TFEB調(diào)控
——腎臟疾病治療的新思路*

李婷婷, 王淑君， 楊 陳, 吳洪鑾， 李志航， 劉華鋒△， 劉偉敬, 2△

(1湛江市慢性腎臟病防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院腎病研究所， 廣東 湛江 524001； 2中醫(yī)內(nèi)科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室及北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 北京中醫(yī)藥大學(xué)腎病研究所， 北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院， 北京 100700)

2017年世界腎臟病日報告顯示，目前中國慢性腎臟病患者超過1億，接受透析的患者人數(shù)近40萬，透析年治療費(fèi)用約10萬，政府醫(yī)保和患者都面臨著巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。腎臟疾病病因復(fù)雜，大多數(shù)發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，目前治療也多依賴于經(jīng)驗(yàn)性、對癥性治療。在如此嚴(yán)峻的形勢下，迫切需要明確腎臟病的發(fā)病機(jī)制，進(jìn)行病因性治療才能有效地遏制腎臟病向終末期腎臟病的進(jìn)展。轉(zhuǎn)錄因子EB(transcription factor EB, TFEB)具有眾多細(xì)胞生物學(xué)功能，隨著研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)TFEB也參與一些腎臟病的發(fā)生發(fā)展。本文就TFEB在腎臟病中的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，希望可以為腎臟病的治療帶來新思路。

1 MiTF/TFE家族

MiTF/TFE(microphthalmia-associated transcription factor/transcription factor E)家族成員包括MiTF、TFEB、TFEC和TFE3，所有的成員都含有保守的螺旋-環(huán)-螺旋亮氨酸拉鏈(basic helix-loop-helix leucine zipper，bHLH-LZ)結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域?qū)λ鼈冎g二聚化作用至關(guān)重要，形成的同源或異源二聚體結(jié)合到基因啟動子E-box(CANNTG)上來調(diào)節(jié)基因表達(dá)[1]。MiTF主要在肥大細(xì)胞、破骨細(xì)胞、黑色素細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞、B細(xì)胞和心臟中表達(dá)，對神經(jīng)嵴源的黑色素細(xì)胞和視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞的發(fā)育、存活以及分化起著重要作用[2]；TFE3在多種細(xì)胞類型中普遍表達(dá)，作為一個降葡萄糖因子，可通過調(diào)控胰島素信號通路相關(guān)基因的表達(dá)促進(jìn)肝臟和骨骼肌能量代謝，提高胰島素的敏感性，從而減輕糖尿病[3]，也與TFEB共同調(diào)節(jié)脂代謝、體液免疫、自噬與溶酶體生成等[4]；而TFEC特異性地表達(dá)在骨髓起源的細(xì)胞中[5]。 TFEB廣泛表達(dá)于各種細(xì)胞類型，參與調(diào)控多種細(xì)胞生物學(xué)功能。

2 TFEB的結(jié)構(gòu)與功能

TFEB蛋白由476個氨基酸殘基組成，包括酸性激活域、螺旋-環(huán)-螺旋亮氨酸拉鏈、富谷氨酸域和富絲氨酸域等模序[6]。TFEB主要在第142位絲氨酸(S142)、第211位絲氨酸(S211)及末端富含絲氨酸結(jié)構(gòu)域發(fā)生磷酸化修飾,它通過識別E-box和M-box序列起始相應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄，參與多種病理生理過程[7]。

早期研究發(fā)現(xiàn)TFEB在胎盤血管生成和腎癌中具有重要作用[8-9]。近年來發(fā)現(xiàn)，TFEB直接與溶酶體基因啟動子區(qū)域 CLEAR(coordinated lysosomal expression and regulation)網(wǎng)絡(luò)相連，過表達(dá)TFEB可使溶酶體相關(guān)基因表達(dá)增高，從而增強(qiáng)溶酶體的生物合成及功能[10]。TFEB也與自噬相關(guān)基因的啟動子區(qū)域相連，通過促進(jìn)自噬體形成、自噬泡與溶酶體的融合及自噬底物的降解過程調(diào)控自噬[11]。此外，TFEB在調(diào)控脂代謝[12]、細(xì)胞器自噬、免疫反應(yīng)、炎癥和腫瘤等多方面扮演著重要角色[4]。

