諾麗果粉增強免疫力功能實驗研究

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(云南省熱帶作物科學研究所,云南景洪 666100)

諾麗(MorindacitrigoliaL.)是茜草科巴戟天屬熱帶常綠多年生闊葉灌木或小喬木。現(xiàn)代科學研究表明,諾麗果中含有多糖、黃酮、皂甙、環(huán)烯醚萜類、蒽醌類、木脂素類、氨基酸和礦質(zhì)元素等多種生理活性成分[1-2]。多糖是諾麗果的主要活性成分,國內(nèi)外研究表明多種生物多糖均具有一定的免疫調(diào)節(jié)作用[3-5],日本一個研究團隊研究得出諾麗果具有免疫調(diào)節(jié)特性,其多糖物質(zhì)能夠激發(fā)TNF-α、IL-1β、IL-10、TFN-γ、NO等炎癥細胞因子的分泌釋放,能促使宿主的免疫系統(tǒng)能力提升[6-7]。另外,黃酮、皂甙、環(huán)烯醚萜類等成分也具有免疫調(diào)節(jié)的作用[8-10]。早在2000多年前諾麗果就被波利尼西亞人用于治療多種疾病,被人們譽為“千年圣果”,波利尼西亞傳統(tǒng)藥典記錄稱諾麗能預(yù)防和治療一些疾病,其藥理主要是通過刺激免疫系統(tǒng)從而抵抗細菌、病毒、寄生蟲和真菌感染[11-12]。

諾麗果是典型的呼吸躍變型果實,采后不易貯存,且果實種子含量多,氣味獨特,難以鮮食。為了解決這一問題,可以將諾麗果加工為果汁飲料、果粉和片劑等產(chǎn)品[13]。目前,諾麗果汁已通過安全性人體實驗[14],馬德祿等研究了諾麗果汁對正常小鼠免疫功能的影響,結(jié)果表明諾麗對正常小鼠具有很好的免疫調(diào)節(jié)和促進免疫應(yīng)答的功效[15]。諾麗果粉也被證實其食用是安全可靠的[16],能夠顯著提高小鼠的缺氧耐受力[17]和運動耐力[18],并具有明顯的抗氧化作用[19]。但目前對于諾麗果粉提高免疫力的研究還未見報道。本實驗通過30 d喂養(yǎng)實驗經(jīng)口給予小鼠諾麗果粉后,對其細胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細胞吞噬能力及NK細胞活性四個方面免疫指標的檢測,探討諾麗果粉的免疫調(diào)節(jié)作用,以期為諾麗保健食品的開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

諾麗果粉 采摘于云南省熱帶作物科學研究所科研實驗基地的諾麗鮮果,經(jīng)分選、清洗、切片后,45 ℃鼓風干燥至水分含量低于8%,粉碎,過100目篩,為棕黃色粉末,成人每日推薦量為5 g/60 kg BW;昆明小鼠 生產(chǎn)許可證號為SCXK(川)2013-19,160只,SPF級,雌性,體重為18～22 g,四川省中醫(yī)藥科學院實驗動物中心;飼料 四川省醫(yī)學科學院四川省人民醫(yī)院實驗動物研究所;RPMI1640細胞培養(yǎng)液 美國Gibco公司;Giemsa染液、Hank’s液、伴刀豆球蛋白A(ConA) 美國Sigma公司;印度墨汁 北京化學試劑公司;SA緩沖液、補體(豚鼠血清) 實驗室自行制備。

CO2培養(yǎng)箱 美國Thermo Forma公司;離心機 上海安亭科學儀器有限公司;電子分析天平 瑞士梅特勒-托利多公司;723分光光度儀 上海精密科學儀器有限公司;2010型酶標儀 奧地利Anthos公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物與分組 將動物分為四個大組,每個大組40只動物。免疫一組進行小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗;免疫二組進行NK細胞活性測定及淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗;免疫三組進行抗體生成細胞實驗、血清溶血素測定和遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實驗;免疫四組進行小鼠碳廓清實驗。每大組又隨機分為陰性對照組、低、中、高劑量組,每組10只小鼠。實驗環(huán)境為屏蔽系統(tǒng),溫度20～25 ℃,相對濕度40%～70%。

