T細胞斑點試驗在老年性HIV/AIDS中的臨床診斷價值

李業(yè)明

(玉林市紅十字會醫(yī)院，廣西 玉林 537000)

結(jié)核感染是獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)患者最常見的機會性感染之一，約30%的人類免疫缺陷病毒(HIV)感染者死于結(jié)核病〔1〕。目前，結(jié)核病的診斷金標準為結(jié)核桿菌培養(yǎng)。有研究表明，HIV/AIDS 合并結(jié)核病患者痰抗酸染色陽性及痰培養(yǎng)陽性率低，影像學(xué)不典型，常導(dǎo)致誤診及漏診〔2～4〕。T細胞斑點試驗 (T-spot.TB) 是一種用于結(jié)核感染檢測的新技術(shù)，已被研究證實在HIV/AIDS 合并結(jié)核感染中具有重要的輔助診斷價值〔5～7〕。然而，目前尚無研究證實其在老年HIV/AIDS患者中是否仍具有診斷價值。本研究采用回顧性研究的方法對此進行探討。

1 資料與方法

1.1研究對象 選擇2013年1月至2015年6月在玉林市紅十字會醫(yī)院感染科及結(jié)核病科住院的HIV/AIDS患者，所有入選患者經(jīng)初篩及確診試驗確診為HIV/AIDS，且均行T-spot.TB檢查。其中，HIV/AIDS及結(jié)核病的診斷符合《艾滋病診療指南》〔8〕中的相關(guān)標準。排除標準：既往2 w有激素使用病史者及抗結(jié)核藥物使用者。共納入97例符合上述標準的患者，男59，女38例，平均年齡68.5(60～83)歲。HIV/AIDS合并結(jié)核病者作為試驗組，HIV/AIDS未合并結(jié)核病者作為對照組。其中41例合并結(jié)核病：肺結(jié)核18例、肺外結(jié)核23例中結(jié)核性胸膜炎9例、淋巴結(jié)結(jié)核5例，結(jié)核性腹膜炎、結(jié)核性腦膜腦炎、腸結(jié)核各2例，結(jié)核性心包炎、腰椎結(jié)核和膝關(guān)節(jié)結(jié)核各1例；無結(jié)核病的HIV/AIDS患者56例：真菌性腦膜腦炎15例，卡氏肺囊蟲肺病12例，肺炎或肺部感染11例，敗血癥(包括真菌、大腸桿菌等G-桿菌、葡萄球菌G+球菌等)9例，地方斑疹傷寒3例，肺癌合并阻塞性肺炎、傷寒和細菌性痢疾各2例；上述病例都做了相應(yīng)病原學(xué)或病原抗體檢查結(jié)果確診；急性胃腸炎3例。

1.2方法 所有患者入組后進行T-spot.TB檢測〔英國牛津大學(xué)研究發(fā)、原裝進口試劑，注冊證號：國食藥監(jiān)械(進)字2013第1401892號〕，由廣州市華銀醫(yī)學(xué)檢驗中心-南寧分公司進行檢測。方法如下：取5 ml外周靜脈血，加入肝素抗凝，分離外周血單個核細胞。加入 AIM-V 培養(yǎng)液，調(diào)整細胞濃度至 2.5×106/ml。取已包被抗干擾素(IFN)-γ抗體微量板，加入 50 μl AIM-V至陰性對照孔，加入50 μl植物血凝素(PHA)至PHA對照孔，加入50 μl結(jié)核分枝桿菌特異抗原 A(ESAT-6)至A檢測孔，加入50 μl抗原B(CFP-10)至B檢測孔。各孔分別加入100 μl 2.5×105/ml的單核外周血單個核細胞(PBMC)溶液，置于5%CO2培養(yǎng)箱中，37℃下培養(yǎng)20 h。用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗脫，各孔分別加入50 μl標記過的IFN-γ抗體，4℃下孵育1 h，PBS洗脫，加入50 μl底物進行顯色，室溫下孵育7 min，純水洗滌終止反應(yīng)。對各孔顏色斑點數(shù)進行計數(shù)。判斷標準：①當(dāng)陰性對照孔的點數(shù)<6時，檢測孔點數(shù)-陰性對照孔點數(shù)≥6為陽性；②當(dāng)陰性對照孔的點數(shù)≥6時，檢測孔點數(shù)>陰性對照孔的2倍為陽性。比較兩組T-spot.TB陽性率，并分析其對老年性HIV/AIDS合并結(jié)核病的診斷價值。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包進行χ2檢驗。

