GST-π在上皮性卵巢癌組織中表達(dá)及與患者耐藥、病理特征的關(guān)系

祁彥萍 楊建敏 馮 磊 張 輝

(鄭州大學(xué)南陽(yáng)醫(yī)院 南陽(yáng)市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 南陽(yáng) 473200)

研究顯示，上皮性卵巢癌發(fā)病率可達(dá)(334～556)/10萬(wàn)人〔1，2〕?；熓桥R床上治療上皮性卵巢癌的重要方式，通過(guò)靜脈使用化療藥物促進(jìn)腫瘤病灶萎縮、加劇癌細(xì)胞病灶凋亡。卵巢癌化療耐藥導(dǎo)致的治療不良結(jié)局成為臨床上威脅卵巢癌治療的重要因素。谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GST)-π等生物學(xué)因子通過(guò)影響到癌細(xì)胞對(duì)于腫瘤藥物的排泄提高耐藥能力，影響化療效果〔3～5〕。本研究探討GST-π在不同化療結(jié)局中的異常表達(dá)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2012年3月至2015年1月南陽(yáng)市中心醫(yī)院確診的114例上皮性卵巢癌患者作為研究對(duì)象，年齡37～66〔平均(52.7±12.5)〕歲，國(guó)際婦產(chǎn)聯(lián)盟(FIGO)分期：Ⅰ期16例、Ⅱ期28例、Ⅲ期42例、Ⅳ期28例；病理學(xué)類(lèi)型：漿液性卵巢癌71例、黏液性卵巢癌29例、子宮內(nèi)膜癌8例、透明細(xì)胞癌6例；病理學(xué)分級(jí)：G1級(jí)18例、G2級(jí)24例、G3級(jí)72例。

1.2納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者均經(jīng)過(guò)手術(shù)后病理學(xué)檢查證實(shí)；②術(shù)前患者未接受放療、化療；③患者術(shù)后均接受6～8個(gè)療程的鉑類(lèi)藥物化療；④各項(xiàng)資料完整者。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他部位惡性腫瘤。

1.3化療方法 紫杉醇(南京碧云天生物科技有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字：H20118493，規(guī)格：30 mg/5 ml)聯(lián)合順鉑(江蘇泰康生物醫(yī)藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字：H20048543，50 ml/瓶)，用法：化療第1天將135～175 mg/m2紫杉醇加入500 ml葡萄糖氯化鈉溶液中靜脈滴注，3 h內(nèi)滴注完畢，在應(yīng)用紫杉醇的12 h前，每6小時(shí)口服一次地塞米松片(江蘇揚(yáng)子江藥業(yè)有限公司，批號(hào)：Z200374894)，20 mg/次，化療前30 min內(nèi)口服苯海拉明(哈爾濱制藥二廠，批號(hào)；Z20048594)40 mg；化療第3天將75 mg/m2順鉑注射液加入到100 ml生理鹽水中靜脈滴注，并注意記錄患者24 h的液體出入量，每隔21 d進(jìn)行一次化療，連續(xù)化療2個(gè)療程，化療過(guò)程中注意補(bǔ)液、解毒、保肝等對(duì)癥處理。

1.4免疫組化染色及判斷標(biāo)準(zhǔn) 采用石蠟切片脫蠟至水，切片厚度3 mm，3%過(guò)氧化氫(H2O2)室溫孵育5 min，采用去離子水沖洗3次，每次3 min，采用濃度為10% 牛奶蛋白(1 g蛋白加入100 ml純水)封閉，室溫孵育5 min，加入GST-π蛋白抗體(鼠來(lái)源，南京碧云天生物科技有限公司)，37℃ 孵育2 h，PBS緩沖液沖洗3次，每次5 min，滴加辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的二抗(兔來(lái)源，購(gòu)自羅氏檢測(cè)公司)，37℃孵育30 min，PBS沖洗3次，每次5 min，加入硝基藍(lán)四氮唑(NBT)/5-溴-4-氮-3-吲哚磷酸鹽(BCIP)色劑顯色5 min，復(fù)染，脫水，透明，封片，鏡下觀察。OLIPICS電子顯微鏡購(gòu)自上海精密儀器有限公司，配套試劑購(gòu)自南京泰康生物科技有限公司。

免疫組化結(jié)果判定：GST-π蛋白的陽(yáng)性著色表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá)，①根據(jù)著色強(qiáng)度：0分為無(wú)色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；②根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞比例：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目所占比例<10%為1分、11%～50%為2分、51%～75%為3分、>75%為4分，兩種積分相乘總分<3分為陰性、≥3分為陽(yáng)性。

1.5臨床療效評(píng)估 根據(jù)美國(guó)婦科腫瘤學(xué)組復(fù)發(fā)型卵巢癌分型標(biāo)準(zhǔn)：化療敏感型：對(duì)以鉑類(lèi)為主的化療方案敏感，達(dá)到緩解期，停止化療后6個(gè)月后出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)；化療耐藥型：對(duì)以鉑類(lèi)為主的化療方案有反應(yīng)，停止化療后6個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)；頑固型：對(duì)以鉑類(lèi)為主的化療方案有反應(yīng)，但患者體內(nèi)存在殘存病灶；難治性：對(duì)以鉑類(lèi)為主的化療方案無(wú)反應(yīng)。本研究將化療耐藥型、頑固型、難治型歸類(lèi)為耐藥組患者。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1化療耐藥情況與卵巢癌組織中GST-π蛋白表達(dá)的關(guān)系 化療敏感型組66例，GST-π蛋白陽(yáng)性表達(dá)率59.09%(39例)，化療耐藥組48例，GST-π蛋白陽(yáng)性表達(dá)率89.58%(43例)，化療耐藥組GST-π蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于化療敏感型組(χ2=12.797,P<0.01)。

