豬流行性腹瀉病毒疫苗的研究進(jìn)展

文│姜威（遼寧省北票市章吉營動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所）

豬流行性腹瀉（PED），主要是由流行性腹瀉病毒造成的。具有居高不下的發(fā)病率，為接觸性傳染疾病。引發(fā)該病的病毒為豬流行性腹瀉病毒（PEDV），具有起病急驟，傳染迅速的特點(diǎn)，主要的臨床癥狀包括脫水、腹瀉、嘔吐等，容易導(dǎo)致較高的病死率，尤其是尚在哺乳期的仔豬，其患病率可達(dá)到100%，7日齡以下的仔豬的病死率高達(dá)80%～100%。

有相關(guān)研究表明，豬流行性腹瀉病的暴發(fā)到目前為止仍然非常嚴(yán)重，不僅給養(yǎng)殖戶帶來了巨大的損失，還對(duì)養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展造成了重創(chuàng)。為了改善這一狀況，近年來，對(duì)PEDV的基因組織結(jié)構(gòu)、流行性病學(xué)、檢測(cè)方法等進(jìn)行探討已經(jīng)成為獸醫(yī)臨床上的主要研究熱點(diǎn)。

一、豬流行性腹瀉病毒的基因組織結(jié)構(gòu)

PEDV的基因組織為RNA（單股正鏈感染性），屬于一種傳染性極強(qiáng)的單股正鏈RNA的病毒（含包膜），在基因組織的5'端和3'端不僅存在非編碼的區(qū)域，還有Poly（A）尾巴，而其他基因組所包含的開放性閱讀框至少有7個(gè)，結(jié)構(gòu)蛋白的編碼則有4種，分別包括E（小膜蛋白）、N（核衣殼蛋白）、S（纖突蛋白）、M（膜糖蛋白）以及非結(jié)構(gòu)蛋白3個(gè)。其中，基因組的排列一般為5'-復(fù)制酶-S-ORF3-M-N-3'。

另外，PEDV內(nèi)的DNA聚合酶主要是由ORF（2個(gè)）組成的，且于5'端和2～3的區(qū)域?qū)蚪M進(jìn)行覆蓋?；蚪M的結(jié)構(gòu)蛋白主要是N蛋白、S蛋白、M蛋白、E蛋白，它們分子量的大小分別為20～30kDa、150～220kDa、58kDa、7kDa。

二、豬流行性腹瀉病的流行病學(xué)

有相關(guān)研究報(bào)道，2013年，臺(tái)灣暴發(fā)了大規(guī)模的PED，并在2周內(nèi)導(dǎo)致大量的仔豬發(fā)生感染并死亡，經(jīng)濟(jì)損失十分嚴(yán)重；2014年，墨西哥、加拿大以及美國等美洲地區(qū)的各大城市都陸續(xù)爆發(fā)了PED，給人們帶來了嚴(yán)重的財(cái)產(chǎn)損失。Lin等獸醫(yī)臨床研究人員對(duì)毒株進(jìn)行了分析與研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)美國流行的毒株和臺(tái)灣的18個(gè)毒株同屬于一個(gè)進(jìn)化分支。截至2014年，在美國的30多個(gè)州都開始大面積地暴發(fā)PED，重創(chuàng)了8200多個(gè)養(yǎng)豬場(chǎng)，并造成了不可挽回的損失。

在該病發(fā)生9個(gè)月后，加拿大那安大略省圭爾夫大學(xué)動(dòng)物衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)室首次發(fā)現(xiàn)并確診了PED病例：研究人員采用RT-PCR方法對(duì)PEDV N基因進(jìn)行擴(kuò)增并與S基因進(jìn)行比較，結(jié)果顯示，美國和加拿大毒株具有較高的同源性，為99.8%。之后，研究人員又在豬飼料的血漿蛋白粉（添加劑）中檢測(cè)到了大量的PEDV，從而懷疑血漿蛋白粉是引發(fā)PED的主要原因。為了證實(shí)這一猜想，研究人員針對(duì)該病毒展開了動(dòng)物試驗(yàn)，結(jié)果表明，3周齡的仔豬都受到了感染，但未表現(xiàn)出顯著的癥狀，因此無法證明加拿大毒株是否和豬飼料中的血漿蛋白粉有聯(lián)系，故不排除是否由于其他原因?qū)е铝思幽么驪ED的發(fā)生流行。

三、豬流行性腹瀉病的檢測(cè)技術(shù)及疫苗

由于豬傳染性胃腸炎（TGE）的體征癥狀、流行病學(xué)和豬流行性腹瀉病的十分相似，因此在診斷時(shí)，必須根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的臨床檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行診斷，以提高確診率。其中，較為常見的檢測(cè)技術(shù)包括了膠體金檢測(cè)技術(shù)（GICA）、熒光定量PCR、ELISA方法以及RT-PCR法等。

熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)主要是將熒光基團(tuán)添加至PCR的反應(yīng)體系中，并借助熒光信號(hào)對(duì)PCR的整個(gè)變化過程進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)控，最后利用標(biāo)準(zhǔn)曲線定量分析未知模板。該技術(shù)不僅有效避免了傳統(tǒng)技術(shù)無準(zhǔn)確定量、PCR容易發(fā)生感染、后續(xù)的處理步驟繁雜等的不足，還有效增強(qiáng)了靈敏度和特異性，再加上檢測(cè)速度較快，操作簡單、重復(fù)性較好、定量標(biāo)準(zhǔn)等優(yōu)點(diǎn)，使得PCR技術(shù)被廣泛應(yīng)用于PEDV的臨床診斷中，并取得了顯著的檢測(cè)效果。當(dāng)前，市場(chǎng)上用于豬流行性腹瀉病的疫苗分別是滅活菌及弱毒菌。而國內(nèi)一般是在CV777的基礎(chǔ)上采取PEDV滅活苗進(jìn)行治療，防治效果十分明顯。

四、結(jié)語

總之，豬流行性腹瀉病具有高發(fā)病率及病死率，是傳染性極強(qiáng)的一種消化道疾病，而PEDV是引發(fā)該疾病的主要病因。為了最大限度地降低豬流行性腹瀉帶來的經(jīng)濟(jì)損失，必須對(duì)PEDV的流行病學(xué)、基因組織結(jié)構(gòu)、檢測(cè)技術(shù)等進(jìn)行探討，以盡快確診PEDV，并及時(shí)采取有效措施進(jìn)行防治，從而促進(jìn)豬養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。