1.2.2 劑量選擇及給予方式 實驗分別設(shè)計諾麗果粉低、中、高劑量分別為0.833、1.667、2.500 g/kg BW(分別為成人推薦劑量的10、20、30倍)[20]。分別稱取10.42、20.83、31.25 g諾麗果粉,加蒸餾水至250 mL混勻,另設(shè)陰性對照組給予等體積蒸餾水。小鼠按20 mL/kg BW體積給小鼠灌胃,每天1次,連續(xù)30 d。

1.2.3 檢驗項目與方法 根據(jù)衛(wèi)生部《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》中增強免疫力功能的檢驗項目與方法進行檢測[21]。

1.2.3.1 臟器/體重比值測定 實驗結(jié)束后,稱體重,脫臼處死小鼠,稱取脾臟和胸腺,并計算臟/體比值。

1.2.3.2 細胞免疫功能 遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)(足跖增厚法):給小鼠腹腔注射2%(v/v)SRBC(0.2 mL/每鼠)致敏4 d后,測量左后足跖厚度,然后在測量部位皮下注射20%(v/v)SRBC(20 μL/每鼠),于注射后24 h測量左后足跖厚度,同一部位測量三次,取平均值,以攻擊前后足跖厚度差值(足跖腫脹度)來表示DTH的程度。

ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗(MTT法):首先進行脾細胞懸液制備,小鼠頸椎脫臼處死,無菌條件下取脾,放在裝有適量無菌Hank’s液的平皿內(nèi),輕輕將脾磨碎,制成細胞懸液,經(jīng)200目篩網(wǎng)過濾。用Hank’s液洗滌2次,每次1000 r/min離心10 min。然后取沉淀懸浮于1 mL的完全培養(yǎng)液中,臺酚蘭染色計數(shù)活細胞數(shù)(應(yīng)在95%以上),調(diào)整細胞濃度為3×106個/mL。然后將制備好的每份細胞懸液分2孔加入24孔培養(yǎng)板中,每孔1 mL,在其中一孔加75 μL ConA液(相當于7.5 μL/mL),另一孔作為對照,裝入5% CO2、37 ℃的二氧化碳孵箱中培養(yǎng)72 h。培養(yǎng)結(jié)束前4 h,每孔輕輕吸去上清液0.7 mL,加入0.7 mL不含小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液,同時加入MTT(5 mg/mL)50 μL/孔,繼續(xù)培養(yǎng)4 h,培養(yǎng)結(jié)束后,每孔加入1 mL酸性異丙醇,混勻,使紫色結(jié)晶完全溶解,然后分裝到96孔培養(yǎng)板,每孔做3個平行孔,用酶標儀,以570 nm波長測定光密度值。淋巴細胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值減去不加ConA孔的光密度值表示。

1.2.3.3 體液免疫功能 抗體生成細胞檢測(Jerne改良玻片法):每只小鼠腹腔注射0.2 mL將壓積SRBC用生理鹽水配成2%(v/v)的細胞懸液,將免疫5 d后的小鼠頸椎脫臼處死,取脾,放在裝有Hank’s液的平皿內(nèi),輕輕將脾磨碎,制成細胞懸液,經(jīng)200目篩網(wǎng)過濾,1000 r/min離心10 min、用Hank’s液洗滌2次,最后將細胞懸浮在5 mL RPMI1640培養(yǎng)液中,臺酚蘭染色計數(shù)(應(yīng)在95%以上),并將細胞濃度調(diào)整為5×106個/mL,制成脾細胞懸液。將瓊脂糖用雙蒸水配制成1%的水溶液,水浴保溫,與等量的pH7.4雙倍濃度Hank’s液混合,分裝小試管,每管0.5 mL,再向管內(nèi)加用SA緩沖液配制的10%壓積SRBC 50 μL,20 μL脾細胞懸液,迅速混勻后,傾倒于瓊脂糖薄層的玻片上,做兩個平行樣,待瓊脂凝固后,將玻片水平扣放在片架上,放入二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育1.5 h,然后用SA液稀釋的補體加入到玻片架凹槽內(nèi),繼續(xù)溫育1.5 h,計數(shù)溶血空斑數(shù)。

