甚至導(dǎo)致不孕[3]。熒光定量PCR技術(shù)(realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ-PCR)是一種基于酶促化學(xué)反應(yīng)放大試管中待測(cè)基因，能短時(shí)間內(nèi)將待測(cè)基因擴(kuò)增至上百萬(wàn)倍，提高基因診斷靈敏度，降低診斷難度[4]。本研究通過(guò)檢測(cè)不孕癥患者宮頸分泌物沙眼衣原體和解脲支原體的感染情況，探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料選取2014年8月至2016年9月周口市疾病預(yù)防控制中心專(zhuān)科病醫(yī)院106例不孕癥女性患者作為觀察組，年齡21～36歲，平均(28.45±2.64)歲，其中59例原發(fā)性不孕患者(原發(fā)性不孕組)和47例繼發(fā)性不孕患者(繼發(fā)性不孕組)。另選同期102例已生育健康體檢女性作為對(duì)照組，年齡20～37歲，平均(29.25±3.13)歲。觀察組與對(duì)照組受檢者一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，所有患者均自愿參加本研究并簽署知情同意書(shū)。且本研究經(jīng)周口市疾病預(yù)防控制中心專(zhuān)科病醫(yī)院倫理協(xié)會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1儀器選擇及標(biāo)本采集 以定時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢查，儀器由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供。采用無(wú)菌窺陰器，充分顯露宮頸，宮頸外分泌物用無(wú)菌棉球擦拭獲取，并于不孕患者宮頸處插入無(wú)菌棉拭子，同時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)，停留數(shù)秒后取出，將棉拭子置于無(wú)菌試管，密閉送檢。

1.2.2FQ-PCR檢測(cè) 試劑盒由深圳匹基生物工程公司提供，嚴(yán)格依照劑盒說(shuō)明書(shū)操作，標(biāo)本棉拭+1.5 ml生理鹽水充分洗滌，吸取混懸液，再加入核酸提取液A(100 μl)，混勻，離心(13 000 r/min)10 min，棄上清液；加入核酸提取液B(50 μl)，混勻，100 ℃裂解10 min，離心(13 000 r/min)處理5 min，取上清液(DNA)，將其作為反應(yīng)模板，并進(jìn)行FQ-PCR檢測(cè)。反應(yīng)條件：93 ℃ 5 min預(yù)變性，再按93 ℃ 45 s、55 ℃ 45 s進(jìn)行40個(gè)反應(yīng)循環(huán)。結(jié)束后電腦自動(dòng)計(jì)算定量結(jié)果，標(biāo)本均按試劑盒提供定量陽(yáng)性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，做定量陽(yáng)性質(zhì)控，檢測(cè)后均進(jìn)行陰性及陽(yáng)性對(duì)照。

1.3觀察指標(biāo)①統(tǒng)計(jì)對(duì)比兩組UU、CT及混合UU+CT感染檢測(cè)結(jié)果；②對(duì)比觀察組中原發(fā)性不孕組及繼發(fā)性不孕組UU、CT及混合UU+CT感染檢測(cè)結(jié)果。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，定性資料以率(%)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組UU DNA、CT DNA及混合感染陽(yáng)性率均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)；繼發(fā)性不孕組UU DNA、CT DNA及混合感染陽(yáng)性率均高于原發(fā)性不孕組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見(jiàn)表1、2。

表1 觀察組與對(duì)照組受檢者檢測(cè)結(jié)果比較[n(%)]

3 討論

表2 原發(fā)性不孕組及繼發(fā)性不孕組患者檢測(cè)結(jié)果比較[n(%)]

不孕癥是指1 a未采取任何避孕措施，性生活正常而沒(méi)有成功妊娠，主要分為原發(fā)性不孕及繼發(fā)性不孕。生殖系統(tǒng)感染是影響女性不孕主要因素之一，多種微生物均可引起女性生殖道感染，由于UU、CT感染癥狀較輕，未受到重視，易導(dǎo)致反復(fù)感染，嚴(yán)重者甚至造成不孕[5-6]。熒光定量PCR技術(shù)是一種新型檢查技術(shù)，可及早檢測(cè)出宮頸分泌物中UU、CT感染情況，逐漸廣泛應(yīng)用于臨床。

UU是女性下生殖道最常見(jiàn)的微生物，可損害精子代謝和生理機(jī)能，影響傳統(tǒng)卵細(xì)胞能力，導(dǎo)致女性不孕；同時(shí)，UU可導(dǎo)致輸卵管黏膜的纖毛細(xì)胞脫落，影響其正常受精。CT結(jié)構(gòu)獨(dú)特，自身無(wú)法合成能量物質(zhì)，常通過(guò)寄生宿主細(xì)胞獲取三磷酸腺苷及氨基酸，傳染性極高；CT于人體黏膜最常見(jiàn)，繁殖力強(qiáng)，累及宮頸柱狀上皮，引起宮頸管炎，進(jìn)而侵犯輸卵管上皮，導(dǎo)致輸卵管蠕動(dòng)異常及阻塞造成繼發(fā)不孕。UU、CT混合感染易導(dǎo)致輸卵管炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致宮腔阻塞，影響正常受精，破壞妊娠條件引起不孕。熒光定量PCR技術(shù)是一種新型臨床檢測(cè)技術(shù)，可有效檢測(cè)女性UU、CT感染，本研究采用FQ-PCR技術(shù)對(duì)女性宮頸分泌物進(jìn)行檢查，具有以下優(yōu)點(diǎn)。①檢測(cè)簡(jiǎn)單、迅速：熒光探針具有DNA探針雜交作用，閉管操作可降低假陽(yáng)性率；②通過(guò)對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行測(cè)定，具有較高敏感度，定量范圍寬且準(zhǔn)確度高，可滿(mǎn)足臨床需要。本研究結(jié)果顯示，觀察組UU DNA、CT DNA及混合感染陽(yáng)性率均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)；繼發(fā)性不孕組UU DNA、CT DNA及混合感染陽(yáng)性率均高于原發(fā)性不孕組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。該結(jié)果表明UU、CT感染可能為引發(fā)不孕癥發(fā)生的重要因素，通過(guò)熒光定量PC技術(shù)對(duì)不孕癥患者行生殖道UU、CT進(jìn)行篩查，有助于降低不孕癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。

綜上所述，UU、CT感染可能是導(dǎo)致不孕癥影響因素，臨床應(yīng)及早檢測(cè)UU、CT及混合感染情況，有助于臨床及時(shí)診斷治療，降低不孕癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。

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