3 TFEB的調(diào)控機(jī)制

3.1哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)與Rag GTPase對TFEB的調(diào)控 細(xì)胞營養(yǎng)充足時，溶酶體腔內(nèi)的氨基酸含量比較高，vacuolar-type H+-ATPase(V-ATPase)使溶酶體信號復(fù)合物Rag GTPases (Rags)和Ragulator激活，激活的Rags與mTOR復(fù)合物1(mTOR complex 1, mTORC1)的組件Raptor結(jié)合，將mTORC1招募至溶酶體上，并被Rags激活，活化mTORC1磷酸化TFEB的S211、S142等位點(diǎn)，成為胞漿內(nèi)分子伴侶14-3-3的結(jié)合位點(diǎn)，14-3-3可能通過隱藏TFEB入核信號將TFEB滯留在胞漿；營養(yǎng)不足時，Rags失活，mTORC1從溶酶體上解離，同時TFEB/14-3-3分離，去磷酸化的TFEB入核結(jié)合到靶基因的啟動子區(qū)域，啟動溶酶體生成及自噬相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄[13]。另有研究發(fā)現(xiàn)鈣調(diào)磷酸酶可能作為mTOR的下游因子也參與調(diào)節(jié)TFEB。營養(yǎng)不足時，溶酶體的Ca2+通過黏脂蛋白1(mucolipin 1，MCOLN1)釋放入胞漿激活磷酸酶鈣調(diào)磷酸酶，活化的鈣調(diào)磷酸酶可結(jié)合TFEB并使之去磷酸化，促使TFEB入核[14]。

3.2細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶2(extracellular signal-re-gulated kinase 2，ERK2)對TFEB的調(diào)控 Settembre等[11]研究TFEB與細(xì)胞自噬的關(guān)系時，發(fā)現(xiàn)絲裂原活化蛋白激酶1(mitogen-activated protein kinase 1，MAPK1)家族的ERK2能夠介導(dǎo)TFEB第142位絲氨酸磷酸化，調(diào)控其在自噬過程中的細(xì)胞定位。在正常情況或細(xì)胞營養(yǎng)充分的情況下，ERK2磷酸化TFEB，使TFEB定位于細(xì)胞質(zhì)中；而在饑餓的情況下，ERK2與TFEB分開，TFEB的S142去磷酸化進(jìn)入細(xì)胞核中，促進(jìn)微管相關(guān)蛋白1A/1B 輕鏈3B(microtubule-associated proteins 1A/1B light chain 3B，MAPLC3B)、液泡分揀蛋白11(vacuolar protein sorting 11，VPS11)和自噬相關(guān)基因9B(autophagy-related gene 9B, ATG9B)等細(xì)胞自噬相關(guān)基因的表達(dá)。

3.3蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)對TFEB的調(diào)控 在正常營養(yǎng)供給狀態(tài)下，細(xì)胞如何應(yīng)對內(nèi)、外界信號而促進(jìn)溶酶體的生成呢？有研究發(fā)現(xiàn)以5-O-angelate-20-deoxyingenol (HEP14) 和3-O-angelate-20-deoxyingenol (HEP15)為代表的一類巨大戟烷型二萜類化合物直接激活PKC家族的成員PKCα和PKCδ，導(dǎo)致糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β，GSK3β)的磷酸化而失活。失活的GSK3β不能磷酸化TFEB第134和138位的絲氨酸，從而誘導(dǎo)TFEB入核而激活，促進(jìn)溶酶體的生成。另一方面，該研究還發(fā)現(xiàn)PKCδ的激活活化c-Jun氨基末端激酶 (c-Jun N-terminal kinase，JNK)和p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase，p38 MAPK)使溶酶體相關(guān)基因的抑制因子含KRAB和SCAN3結(jié)構(gòu)域的鋅指蛋白3(zinc finger protein with KRAB and SCAN domains 3，ZKSCAN3)從細(xì)胞核中移位到細(xì)胞質(zhì)中而失活，從而解除其對溶酶體生成的抑制。在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中，HEP14通過活化PKC可以促進(jìn)脂滴和變性蛋白聚集體的清除。因此PKC介導(dǎo)的溶酶體生成是細(xì)胞在響應(yīng)外界信號時產(chǎn)生溶酶體適應(yīng)(lysosomal adaptation)的一種重要調(diào)控機(jī)制[15]。

