miR—205在乳腺癌患者血漿中的表達(dá)及臨床意義研究

張慶玲

【摘要】 目的：研究乳腺癌患者血漿標(biāo)本中miR-205的表達(dá)水平及臨床意義。方法：選取本院收治的乳腺癌患者60例為乳腺癌組，乳腺良性病變患者60例為乳腺良性病變組，健康人群60例為對(duì)照組。抽取血漿標(biāo)本，檢測(cè)并觀察三組miR-205的水平，分析其對(duì)乳腺癌的診斷價(jià)值、與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系，分析影響乳腺癌預(yù)后因素。結(jié)果：乳腺癌組血漿中miR-205表達(dá)水平均高于對(duì)照組和乳腺良性病變組（P<0.05）；miR-205診斷乳腺癌的AUC為0.842，特異性為92.3%、靈敏度為84.6%；miR-205水平與TNM分期、腫瘤大小、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切（P<0.05）；Cox回歸分析顯示，腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、miR-205水平均與乳腺癌預(yù)后密切相關(guān)，可作為獨(dú)立的預(yù)后因子（P<0.05）。結(jié)論：乳腺癌患者血漿中miR-205呈較高表達(dá)，與臨床病理學(xué)參數(shù)關(guān)系密切，對(duì)乳腺癌的診斷價(jià)值較高，且是影響腺癌預(yù)后的因子之一。

【關(guān)鍵詞】 乳腺癌； miR-205； 臨床病理參數(shù)； 診斷

【Abstract】 Objective：To study the expression and clinical significance of miR-205 in plasma of patients with breast cancer.Method：A total of 60 patients with breast cancer in our hospital were selected as breast cancer group，60 patients with breast benign lesions as breast benign lesion group，and 60 healthy people as control group.Plasma samples were extracted，the levels of miR-205 in three groups were detected and observed，the diagnostic value of miR-205 in breast cancer and its relationship with clinicopathological parameters were analyzed，the prognostic factors of breast cancer were analyzed.Result：The expression level of miR-205 in plasma of breast cancer group were higher than those of control group and benign breast lesion group（P<0.05）.The AUC of miR-205 in diagnosing breast cancer was 0.842，the specificity was 92.3% and the sensitivity was 84.6%.The level of miR-205 was closely related to TNM stage，tumor size，differentiation degree and lymph node metastasis（P<0.05）.Cox regression analysis showed that tumor size，lymph node metastasis and the level of miR-205 were closely related to the prognosis of breast cancer and could be used as independent prognostic factors（P<0.05）.Conclusion：The expression of miR-205 in plasma of patients with breast cancer is high，which is closely related to clinicopathological parameters，has high diagnostic value for breast cancer and is one of the factors affecting the prognosis of adenocarcinoma.

【Key words】 Breast cancer； miR-205； Clinical pathology parameters； Diagnosis

First-authors address：Jingzhou Chest Hospital，Jingzhou 434000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.33.002

微小RNA（microRNA，miRNA）屬于內(nèi)源性非編碼單鏈RNA，雖然其含量低，但調(diào)控人類將近33.3%的基因表達(dá)。miRNAs既可起促癌作用，也可起抑癌作用。早期報(bào)道發(fā)現(xiàn)在外周血中可以檢測(cè)出穩(wěn)定的miRNAs[1]。miRNAs在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著非常重要的作用，很多研究學(xué)者認(rèn)為其可以成為腫瘤新的診斷標(biāo)志物[2-3]。近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)血漿中含有穩(wěn)定性較高的miRNA，可使得標(biāo)本的獲取更加方便，患者更容易接受。miR-205作為miRNA家族中重要的一員，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展也有密切的聯(lián)系，且有研究發(fā)現(xiàn)miR-205與惡性腫瘤有關(guān)[4]，但其在乳腺癌中的診斷價(jià)值尚不明確。因此，本研究擬采用PCR技術(shù)檢測(cè)乳腺癌患者血漿miR-205水平，并分析miR-205水平與患者臨床病理特征的關(guān)系及對(duì)乳腺癌的診斷價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年3月-2017年3月本院確診為乳腺癌的患者60例為乳腺癌組，乳腺良性病變患者60例為乳腺良性病變組。納入標(biāo)準(zhǔn)：乳腺癌及乳腺良性病變患者入院確診為該類疾病便被納入研究人群，并且之前兩個(gè)月內(nèi)未服用任何藥物；經(jīng)病理切片和影像學(xué)方法確診，入院前均未接受任何治療；沒(méi)有其他并發(fā)癥、內(nèi)分泌性疾病及其他惡性腫瘤；簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：并發(fā)有嚴(yán)重器官衰竭性疾病及內(nèi)分泌性疾病；正在接受放化療及拒絕參加的患者；病情加重急需馬上治療的患者。另選取同期體檢中心健康人群60例為對(duì)照組。研究經(jīng)本院倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)，并且研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