血清溶血素測定(血凝法):每只小鼠腹腔注射用生理鹽水配制的2%(v/v)壓積SRBC 0.2 mL進行免疫,5 d后,摘除小鼠的眼球,取血于離心管內(nèi),放置1 h,2000 r/min離心10 min,分離,收集血清。用生理鹽水將血清作倍比稀釋,每份稀釋12孔,將不同稀釋度的血清置于微量血凝板中,每孔100 μL,再加入100 μL 0.5%(v/v)的SRBC懸液,混勻,裝入濕盒中37 ℃孵育3 h后,觀察每孔的血球凝集程度,并計算抗體積數(shù)。

抗體水平=(S1+2S2+3S3……nSn)

式中:1、2、3……n代表對倍稀釋的指數(shù),S代表凝集程度的級別,抗體積數(shù)越大,表示血清抗體越高。

1.2.3.4 單核-巨噬細胞功能 小鼠碳廓清實驗:小鼠尾靜脈注射用5倍生理鹽水稀釋的印度墨汁,按每10 g體重注射0.1 mL,墨汁注入后立即計時,于注入后第2、10 min,分別從內(nèi)眥靜脈叢取血20 μL,加到2 mL 0.1% Na2CO3溶液中,以0.1% Na2CO3溶液作空白對照,用723分光光度計在600 nm處測定光密度值(OD)。取血后將小鼠處死,稱取肝、脾質(zhì)量,按下式計算吞噬指數(shù)α。

式中:OD1、OD2分別為2、10 min時樣品的吸光度;t1、t2分別為2、10 min。

表1 諾麗果粉對免疫一組小鼠體重的影響Table 1 Effects of Morinda citrigolia fruit powder on immunized mice body weight from group 1

表2 諾麗果粉對免疫二組小鼠體重的影響Table 2 Effects of Morinda citrigolia fruit powder on immunized mice body weight from group 2

小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗(半體內(nèi)法):給小鼠腹腔注射用生理鹽水洗滌3次后的20%雞紅細胞(1500 r/min,10 min)懸液,每只1 mL,30 min后,頸椎脫臼處死。再向小鼠腹腔注入生理鹽水2 mL,轉(zhuǎn)動鼠板1 min,吸取腹腔洗液1 mL,滴于潔凈的載玻片上,置于37 ℃濕盒內(nèi)30 min,孵畢,取出用生理鹽水漂洗,晾干后以甲醇/丙酮(1∶1)固定,4% Giemsa PBS染色3 min,再用蒸餾水漂洗后晾干,鏡檢。按下式計算小鼠腹腔吞噬百分率和吞噬指數(shù)。

1.2.3.5 NK細胞活性測定(乳酸脫氫酶LDH測定法) 小鼠頸椎脫臼處死,無菌取脾,磨碎,制成脾細胞懸液,過200目篩網(wǎng)后,用Hank’s液洗3次,每次1000 r/min離心10 min。棄上清,將細胞漿彈起,加入0.5 mL滅菌水裂解紅細胞,臺酚蘭染色計數(shù)(活細胞數(shù)應(yīng)在95%以上),最后用RPM1640完全培養(yǎng)液將細胞濃度調(diào)整為2×107個/mL,此為效應(yīng)細胞。在實驗前24 h將靶細胞進行傳代培養(yǎng),用Hank’s液洗3次,用RPM1640完全培養(yǎng)液將細胞濃度調(diào)整為4×105個/mL,此為靶細胞。取靶細胞和效應(yīng)細胞各100 μL(效靶比50∶1),置于U型96孔培養(yǎng)板中各3個平行孔,同時做靶細胞自然釋放孔加靶細胞和培養(yǎng)液各100 μL及最大釋放孔加靶細胞100 μL和2.5% Triton 100 μL各3個平行孔,置5% CO2、37 ℃二氧化碳孵箱中培養(yǎng)4 h,然后以1500 r/min離心5 min,每孔吸取上清液100 μL置于另一96孔培養(yǎng)板中,同時每孔再加入LDH基質(zhì)液100 μL,反應(yīng)10 min,每孔加入1 mol/L的HCl 30 μL終止反應(yīng),在酶標儀490 nm處測定OD值,按下式計算NK細胞活性。

