胰腺導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀黏液性腫瘤患者K-ras基因的突變

于　軍　王　峰　李開良　楊　蕾　曹振強(qiáng)　

(吉林大學(xué)第二醫(yī)院電診科，吉林　長春　130041)

1吉林省人民醫(yī)院肝膽胰外科2吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院鏡檢科

胰腺導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀黏液性腫瘤(IPMN)是胰腺癌最重要及最常見的癌前病變之一，是一種相對良性腫瘤，術(shù)后預(yù)后較好〔1〕。但部分IPMN具有侵襲性及快速發(fā)展和預(yù)后差的特點(diǎn)，常規(guī)影像學(xué)與病理學(xué)檢測很難對這一類IPMN病例做出正確診斷及鑒別〔2〕。K-ras基因是一種原癌基因，其所在信號通路在調(diào)控細(xì)胞生長和惡性腫瘤轉(zhuǎn)化的過程中起重要作用。約20%人類腫瘤中都存在K-ras基因突變〔3〕。K-ras基因突變與胰腺癌的發(fā)病及預(yù)后密切相關(guān)〔4～6〕。有學(xué)者報道了IPMN樣本K-ras突變及與病理分型的關(guān)系，指出在IPMN樣本中存在K-ras突變，但突變率及與臨床相關(guān)性報道不一〔7～9〕。本研究分析IPMN病例標(biāo)本K-ras基因的突變情況，探討其與相關(guān)臨床及病理特點(diǎn)的關(guān)聯(lián)性。

1　資料與方法

1.1標(biāo)本資料標(biāo)本資料及納入標(biāo)準(zhǔn)同文獻(xiàn)〔10〕，31例IPMN 患者組織標(biāo)本來自吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院2012年1月至2014年12月胰腺手術(shù)切除腫瘤患者。男16例(51.6%)，女15例(48.4%)，平均年齡63.9歲；臨床病理分型：胃型15例(48.39%)，腸型8例(25.81%)，胰膽管型7例(22.58%)，嗜酸細(xì)胞型1例(3.22%)；腫瘤向周邊組織浸潤情況：浸潤型7例(22.58%)，非浸潤型24例(77.42%)；分化程度：高分化14例(45.16%)、中分化9例(29.03%)、低分化8例(25.81%)；IPMN入組標(biāo)準(zhǔn)：以下3條中符合任意1條均可入組。①影像學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)胰腺導(dǎo)管有擴(kuò)張；②病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)囊性擴(kuò)張的導(dǎo)管內(nèi)被覆黏液上皮或壺腹部有黏液溢出；③影像學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)導(dǎo)管內(nèi)具有乳頭狀增生腫瘤并伴導(dǎo)管擴(kuò)張。擴(kuò)張導(dǎo)管直徑≥1 cm。所有病理學(xué)類型及TNM分期均按照世界衛(wèi)生組織(WHO)標(biāo)準(zhǔn)。

1.2K-ras基因突變檢測分析IPMN患者腫瘤石蠟組織切片(厚度10 μm)3片，應(yīng)用二甲苯脫蠟后，無水乙醇清洗2次，晾干后，應(yīng)用刀片采集腫瘤組織至1.5 ml離心管，應(yīng)用石蠟組織DNA提取試劑盒(BIOMIGA)進(jìn)行樣本DNA提取，應(yīng)用紫外分光光度計(jì)在260 nm與280 nm測定OD值，計(jì)算含量與純度。應(yīng)用K-ras基因突變檢測試劑盒(武漢友芝有生物技術(shù)有限公司)通過實(shí)時定量PCR儀(羅氏Lightcycler480)對提取DNA的K-ras基因突變情況進(jìn)行檢測。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS10.0 軟件進(jìn)行Fisher檢驗(yàn)。

2　結(jié)　果

31例IPMN患者組織中檢測出10例(32.26%)發(fā)生K-ras基因突變。10例K-ras基因突變中GGT(Gly)to GAT(Asp)6例；GGT(Gly) to GTT(Val)3例；GGT(Gly) to CGT(Arg)1例。其中，胰膽管型5例(71.4%)、胃型2例(13.3%)、腸型2例(25.0%)、嗜酸細(xì)胞型1例(100.0%)，各臨床分型差異顯著(P=0.022)；浸潤型6例(85.7%)顯著高于非浸潤型4例(16.7%，P=0.002)；高分化1例(7.1%)、中分化2例(22.2%)、低分化7例(87.5%)，不同分化類型差異顯著(P=0.000)。