1.2.1 主要儀器和試劑 TRIzol試劑盒（Invitrogen公司，美國(guó)），逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和2×Tap PCR MasterMix購(gòu)自武漢華美生物有限公司，PCR儀（ABI公司），引物由武漢巴菲爾生物有限公司提供。

1.2.2 RNA提取及cDNA合成 清晨抽取患者空腹靜脈血于肝素采血管中，收集上層血漿凍存于-80 ℃超低溫冰箱待用。采用TRIzol試劑提取血漿總RNA，紫外分光光度及測(cè)其濃度及純度。將200 ng總RNA按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒操作書(shū)完成。

1.2.3 實(shí)時(shí)定量PCR（RT-PCR）法檢測(cè)miR-205表達(dá) 反應(yīng)體系：10 μmol/L正、反向PCR特異引物均為0.4 μL，dNTP 1.0 μL，10×PCR引物PCR緩沖液1.0 μL，MgCl2溶液0.6 μL，Taq聚合酶0.5 U，Syber greenI 0.25 μL，ROX Reference Dye 0.2 μL，終體積8 μL。擴(kuò)增條件：95℃，3 min；45個(gè)循環(huán)（95℃，15 s；55℃，20 s；72℃，20 s；75℃，20 s）。每組設(shè)置3個(gè)平行管。

miR-205引物：F 5-CACGTCCCAGGCTCCA-3，R 5-CGGGCATCGAAACTGCCAATT-3。內(nèi)參β-actin引物：F 5-CTCCATCCTGGCCTCGCTGT-3，R 5-GCTGTCACCTTCACCGTTCC-3。miR-205相對(duì)表達(dá)量采用β-actin作為參照計(jì)算，并以二分位數(shù)為臨界點(diǎn)，小于二分位數(shù)的為低表達(dá)，高于二分位數(shù)的為高表達(dá)。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察三組血漿中miR-205表達(dá)水平，分析miR-205對(duì)乳腺癌的診斷價(jià)值、與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系，分析影響乳腺癌預(yù)后因素。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 20.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)；采用ROC曲線評(píng)估診斷價(jià)值，采用Cox回歸分析影響乳腺癌預(yù)后的因素。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組基線資料比較 乳腺癌組年齡33～75歲，平均（51.2±12.8）歲，<60歲25例，≥60歲35例；TNM分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期14例，Ⅲ期22例，Ⅳ期13例；腫瘤大?。骸? mm有34例，>3 mm有26例；分化程度：未或低分化35例，中、高分化25例；存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者45例。乳腺良性病變組年齡32～78歲，平均（53.6±13.4）歲，<60歲23例，≥60歲37例。對(duì)照組年齡30～76歲，平均（51.5±12.6）歲，<60歲27例，≥60歲33例。三組年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 三組血漿中miR-205表達(dá)水平及對(duì)乳腺癌的診斷價(jià)值 對(duì)照組和乳腺良性病變組血漿中miR-205表達(dá)水平分別為（2.34±0.67）和（3.47±0.86），比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=8.029，P<0.05）；而乳腺癌組血漿中miR-205表達(dá)水平為（7.69±1.26），均高于對(duì)照組和乳腺良性病變組（t=6.304、9.354，P<0.05），比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。miR-205在乳腺癌的診斷ROC中，AUC為0.842，95%CI為（0.792，0.891），診斷乳腺癌的特異性為92.3%、靈敏度為84.6%，截?cái)嘀禐?.62。見(jiàn)圖1。