3.4TFEB的小泛素相關(guān)修飾物(small ubiquitin-related modifier，SUMO)修飾 TFEB還能被類泛素蛋白SUMO所修飾。Miller等[16]在非洲綠猴腎細(xì)胞COS-7中發(fā)現(xiàn)SUMO-1能夠?qū)FEB蛋白賴氨酸位點(diǎn)進(jìn)行SUMO化修飾。有研究報道TFEB的SUMO化修飾通過增加自噬與溶酶體生成相關(guān)基因的表達(dá)，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞溶酶體生成和自噬過程，從而促進(jìn)巨噬細(xì)胞脂質(zhì)水解，促使膽固醇流出，最終減少泡沫細(xì)胞的形成[17]。

3.5其它 姜黃素(curcumin)的一種合成衍生物C1，與TFEB N末端甘氨酸和富含丙氨酸的區(qū)域結(jié)合，可顯著促使TFEB活化入核而不依賴抑制mTORC1的活性，不影響TFEB S142/S211的磷酸化及MAPK1/3的活性，其作用機(jī)制可能是通過減少TFEB與14-3-3的結(jié)合來實(shí)現(xiàn)的[18]。海藻糖是不依賴mTORC1的自噬激活劑，通過抑制AKT(蛋白激酶B)使TFEB S467位點(diǎn)去磷酸化，促使TFEB活化入核[19]。mTORC1對TFEB的負(fù)性調(diào)控機(jī)制決定了目前調(diào)控TFEB的激活劑大多是mTORC1的抑制劑，而mTORC1是細(xì)胞生長和代謝的主要調(diào)控者，長遠(yuǎn)應(yīng)用來看，抑制mTORC1可能帶來難以預(yù)測的副作用，因此，mTORC1非抑制條件下激活TFEB可能更適應(yīng)細(xì)胞的生理需求。

TFEB 廣泛表達(dá)于多種細(xì)胞系，行使相應(yīng)的不同細(xì)胞功能，在疾病中的研究也越來越多，同樣TFEB也在腎臟病的發(fā)生發(fā)展中扮演重要角色，適當(dāng)調(diào)控TFEB 有望治療腎臟疾病。

4 TFEB與腎臟疾病

4.1TFEB與腎細(xì)胞癌 腎細(xì)胞癌起源于腎的上皮細(xì)胞，包括乳頭狀癌(15%～20%)、透明細(xì)胞癌(65%～70%)、嫌色細(xì)胞癌(5%～10%)和MiTF家族相關(guān)性腎癌(2%)[20-21]。MiTF 家族相關(guān)性腎癌包括Xp11.2易位/TFE3基因融合相關(guān)性腎細(xì)胞癌和t(6;11)(P21;q12)/TFEB基因融合相關(guān)性腎細(xì)胞癌(簡稱TFEB腎細(xì)胞癌)。兩者具有相似的臨床特點(diǎn)、組織形態(tài)和分子遺傳學(xué)特征，均為染色體易位形成轉(zhuǎn)錄因子基因，導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄因子TFE3或TFEB過度表達(dá)，進(jìn)而誘發(fā)腫瘤形成[22]。

