血清白細胞介素-35水平與急性運動軸索型神經(jīng)病患者疾病嚴重程度的關系

朱思語，常生輝，丑麗莎，張大啟，李立敏，楊麗

急性運動軸索型神經(jīng)?。╝cute motor axonal neuropathy，AMAN）是吉蘭-巴雷綜合征（Guillain-Barre syndrome，GBS）的常見亞型，好發(fā)于東亞和南美洲人群，臨床特點是病情急，易迅速出現(xiàn)四肢癱瘓和呼吸肌麻痹，進展快、病殘率高、預后差。目前，研究多認為AMAN是一種繼發(fā)于感染后的自身免疫性疾?。?］。白細胞介素-35（interleukin-35，IL-35）是一種由活化的炎癥細胞分泌的負向免疫調(diào)節(jié)因子，目前其已知的功能包括：維持外周的免疫系統(tǒng)、調(diào)控效應T細胞的增殖及抑制Th17細胞的分化和IL-17的合成；其與自身免疫性疾病和感染性疾病密切相關。研究表明，IL-35在自身免疫性疾病的發(fā)病機制中起重要作用［2-4］。然而，在AMAN患者中IL-35的作用尚未明確。本研究旨在探討IL-35與AMAN患者疾病嚴重程度、預后及其他相關臨床參數(shù)之間的關系，以期為臨床提供參考。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2010年7月—2015年7月于天津醫(yī)科大學總醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院治療的AMAN患者30例（AMAN組），男15例，女15例，年齡17～75歲，平均（44.43±15.73）歲；均符合1990年Asbury制定的GBS診斷標準中AMAN亞型［5］，且排除高鉀血癥、低鉀血癥、血卟啉病、結(jié)締組織病和其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病。同期選取健康對照組（healthy controls，HCs）30例，男8例，女22例，年齡23～65歲，平均（47.63±12.10）歲，均為我院體檢中心選取的健康志愿者，抽血前無感染性疾病、腫瘤、自身免疫性疾病等病史。2組年齡（t=0.883）與性別（χ2=3.455）差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。2組血標本收集前患者未接受過皮質(zhì)類固醇激素、抗炎藥物、血漿交換和免疫球蛋白治療。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集 記錄所有研究對象性別、年齡及患者既往感染史、血清抗神經(jīng)節(jié)苷脂GM1/GQ1b抗體、住院期間治療情況等資料。研究對象均自發(fā)病起約2周時進行神經(jīng)電生理檢查。入院2周時采用GBS運動功能缺損評分（GBS disability score，GDS）評估患者的疾病嚴重程度［6］，采用Erasmus吉蘭-巴雷綜合征預后評分（Erasmus GBS outcome score，EGOS）評估患者6個月內(nèi)的預后［6-7］，其中GDS和EGOS評分由兩位具備資格的神經(jīng)科醫(yī)生獨立完成并校對。

1.2.2 血清IL-35水平檢測 AMAN組于急性期采集空腹靜脈血3 mL，對照組空腹采等量血標本。留取血清標本于-80℃凍存，采用人IL-35酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒（美國Biolegend公司）檢測血清IL-35水平，參照說明書要求應用酶標儀測定在450 nm波長下各底物吸光度值，制作標準曲線，計算各樣本IL-35濃度，本實驗中依標準品對IL-35檢測限度（0.13 μg/L）分為低分泌組（＜0.13 μg/L）和分泌組（≥0.13 μg/L）組，比較2組GDS和EGOS水平差異。

1.2.3 血清抗神經(jīng)節(jié)苷脂GM1和GQ1b抗體檢測 將凍存于-80℃的血清標本分別采用GM1和GQ1b的ELISA試劑盒（中國武漢華美CUSABIO）進行檢測，根據(jù)說明書用酶標儀在450 nm波長下測定光密度（OD）值，與臨界值相比較。陽性判斷：樣本孔OD/陰性對照孔OD≥2.1，陰性判斷：樣本孔OD/陰性對照孔OD＜2.1。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料采用例（%）表示，組間比較用χ2檢驗；符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，2組間比較用獨立樣本t檢驗；非正態(tài)分布的計量資料以M（P25，P75）表示，組間比較用Mann-Whitney秩和檢驗，相關分析采用Spearman等級相關。檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1AMAN組一般資料結(jié)果 AMAN組有前驅(qū)感染史12例，其中腹瀉8例，上呼吸道感染4例。GDS（3.90±0.80）分，EGOS（4.53±1.07）分；GM1抗體陽性13例，GQ1b抗體陽性2例，雙抗體陽性患者1例。