2.3 miR-205表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 以miR-205表達(dá)水平的二分位數(shù)6.31為臨界點(diǎn)，低表達(dá)23例，高表達(dá)37例；miR-205水平與年齡無(wú)關(guān)（P>0.05）；與TNM分期、腫瘤大小、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.4 影響乳腺癌預(yù)后因素分析 Cox回歸分析顯示，腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、miR-205水平均與乳腺癌預(yù)后密切相關(guān)，可作為獨(dú)立的預(yù)后因子（P<0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

miRNA是一種小分子的內(nèi)源性非編碼RNA，可以和mRNA非編碼區(qū)互補(bǔ)結(jié)合，導(dǎo)致mRNA斷裂或阻止其翻譯，在轉(zhuǎn)錄后水平反向調(diào)控基因表達(dá)水平，在細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和凋亡過(guò)程中起著關(guān)鍵作用[5]。因?yàn)閙iRNA能在機(jī)體中穩(wěn)定表達(dá)，于是對(duì)其含量的檢測(cè)有助于人類癌癥的早期診斷和預(yù)后觀察[6]。除此之外，游離miRNA還能穩(wěn)定出現(xiàn)在血漿中，并且其水平不受性別差異的影響，也沒(méi)有個(gè)體差異性[7]。當(dāng)前研究已確認(rèn)miRNA在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起著了關(guān)鍵的作用，并且發(fā)揮著抑癌或促癌的作用[8]。由于miRNA在外周循環(huán)血液中穩(wěn)定存在，也證實(shí)了血漿miRNA可用于腫瘤的診斷及療效預(yù)測(cè)，相對(duì)于其他傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物更穩(wěn)定[9]。

研究發(fā)現(xiàn)miR-205在癌癥形成和惡化過(guò)程中的生物學(xué)作用不一致，有研究認(rèn)為miR-205在食管癌細(xì)胞中的水平顯著升高，并與細(xì)胞浸潤(rùn)遷移相關(guān)性好，而對(duì)細(xì)胞分化凋亡沒(méi)有影響[10-12]。然而另有報(bào)道提示miR-205在食管鱗癌細(xì)胞中的水平低于正常組織，而高于食管腺癌[13]。前期已經(jīng)證實(shí)miR-205在乳腺癌中表現(xiàn)出抑癌基因的效果，可通過(guò)作用于HER3誘導(dǎo)其下游

PI3K/Akt信號(hào)通路，進(jìn)一步抑制腫瘤的發(fā)生，還對(duì)藥物治療有輔助作用[14-16]。同樣有相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)miR-205在前列腺癌中也表現(xiàn)出抑癌作用，因?yàn)榘┘?xì)胞中其表達(dá)水平顯著低于正常組織，誘導(dǎo)其表達(dá)上調(diào)能夠引起前列腺癌細(xì)胞的凋亡及阻滯細(xì)胞周期[17]。本研究結(jié)果顯示，乳腺癌組血漿中miR-205表達(dá)水平均高于對(duì)照組和乳腺良性病變組（P<0.05）；miR-205診斷乳腺癌的AUC為0.842，95%CI為（0.792，0.891），特異性為92.3%、靈敏度為84.6%，說(shuō)明其對(duì)乳腺癌診斷的價(jià)值較好；miR-205水平與TNM分期、腫瘤大小、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切（P<0.05）；Cox回歸分析顯示，腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、miR-205水平均與乳腺癌預(yù)后密切相關(guān)，可作為獨(dú)立的預(yù)后因子（P<0.05）。

綜上所述，乳腺癌患者血漿中miR-205呈高表達(dá)，與臨床病理學(xué)參數(shù)關(guān)系密切，對(duì)乳腺癌的診斷價(jià)值較高，且是影響腺癌預(yù)后的因子之一。

參考文獻(xiàn)

[1] Liu H S，Xiao H S.MicroRNAs as potential biomarkers for gastric cancer[J].World J Gastroenterol，2014，20（34）：12007-12017.