TFEB腎細(xì)胞癌的基因融合位點(diǎn)已明確，是位于11號染色體的非蛋白編碼基因Alpha和6號染色體的TFEB基因相互融合，形成Alpha-TFEB融合基因。近年來 TFEB 分離探針 FISH 被認(rèn)為是診斷TFEB腎細(xì)胞癌強(qiáng)有力的工具[23]。由于啟動子的變換，TFEB 腎細(xì)胞癌在mRNA 和蛋白水平均高表達(dá)TFEB。癌細(xì)胞蛋白免疫組化染色核TFEB呈彌漫性強(qiáng)陽性，為診斷TFEB 腎細(xì)胞癌高度敏感性和特異性的標(biāo)志物[24]。

目前TFEB基因高表達(dá)以致腎腫瘤發(fā)生發(fā)展的機(jī)制還未清楚，因發(fā)病率極低，腎癌術(shù)后輔助治療的價值尚難以評估。為了研究TFEB腎細(xì)胞癌腫瘤發(fā)展的潛在機(jī)制，Calcagnì等[25]通過雜交生成2種分別以組成型和誘導(dǎo)型方式特異性過表達(dá)TFEB的雜合轉(zhuǎn)基因小鼠，即Cdh16Cre::Tfebfs小鼠和Cdh16CreErt2::Tfebfs小鼠。在這2個腎癌模型中，Wnt通路高度活化，且TFEB參與激活Wnt通路,表明這個通路在TFEB誘發(fā)腎癌中起著重要作用。用Wnt抑制劑PKF118-310和尾孢菌素(cercosporin, CGP049090)干預(yù)TFEB腎細(xì)胞癌模型小鼠可以降低癌細(xì)胞增殖力、減輕甚至后期完全改善腎癌病理表型[25]。由此可以推測針對Wnt信號通路進(jìn)行靶點(diǎn)治療有望成為TFEB腎細(xì)胞癌有效的干預(yù)策略。

研究表明，MiTF/TFE基因驅(qū)動的自噬激活在胰腺癌發(fā)生發(fā)展中起重要作用[26]。為了證實(shí)TFEB過表達(dá)對腎臟轉(zhuǎn)錄組的影響，CalcagnX等[25]檢測了Cdh16Cre::Tfebfs小鼠溶酶體生成及自噬相關(guān)基因，意外的是這些基因的表達(dá)與對照組相比并沒有明顯差異，轉(zhuǎn)基因小鼠腎的自噬標(biāo)志物L(fēng)C3蛋白水平也沒有明顯改變。為了進(jìn)一步檢驗(yàn)自噬在TFEB 腎細(xì)胞癌發(fā)病機(jī)理的作用，將Cdh16Cre::Tfebfs小鼠與自噬缺陷的Atg7flox/flox小鼠雜交，與Cdh16Cre::Tfebfs小鼠比較，在這種雜交小鼠中并未觀察到腎體積及癌巢表型的改變，因此他們認(rèn)為自噬并未參與TFEB腎細(xì)胞癌的發(fā)展。眾所周知，TFEB是溶酶體與自噬基因網(wǎng)絡(luò)主要調(diào)控因子，至于TFEB高表達(dá)是否影響TFEB腎細(xì)胞癌自噬-溶酶體通路，可以從TFEB 腎細(xì)胞癌病人癌組織標(biāo)本入手評價自噬與溶酶體的情況?？傊淖僒FEB 腎細(xì)胞癌染色體異位可能比較困難，TFEB過表達(dá)可激活Wnt通路，誘發(fā)腎癌的發(fā)生及癌細(xì)胞的增殖及侵襲，或許阻斷TFEB活化的下游通路可以治療TFEB 腎細(xì)胞癌。