2 結(jié) 果

試驗組35例(85.25%)T-spot.TB檢測陽性，明顯高于對照組T-spot.TB檢測陽性〔5例(8.93%)，χ2=20.08，P<0.05〕。T-spot.TB對老年HIV/AIDS患者合并結(jié)核病的靈敏度為 86.9%，特異度為 91.1%，陽性預(yù)測值為87.5%，陰性預(yù)測值為89.5%。

3 討 論

近年來，由于老年化社會的到來及抗病毒治療延長了HIV/AIDS患者的壽命等原因，大多數(shù)國家與地區(qū)老年HIV/AIDS的患病率逐年增長，已成為嚴重的社會公共衛(wèi)生問題。我國老年HIV/AIDS患者也成倍增加，據(jù)最新流行病學(xué)調(diào)查顯示，我國老年HIV/AIDS患者占同期住院患者的比例已達16.98%〔9〕。而且，對于老年患者而言，一方面其機體生理及免疫功能較青年人明顯降低，易合并各種慢性疾病，尤其是其呼吸器官功能的減低、支氣管肺泡彈力功能退化及纖毛運動能力的減弱，導(dǎo)致其咳嗽能力大大降低，最易合并呼吸道的感染；另一方面，老年患者合并HIV/AIDS后，其免疫功能進一步下降，上述慢性病及機會性感染的發(fā)生率更高，且病情進展更加迅速，死亡率極高〔10，11〕。其中，結(jié)核病是HIV/AIDS患者最常見的機會性感染之一，此類患者發(fā)生結(jié)核病的風(fēng)險是非HIV/AIDS患者的29倍。同時，HIV與結(jié)核分枝桿菌兩者可相互促進，互相影響，形成惡性循環(huán)，從而增加患者的病死率。據(jù)統(tǒng)計，約25%的HIV/AIDS患者死于結(jié)核病，后者也占HIV/AIDS患者全因死亡率的30%，且有逐年上升的趨勢〔12〕。而隨著我國老年HIV/AIDS患者的逐年增加，HIV與結(jié)核分枝桿菌的雙重感染局面也將日益嚴重。因此，針對老年HIV/AIDS合并結(jié)核病患者的流行病學(xué)特征及診治方案進行深入研究，對及時發(fā)現(xiàn)并治療活動性及潛伏性結(jié)核病具有重要的臨床意義，并在提高患者生活質(zhì)量及防止耐藥結(jié)核的廣泛傳播等方面也有舉足輕重的公共衛(wèi)生意義。

研究表明〔13〕，我國約16.16%的老年HIV/AIDS患者合并結(jié)核病。對這類患者而言，不僅臨床及影像學(xué)表現(xiàn)極其不典型，而且由于受年齡及HIV感染等因素的影響，免疫力較同類非HIV/AIDS患者更加低下，以至于抗酸染色陰性及痰培養(yǎng)陰性均不能除外結(jié)核病的可能。而作為診斷結(jié)核病金標準的結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)及分型，又不易獲取標本、培養(yǎng)周期長，且陽性率極低。國內(nèi)研究對126例HIV/AIDS合并結(jié)核病的臨床特點進行分析就發(fā)現(xiàn)，僅有34例患者痰抗酸染色呈陽性，痰培養(yǎng)陽性者更低至10例〔14〕?？梢?，如何早期診斷及治療這類患者是擺在臨床醫(yī)生面前的難題。因此，有必要尋求一種更加敏感的診斷指標。T-spot.TB試驗是由酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)發(fā)展起來的結(jié)核感染檢測新技術(shù)，檢測原理為：患者被結(jié)核分枝桿菌感染后，機體會分泌產(chǎn)生記憶性T 淋巴細胞，后者受結(jié)核相關(guān)抗原的刺激，記憶性 T 淋巴細胞可快速增殖為效應(yīng)性T淋巴細胞，并會分泌出IFN-γ。因此對 IFN-γ 的數(shù)目進行檢測，就可以判定機體是否發(fā)生結(jié)核感染，且由于其不會與卡介苗和其他非結(jié)核分枝桿菌發(fā)生抗原交叉反應(yīng)，故特異性強〔15～17〕。研究發(fā)現(xiàn)，T-spot.TB檢測在AIDS并肺結(jié)核患者中陽性率為81.1%，而在HIV/AIDS非肺結(jié)核患者中的陽性率為15.2%，且其檢測AIDS并肺結(jié)核的靈敏度為 86.0%，特異度為 79.6%，陽性預(yù)測值為 81.1%，陰性預(yù)測值為 84.8%〔18〕，這提示T-spot.TB可對HIV/AIDS患者是否感染結(jié)核病進行診斷，本研究結(jié)果表明，T-spot.TB試驗對老年HIV/AIDS患者是否合并結(jié)核病也具有診斷價值。

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