[2] Shin V Y，Chu K M.MiRNA as potential biomarkers and therapeutic targets for gastric cancer[J].World J Gastroenterol，2014，20（30）：10432-10439.

[3] Zhou X，Ji G，Chen H，Jin W，et al.Clinical role of circulating miR-223 as a novel biomarker in early diagnosis of cancer patients[J].Int J Clin Exp Med，2015，8（9）：16890-16898.

[4] Jin C，Liang R.miR-205 promotes epithelial-mesenchymal transition by targeting AKT signaling in endometrial cancer cells[J].J Obstet Gynaecol Res，2015，41（10）：1653-1660.

[5] Murata K，Yoshitomi H，Tanida S，et al.Plasma and synovial fluid microRNAs as potential biomarkers of rheumatoid arthritis and osteoarthritis[J].Arthritis Res Ther，2010，12（3）：R86.

[6] O'Connell R M，Rao D S，Chaudhuri A A，et al.Physiological and pathological roles for micro RNAs in the immune system[J].Nat Rev Immunol，2010，10（2）：111-122.

[7] Chen X，Ba Y，Ma L，et al.Characterization of microRNAs in serum：a novel class of biomarkers for diagnosis of cancer and other diseases[J].Cell Res，2008，18（10）：997-1006.

[8]楊瑞娜，王新帥，高社干.microRNAs在腫瘤干細(xì)胞中的研究進(jìn)展[J].臨床腫瘤學(xué)雜志，2013，18（12）：1141-1144.

[9] Wang Z，Liao H，Deng Z，et al.miRNA-205 affects infiltration and metastasis of breast cancer[J].Biochem Biophys Res Commun，2013，441（1）：139-143.

[10] Matsushima K，Isomoto H，Yamaguchi N，et al.MiRNA-205 modulates cellular invasion and migration via regulating zinc finger E-box binding homeobox 2 expression in esophageal squamous cell carcinoma cells[J].J Transl Med，2011，9（11）：30-38.

[11]關(guān)江.右美托咪定在靜吸復(fù)合麻醉下對(duì)食管癌根治術(shù)患者神經(jīng)功能及認(rèn)知功能的影響[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2018，15（3）：54-57.

[12]劉芳，譚榜憲，彭小東，等.亞甲基四氫葉酸還原酶MTHFR基因C677T多態(tài)性與食管癌預(yù)后的關(guān)系[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2017，14（20）：1-7.

[13] Feber A，Xi L，Luketich J D，et al.MicroRNA expression profiles of esophageal cancer[J].J Thorac Cardiovasc Sur，2008，135（2）：255-260.

[14] Iorio M V，Casalini P，Piovan C，et al.MicroRNA-205 regulates HER3 in human breast cancer[J].Cancer Res，2009，69（6）：2195-2200.

[15]楊健.COLPH3、PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路與胃癌發(fā)生、發(fā)展關(guān)系[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2017，14（8）：138-140.

[16]閆康鵬，江長(zhǎng)安，吳昆.COX-2活化PI3K/Akt信號(hào)通路促結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2017，14（35）：1-5.

[17] Majid S，Dar A A，Saini S，et al.MicroRNA-205-directed transcriptional activation of tumor suppressor genes in prostate cancer[J].Cancer，2015，116（24）：5637-5649.

（收稿日期：2018-08-30） （本文編輯：董悅）