4.2TFEB與糖尿病腎病(diabetic kidney disease，DKD) 在世界范圍內(nèi)，DKD是目前導(dǎo)致終末期腎臟病(end-stage renal disease，ESRD)的最常見的病因。近年大量的研究顯示,高糖和晚期糖基化終產(chǎn)物(advanced glycation end products，AGEs)等DKD致病因素可激活多種腎臟細(xì)胞信號通路，導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生各種各樣的生物學(xué)行為異常(如系膜細(xì)胞周期停滯和細(xì)胞外基質(zhì)分泌增多；足細(xì)胞發(fā)生早衰、異常凋亡及間質(zhì)樣轉(zhuǎn)化；腎小管上皮細(xì)胞過度產(chǎn)生致病因子及發(fā)生間質(zhì)轉(zhuǎn)化等[27])，是DKD發(fā)生和發(fā)展的病理生理基礎(chǔ)[28]。同時大量證據(jù)表明自噬缺陷參與糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展。DKD 動物模型腎組織和DKD患者腎穿刺組織自噬底物蛋白p62大量積聚[29]；我們前期研究也顯示,DKD狀態(tài)下腎小管上皮細(xì)胞自噬活性嚴(yán)重受抑制，表現(xiàn)為腎小管上皮細(xì)胞自噬體標(biāo)志蛋白LC3-II表達(dá)增多和p62在細(xì)胞內(nèi)堆積，溶酶體功能障礙且出現(xiàn)溶酶體膜透化(lysosomal membrane permeation，LMP)現(xiàn)象[30-31]。目前二甲雙胍和白藜蘆醇等腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase，AMPK)激活劑作為修復(fù)自噬活性的靶點(diǎn)藥物在糖尿病腎病的治療方面受到的研究越來越多[29]。TFEB作為自噬與溶酶體的主要調(diào)控因子，更加有望成為治療DKD新靶點(diǎn)。

DKD致病因素刺激下，TFEB表達(dá)及活化減少。Takahashi等[32]觀察到AGEs在自噬缺陷的糖尿病小鼠的腎小球、腎血管及腎小管上皮細(xì)胞大量聚集，并伴隨腎血管中膜增厚、腎間質(zhì)炎癥與纖維化。AGEs及高糖超負(fù)荷下，體外培養(yǎng)人遠(yuǎn)端腎小管上皮細(xì)胞(proximal tubular epithelial cells，PTEC)中LC3-II增多，采用溶酶體抑制劑巴弗洛霉素(bafilomycin)干預(yù)并沒有進(jìn)一步增多，表明在AGEs與高糖等DKD致病因子的刺激下，腎小管上皮細(xì)胞自噬-溶酶體通路阻塞，且很大可能是下游溶酶體功能障礙所致，但他們并未觀察到LMP現(xiàn)象。同時自噬缺陷的PTEC中TFEB蛋白表達(dá)減少，且TFEB入核障礙?？傊?，自噬缺陷的腎小管上皮細(xì)胞由于TFEB表達(dá)減少及活化不足，導(dǎo)致溶酶體再生及功能障礙，從而使AGEs大量堆積。因此，TFEB的活性不足可能是DKD腎小管上皮細(xì)胞自噬-溶酶體受阻的重要原因。