3　討　論

內(nèi)鏡逆行胰膽管造影通常被用于IPMN的臨床診斷〔11〕。然而，IPMN包括各種各樣的組織類型如腺瘤和腺癌，僅應(yīng)用影像學(xué)診斷及病理學(xué)診斷評價惡性程度往往很難。因此，需要采用一些新的檢測方法包括基因檢查進(jìn)一步完善IPMN診斷。K-ras基因突變位點(diǎn)常位于該基因2號外顯子的12號和13號密碼子上及3號外顯子的61號密碼子，其中常見突變形式為：G12C、G12R、G12S、G12V、G12D、G12A、G13V/D，占90%以上〔12〕。在本研究中K-ras基因突變主要以GGT(Gly) to GAT(Asp)突變?yōu)橹鳌１狙芯客蛔兟实陀贙aino等〔8〕報道IPMN患者胰腺液中檢測K-ras 69%的突變率。本研究說明K-ras基因突變與IPMN的腫瘤組織浸潤及分化密切相關(guān)，通過該基因突變檢測可能為預(yù)測IPMN發(fā)生侵襲及惡性程度提供重要手段。

1Kl?ppel G，Basturk O，Schlitter AM，etal.Intraductal neoplasms of the pancreas〔J〕.Semin Diagn Pathol，2014;31(6)：452-66.

2Ideno N，Ohtsuka T，Kono H，etal.Intraductal papillary mucinous neoplasms of the pancreas with distinct pancreatic ductal adenocarcinomas are frequently of gastric subtype〔J〕.Ann Surg，2013;258(1)：141-51.

3Kahn S，Yamamoto F，Almoguera C，etal.The c-K-ras gene and human cancer(review)〔J〕.Anticancer Res,1987；7(4A)：639-52.

4Nakayama T，Morishita T，Kamiya T.K-ras as a genetic marker in pancreatic cancer〔J〕.Acta Gastroenterol Latinoam,2003；33(1)：43-6.

5Almoguera C，Shibata D，F(xiàn)orrester R,etal.Most human carcinomas of the exocrine pancreas contain mutant c-K-ras genes〔J〕.Cell,1988；53(4)：549-54.

6Hruban RH，van Mansfeld AD,Offerhaus GJ，etal.K-ras oncogene activation in adenocarcinoma of the human pancreas〔J〕.Am J Pathol,1993;143(2)：545-54.

7Jang JY，Park YC，Song YS，etal.Increased K-ras mutation and expression of S100A4 and MUC2 protein in the malignant intraductal papillary mucinous tumor of the pancreas〔J〕.J Hepatobiliary Pancreat Surg,2009;16(5)：668-74.

8Kaino M，Kondoh S，Okita S，etal.Detection of K-ras and p53 gene mutations in pancreatic juice for the diagnosis of intraductal papillary mucinous tumors〔J〕.Pancreas，1999;18(3)：294-9.

9Kobayashi N，Inamori M，F(xiàn)ujita K，etal.Characterization of K-ras gene mutations in association with mucinous hypersecretion inintraductal papillary-mucinous neoplasms〔J〕.J Hepatobiliary Pancreat Surg，2008;15(2)：169-77.

10張曉鴿，趙建軍，王慶宇，等.中國人胰腺導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀粘液性腫瘤B-RAF基因(V600E)突變的研究〔J〕.中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2015；19(12)：2077-80.

11Yamaguchi K，Tanaka M.Mucin-hypersecreting tumor of the pancreas with mucin secretion through an enlarged papilla〔J〕.Am J Gastroenterol，1991；86(7)：835-9.

12Herring JA，Hall CC，Johnson JA，etal.K-ras mutation in a tubular adenoma originating at an ileostomy in a familial adenomatous polyposis patient〔J〕.Am J Gastroenterol,1996;91(3)：587-91.