2.2 2組血清IL-35水平比較 AMAN組（30例中有17例IL-35的值為0）及HCs組血清IL-35水平分別為0（0，0.73）μg/L、0.52（0.24，2.42）μg/L，差異有統(tǒng)計學意義（Z=2.797，P＜0.05）。

2.3 血清IL-35水平與疾病嚴重程度及預后的關系 AMAN患者急性期血清IL-35水平與住院2周GDS和EGOS呈負相關（rs分別為-0.430和-0.523，均P＜0.05）。

2.4 低分泌組和高分泌組GDS和EGOS情況 低分泌組（17例）患者的GDS和EGOS均高于分泌組（13例），差異有統(tǒng)計學意義（GDS：分，4.18±0.81vs.3.54±0.66，t=2.312，P＜0.05；EGOS：分，4.97±1.04vs.3.96±0.83，t=2.872，P＜0.05）。

3 討論

目前研究表明，AMAN的發(fā)病機制與抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體及補體介導的對軸突表面細胞膜的攻擊有關，免疫攻擊的對象主要是運動神經(jīng)軸膜上的神經(jīng)節(jié)苷脂 GM1，GM1b，GD1a和 GalNAc-GD1a［8-9］；而IL-12家族在炎癥的發(fā)病過程中起重要作用，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)自身免疫性疾病的潛在治療靶點［10］。作為IL-12家族的成員，IL-12和IL-23在GBS患者中的促炎作用已經(jīng)被證實［11-12］，而IL-35的作用還未完全闡明。IL-35作為一種抗炎因子，由調(diào)節(jié)性T細胞（Tregs）和調(diào)節(jié)性B細胞（Bregs）產(chǎn)生，其通過抑制Th1/Th17細胞來下調(diào)免疫反應，在維持免疫穩(wěn)態(tài)中具有重要作用，并且在葡萄膜炎動物模型中已經(jīng)被證實，IL-35能抑制有害的免疫反應，將重組IL-35轉(zhuǎn)移到小鼠體內(nèi)后發(fā)現(xiàn)，Bregs誘導產(chǎn)生的IL-35能阻止葡萄膜炎的進展，這提示IL-35為治療自身免疫性疾病提供了一種可能［13］，也被認為是一個很有前景的免疫治療靶點［10］。本研究發(fā)現(xiàn)，AMAN組較HCs組IL-35水平偏低，表明IL-35可能參與了AMAN的病理改變，除此之外，AMAN組血清IL-35水平與患者疾病的嚴重程度和預后呈負相關，提示IL-35可能在AMAN患者中起到保護作用。低分泌組GDS和EGOS較分泌組升高，表明低分泌組患者的病情及預后均較重，提示IL-35有希望成為AMAN患者治療的靶點，這為AMAN患者早期病情的評估、預后及對應治療均有重要的指導意義。

目前，相關研究認為IL-35是一種負向免疫調(diào)節(jié)因子，主要抑制CD4+效應T細胞（Teff細胞、Th1、Th2、Th17）和B細胞的增殖、降低Th1型細胞因子的分泌，以及通過抑制調(diào)節(jié)性T細胞的轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的表達使IL-35誘導Tregs產(chǎn)生（iTR35細胞）作用，最終維持機體的免疫穩(wěn)態(tài)［12，14-15］。此外，IL-35是調(diào)節(jié)CD4+T細胞功能及Tregs活性的治療靶點，目前已經(jīng)證實，GBS患者中IL-35在體外治療CD4+T細胞的療效是通過降低Tregs、Th2細胞的反應來增強Th1和Th17細胞的應答而實現(xiàn)［16］。

綜上所述，IL-35可能參與了AMAN的發(fā)病機制，且在疾病的發(fā)展過程中起保護作用。血清IL-35的水平可能作為評估患者病情嚴重程度和預后的重要生物學標志物，也有希望成為這一疾病新的治療靶點。

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