足細(xì)胞是腎小球毛細(xì)血管壁上的終末分化的上皮細(xì)胞，易受代謝和血流動力學(xué)影響而損傷，且再生及重建能力有限，因此足細(xì)胞基礎(chǔ)自噬高，同時也依賴自身生存信號，非受體激酶Janus 激酶2(Janus kinase 2， JAK2)主要調(diào)控這些生存信號。JAK/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子(signal transducer and activator of transcription,STAT)通路是級聯(lián)放大信號，調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、增殖和分化，在糖尿病腎病中處于活化狀態(tài)[33]。近來研究發(fā)現(xiàn)JAK1/2抑制劑巴瑞克替尼(baricitinib)可以減少蛋白尿及腎炎癥指標(biāo)的表達(dá)，現(xiàn)已進(jìn)入二期臨床試驗(yàn)。抑制JAK2基因有望治療糖尿病腎病而受到廣泛關(guān)注。但有研究發(fā)現(xiàn)敲除足細(xì)胞JAK2的小鼠尿蛋白排泄增加并伴隨足細(xì)胞自噬體變大變多和溶酶體、p62聚集等自噬降解受阻現(xiàn)象。同時也觀察到JAK2敲除的足細(xì)胞自噬體-溶酶體融合的相關(guān)基因(16種)基本沒有明顯改變，但溶酶體下游基因卻表達(dá)減少，組織蛋白酶D(cathepsin D，CD)活性也下降。這表明自噬降解受阻很可能是溶酶體功能下降引起的。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)敲除JAK2后，TFEB啟動子活性降低，基因、蛋白水平及入核情況均減少。進(jìn)一步計算機(jī)分析及染色體免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)JAK2依賴的轉(zhuǎn)錄因子STAT1與TFEB的啟動子區(qū)域相連。因此認(rèn)為JAK2的缺失直接導(dǎo)致TFEB表達(dá)及功能受限，從而使足細(xì)胞溶酶體降解功能障礙。最后過表達(dá)TFEB調(diào)控JAK2缺陷的足細(xì)胞可以糾正溶酶體功能紊亂，降低尿蛋白的選擇滲透性[34]。這表明JAK2通過直接調(diào)控TFEB，增強(qiáng)細(xì)胞降解能力而保護(hù)足細(xì)胞，對維持足細(xì)胞穩(wěn)態(tài)起著重要作用，應(yīng)當(dāng)注意JAK1/2抑制劑巴瑞克替尼可能會帶來未知嚴(yán)重的毒副作用。至于系膜細(xì)胞，Peres等[35]也發(fā)現(xiàn)，AGEs及高糖刺激下，系膜細(xì)胞mTOR活化，總TFEB表達(dá)減少，使組織蛋白酶B(cathepsin B，CB)等溶酶體酶活性下降。

由此可見，糖尿病腎病狀態(tài)下，腎臟固有細(xì)胞都出現(xiàn)自噬-溶酶體通路受阻，TFEB表達(dá)或活化減少的現(xiàn)象，過表達(dá)TFEB可促進(jìn)溶酶體新生，提高溶酶體降解功能，增強(qiáng)自噬?？傊?，在糖尿病腎病狀態(tài)下，TFEB參與腎臟細(xì)胞的病理改變，調(diào)控TFEB很大可能可以減輕各種致病因子對腎臟固有細(xì)胞的損傷，提高腎臟固有細(xì)胞應(yīng)激及自身修復(fù)能力，從整體上改善糖尿病腎病病理狀態(tài)，延緩糖尿病腎病向終末期腎病的進(jìn)展。

4.3TFEB與胱氨酸腎病(cystine nephropathy) 胱氨酸病是一種罕見的常染色體隱性遺傳病，是由于CTNS雙等位基因突變，導(dǎo)致溶酶體L-胱氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(cystinosin)缺乏，使游離的胱氨酸在溶酶體內(nèi)蓄積，從而引起眼、腎臟和心臟等器官功能障礙[36]。按照臨床表型不同，胱氨酸病分為腎病型、中間型和眼型，其中腎病型最常見，患者以腎臟受累為首發(fā)癥狀,首先引起腎近端小管功能紊亂，即范可尼綜合征(Fanconi syndrome)，表現(xiàn)為多尿、氨基酸尿、糖尿和蛋白尿等，進(jìn)而逐漸進(jìn)展為ESRD[37]?；蛟\斷是確診胱氨酸病及病因分析的可靠方法。補(bǔ)充半胱胺為胱氨酸病特異性治療方法[38]。但是半胱胺惡臭的氣味及胃腸道反應(yīng)等使多數(shù)病人不能堅持治療，并且它并不能完全糾正胱氨酸病的并發(fā)癥包括腎范可尼綜合征。因此，迫切需要探索能夠改善胱氨酸腎病患者生活質(zhì)量及預(yù)后的新治療方案。

