酶標(biāo)儀的使用及注意事項(xiàng)

（遼寧省阜新市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遼寧阜新 123000）

酶標(biāo)儀在畜牧獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室已成必備儀器，該儀器應(yīng)用較廣泛，日常免疫抗體檢測(cè)應(yīng)用較多，豬瘟、藍(lán)耳病、口蹄疫抗體的檢測(cè)都需要使用。對(duì)于獸藥殘留，肉質(zhì)瘦肉精的檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)也需使用。該儀器操作簡(jiǎn)便、快速、結(jié)果易判定，準(zhǔn)確率較高等特點(diǎn)。

酶標(biāo)儀的型號(hào)較多，使用范圍不同。選擇該儀器時(shí)根據(jù)檢測(cè)的樣品和使用試劑的不同來選擇。許多試劑公司配套供應(yīng)酶標(biāo)儀。該儀器針對(duì)固相載體形式的不同，各有特制的適用于板、珠和小試管的設(shè)計(jì)。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有測(cè)讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、精確度和可測(cè)范圍、線性等。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可精確到0.001，準(zhǔn)確性為±1%，重復(fù)性達(dá)0.5%。酶標(biāo)儀的可測(cè)范圍與線性范圍視各酶標(biāo)儀的性能不同，普通的酶標(biāo)儀在0-2.000，新型號(hào)的酶標(biāo)儀上限拓寬到2.900，超范圍值常以“*”或“over”或其他符號(hào)表示。選用酶標(biāo)儀時(shí)應(yīng)注意可測(cè)范圍與線性范圍的不同，線性范圍常小于可測(cè)范圍。

使用時(shí)環(huán)境條件對(duì)儀器的結(jié)果讀取有影響，直接影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。儀器設(shè)備的放置位置和環(huán)境要適當(dāng)，應(yīng)將儀器放置于無電磁場(chǎng)和干擾電壓的水平臺(tái)面，保持環(huán)境干燥，避免水汽和煙塵對(duì)儀器的損傷，避免陽光或強(qiáng)光直射而造成的老化。使用時(shí)盡量保持環(huán)境溫度在15℃～40 ℃，濕度在15%～85%之間，保持環(huán)境穩(wěn)定。保持使用電壓的穩(wěn)定性，避免突然斷電和使用后未關(guān)閉儀器前斷電造成的儀器非正常關(guān)閉。

在實(shí)驗(yàn)中為保證結(jié)果準(zhǔn)確性，延長(zhǎng)儀器使用壽命，操作時(shí)應(yīng)遵守儀器的使用注意事項(xiàng)及日常維護(hù)保養(yǎng)。儀器操作過程中應(yīng)注意，在測(cè)試結(jié)果前應(yīng)提前開機(jī)預(yù)熱15～30min，避免開機(jī)后馬上檢測(cè)造成的結(jié)果偏差。檢測(cè)的試劑應(yīng)恢復(fù)常溫后再使用，對(duì)于所配置試劑用的水質(zhì)pH值，水質(zhì)純凈度等應(yīng)符合要求，溫度水質(zhì)都會(huì)造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差很大或?qū)嶒?yàn)的失敗。洗板時(shí)建議配套使用洗板機(jī)洗板，洗得干凈，避免交叉污染。酶標(biāo)儀檢測(cè)應(yīng)避免腐蝕性試劑的使用。操作時(shí)樣品撒到儀器上應(yīng)對(duì)儀器擦拭并消毒。不同試劑盒的要求均不相同，應(yīng)根據(jù)試劑盒說明修改儀器上參數(shù)，因試劑盒造成的測(cè)量結(jié)果偏差應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況及時(shí)修改參數(shù)，避免測(cè)量結(jié)果偏差，到達(dá)最佳測(cè)試結(jié)果，使實(shí)驗(yàn)成立。加入底物后終止的時(shí)間要掌握好，過短過長(zhǎng)都 可能造成偏差甚至實(shí)驗(yàn)結(jié)果不成立。測(cè)定時(shí)有時(shí)選擇單波長(zhǎng)測(cè)定，有時(shí)選擇雙波長(zhǎng)測(cè)定，雙波長(zhǎng)測(cè)定即每孔先后測(cè)定兩次，第一次在最適波長(zhǎng)，第二次在不敏感波長(zhǎng)，兩次測(cè)定間不移動(dòng)ELISA板的位置，最終測(cè)得的值為兩者只差。雙波長(zhǎng)式測(cè)讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。各種酶標(biāo)儀性能有所不同，使用時(shí)應(yīng)詳細(xì)閱讀說明書。

儀器不用時(shí)應(yīng)定期開機(jī)保養(yǎng)，保證檢測(cè)時(shí)正常運(yùn)行狀態(tài)。為保證結(jié)果準(zhǔn)確性儀器應(yīng)定期校準(zhǔn)。校驗(yàn)方法可應(yīng)用比爾定律對(duì)酶標(biāo)儀進(jìn)行自行校準(zhǔn)。準(zhǔn)確稱取分析純重鉻酸鉀0.35克，溶于100ml 0.2摩爾/升的稀硫酸中，以此作為原液，在用0.2mol/L的稀硫酸進(jìn)行倍比稀釋。得到0.35%、0.175%、0.0875%、0.04375%、0.021875%、0.0109375%六個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)液，將液體加入96孔微量板中，每個(gè)濃度加兩排共16孔，每孔200μl。將加好溶液的微量板放在酶標(biāo)儀上，用450nm單波長(zhǎng)測(cè)量。結(jié)果若六個(gè)濃度測(cè)量結(jié)果吸光度的平均值與濃度呈線性關(guān)系，可看出酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確無偏差。酶標(biāo)儀是垂直光路，垂直光的特點(diǎn)是樣品吸光度受液體濃度和稀釋的影響小，受被檢樣本液面是否水平、酶標(biāo)板透光性、孔底是否平整等影響較大。為保證結(jié)果準(zhǔn)確應(yīng)選擇透光性好干凈的酶標(biāo)板，操作時(shí)避免接觸到孔底部，避免底部污染造成的結(jié)果偏差。如儀器損壞要聯(lián)系儀器廠家技術(shù)人員，不要自行拆除修理，以免損壞內(nèi)部部件。

酶標(biāo)儀的使用快捷簡(jiǎn)單，但要注意每一個(gè)操作細(xì)節(jié)才能保證結(jié)果的準(zhǔn)確。