2.2卵巢癌組織中GST-π蛋白表達(dá)與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系 不同臨床病理學(xué)特征GST-π蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為：年齡：<50歲36例(43.90%)、≥50歲46例(56.10%)；FIGO分期：Ⅰ～Ⅱ期29例(35.37%)，Ⅲ～Ⅳ期53例(64.63%)；病理學(xué)分級(jí)：G1～G2級(jí)28例(34.15%)，G3級(jí)54例(65.85%)；病理學(xué)類(lèi)型：漿液性卵巢癌50例(60.98%)，黏液性卵巢癌23例(28.05%)，子宮內(nèi)膜癌6例(7.32%)，透明細(xì)胞癌3例(3.66%)；大網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移：是39例(47.56%)，否43例(52.44%)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：是56例(68.29%)，否26例(31.71%)；腹水量：<500 ml 45例(54.88%)，≥500 ml 37例(45.12%)。不同年齡、FIGO分期、病理學(xué)分級(jí)、病理學(xué)類(lèi)型、發(fā)生大網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹水量的GST-π蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。

3 討 論

卵巢癌的發(fā)生主要與自身性遺傳易感因素或性激素受體敏感性的改變等有關(guān)。卵巢癌容易早期發(fā)生淋巴結(jié)或遠(yuǎn)期轉(zhuǎn)移，臨床預(yù)后不佳。臨床上主要采用手術(shù)及靜脈化療等綜合性的方式治療卵巢癌，靜脈化療的應(yīng)用可以顯著改善高腫瘤負(fù)荷，促進(jìn)腫瘤病灶萎縮，降低遠(yuǎn)期腫瘤復(fù)發(fā)率或轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)〔6，7〕。研究顯示，卵巢癌靜脈化療后的耐藥發(fā)生率可達(dá)25%以上，且化療時(shí)間越長(zhǎng)、既往存在化療病史等，均可以促進(jìn)耐藥的發(fā)生〔8〕。靜脈化療耐藥的發(fā)生，可以導(dǎo)致患者卵巢癌的盆腔內(nèi)腹膜轉(zhuǎn)移，并增加其對(duì)于肝臟、肺部等重要臟器的轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致臨床預(yù)后的惡化。

GST-π可以通過(guò)對(duì)癌細(xì)胞膜上ATP依賴(lài)性的轉(zhuǎn)移酶的激活作用，促進(jìn)癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的排泄，降低癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的攝取，并能夠在降低化療藥物的半衰期、促進(jìn)藥物代謝等方面發(fā)揮作用，降低靜脈化療的作用時(shí)間，減輕化療藥物的作用濃度〔9，10〕。GST-π能夠在干預(yù)ATP酶的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)等方面發(fā)揮作用，促進(jìn)化療藥物受體變構(gòu)，導(dǎo)致受體及藥物結(jié)合程度下降，促進(jìn)化療藥物分解〔11～13〕。

本研究提示GST-π可能參與卵巢化療耐藥過(guò)程，GST-π的高表達(dá)可能通過(guò)下列幾個(gè)方面影響卵巢癌的化療敏感性：①GST-π的高表達(dá)，能夠促進(jìn)癌細(xì)胞DNA對(duì)化療藥物的損傷耐藥能力，促進(jìn)藥物流的外向流動(dòng)；②GST-π的高表達(dá)，可以通過(guò)對(duì)于癌細(xì)胞內(nèi)的囊泡激活作用，促進(jìn)囊泡對(duì)于化療藥物的包含作用，促進(jìn)化療藥物外流。董鶯等〔14〕在探討不同臨床分期的卵巢癌的化療結(jié)局的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，卵巢癌化療耐藥組患者病灶組織中GST-π等蛋白陽(yáng)性率可達(dá)55%以上，且患者耐藥程度越高、化療周期越長(zhǎng)，GST-π等蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率越高。免疫組化分析可見(jiàn)，GST-π的表達(dá)主要位于卵巢癌細(xì)胞的周邊或細(xì)胞間質(zhì)成分中，提示GST-π可能通過(guò)影響癌細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)外的相關(guān)藥物代謝、藥物受體敏感性等方面，發(fā)揮綜合性耐藥作用。臨床病理特征可以發(fā)現(xiàn)，病理學(xué)分級(jí)、病理學(xué)類(lèi)型、發(fā)生大網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等不同臨床病理特征的患者中，GST-π蛋白的高表達(dá)并不會(huì)影響到卵巢癌患者臨床病理特征的變化，這與李少星等〔13〕結(jié)論存在一定差別，有研究〔14〕認(rèn)為發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或者卵巢漿液腺腺癌患者組織中GST-π蛋白的陽(yáng)性表達(dá)水平可能更高，考慮可能與化療方案的不同、化療敏感性的判斷標(biāo)準(zhǔn)的不統(tǒng)一等原因有關(guān)。后續(xù)臨床研究可以通過(guò)阻斷GST-π蛋白受體，進(jìn)而評(píng)估GST-π蛋白影響卵巢癌化療的具體機(jī)制。