Rega等[39]研究發(fā)現(xiàn)胱氨酸腎病患者腎小管上皮細(xì)胞(CTNS-/-ciPTEC)中TFEB在mNRA及蛋白水平均下降約40%，且沉默多種細(xì)胞系的CTNS基因均可觀察到TFEB表達(dá)大幅度降低。用半胱胺治療CTNS-/-ciPTEC 可使細(xì)胞內(nèi)蓄積的胱氨酸降低約90%，但不能糾正TFEB的缺失；同時CTNS-/-ciPTEC在TFEB表達(dá)量減少的情況下，TFEB在核內(nèi)分布比例明顯升高(3.5倍)。Andrzejewska等[40]發(fā)現(xiàn)，來自CTNS-/-小鼠的近端小管上皮細(xì)胞中由于cystinosin 缺失而不能與v-ATPase-Ragulator-Rags復(fù)合物相結(jié)合，使mTORC1信號通路處于抑制的狀態(tài)，用半胱胺干預(yù)減少胱氨酸的蓄積卻不能使mTORC1 通路激活。由此可推測cystinosin缺乏致使胱氨酸腎病細(xì)胞TFEB表達(dá)總量減少，mTORC1信號通路抑制，加之胱氨酸蓄積引發(fā)溶酶體應(yīng)激均可能激活TFEB，使TFEB代償性核移位。故cystinosin不僅僅是胱氨酸的運(yùn)載體，還是mTORC1信號通路的調(diào)節(jié)元件，且cystinosin缺乏引起TFEB表達(dá)減少，這就為解釋半胱氨為什么不能完全緩解范可尼綜合征提供了新思路。

研究發(fā)現(xiàn)CTNS基因啟動子序列含有CLEAR調(diào)控框，在不同細(xì)胞系中過表達(dá)TFEB均可使CTNS的mRNA表達(dá)明顯升高[10]。Johnson等[41]發(fā)現(xiàn)胱氨酸腎病細(xì)胞TFEB功能紊亂使Rab27a表達(dá)下調(diào)，持續(xù)表達(dá)活性形式的Rab27a可促進(jìn)細(xì)胞胞吐，降低胱氨酸腎病細(xì)胞胱氨酸的含量，這表明TFEB通過增加CTNS基因轉(zhuǎn)錄及增強(qiáng)溶酶體胞吐促進(jìn)蓄積胱氨酸的清除與轉(zhuǎn)運(yùn)。此外，免疫電鏡觀察到過表達(dá)TFEB可以糾正CTNS-/-ciPTEC 溶酶體異常形態(tài)及數(shù)量的改變，使胱氨酸超負(fù)荷的溶酶體恢復(fù)自身穩(wěn)態(tài)[39]。

總而言之，胱氨酸腎病狀態(tài)下，TFEB表達(dá)減少且活化不足，調(diào)控TFEB可顯著減少胱氨酸的蓄積，修復(fù)損傷的溶酶體而有望改善范可尼綜合征，這無疑為胱氨酸腎病患者帶來新的治療希望。

5 總結(jié)

TFEB龐大的轉(zhuǎn)錄功能體系吸引了各個領(lǐng)域科研工作者的目光。隨著對TFEB及其家族成員研究的不斷深入，它們越來越多的功能、調(diào)節(jié)機(jī)制及特異性調(diào)節(jié)藥物不斷被發(fā)掘，很快成為了細(xì)胞病理生理功能的多面手。目前TFEB已經(jīng)成為神經(jīng)退行性病變、溶酶體儲積癥等潛在的治療靶點(diǎn)，但對于在腎臟方面的研究還處于起步階段。由于TFEB功能還涉及細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)、炎癥和免疫等，從現(xiàn)有的研究成果不難推測TFEB很大可能在各種急慢性腎臟病的發(fā)生或發(fā)展中均占據(jù)重要地位，針對性調(diào)控TFEB有望為腎臟疾病的治療提供新思路新方向。

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