NK細胞活性(%)=(反應(yīng)孔OD-自然釋放孔OD)/(最大釋放孔OD-自然釋放孔OD)×100

1.2.3.6 結(jié)果判定 在細胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細胞功能、NK細胞活性四個方面任兩個方面結(jié)果陽性(其中細胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細胞功能測定項目中的兩個實驗結(jié)果均為陽性,或任一個實驗的兩個劑量組結(jié)果陽性,可判定其結(jié)果陽性;NK細胞活性測定實驗的一個以上劑量組結(jié)果陽性,可判定其結(jié)果陽性),可判定諾麗果粉具有增強免疫力功能作用。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

2 結(jié)果與分析

2.1 諾麗果粉對小鼠體重的影響

表3 諾麗果粉對免疫三組小鼠體重的影響Table 3 Effects of Morinda citrigolia fruit powder on immunized mice body weight from group 3

表4 諾麗果粉對免疫四組小鼠體重的影響Table 4 Effects of Morinda citrigolia fruit powder on immunized mice body weight from group 4

由表1～表4可見,諾麗果粉四個免疫組小鼠的初始(0 d)體重與陰性對照組相比,經(jīng)方差齊性檢驗,方差齊(p>0.05),且方差分析結(jié)果,說明小鼠的初始體重在各組間是均衡的。四個免疫組中各劑量組小鼠實驗中期(15 d)、末期(30 d)的體重以及實驗期間小鼠體重的增長(30 d增重)與陰性對照組相比,差異均無統(tǒng)計學意義(p>0.05),說明諾麗果粉對小鼠的體重增長無明顯影響。

2.2 諾麗果粉對小鼠免疫器官臟器/體重比值的影響

胸腺與脾臟是動物體內(nèi)主要的免疫器官,是免疫細胞分化、成熟、定居增殖和產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)的場所。免疫器官的質(zhì)量是反映機體非特異性免疫功能狀況的重要而直觀的指標,胸腺、脾臟與體重的比值能反映免疫器官發(fā)育和免疫細胞的功能狀況,并能比較客觀的反映機體的非特異性免疫能力[22]。由表5可見,連續(xù)灌胃30 d后,諾麗果粉各受試組小鼠的脾臟/體重比值、胸腺/體重比值均高于陰性對照組,但與陰性對照組相比,差異均無統(tǒng)計學意義(p>0.05),表明諾麗果粉對小鼠的免疫器官重量無明顯影響,對免疫器官無刺激作用。

表5 諾麗果粉對小鼠免疫器官臟器/體重比值的影響Table 5 Effects of Morinda citrigolia fruit powder on ratio of immune organ to body weight of mice

2.3 諾麗果粉對小鼠細胞免疫功能的影響

2.3.1 諾麗果粉對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)的影響 DTH是一種由T細胞介導(dǎo)的炎癥免疫反應(yīng),DTH的變化可反映機體細胞免疫功能的狀況[23]。由表6可見,連續(xù)灌胃30 d后,諾麗果粉受試組中的三個劑量組小鼠的足跖腫脹均高于陰性對照組,且中、高劑量組小鼠與陰性對照組比較具有顯著性差異(p<0.05),表明諾麗果粉具有促進小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的作用,能明顯提高小鼠細胞免疫功能。

表6 諾麗果粉對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)的影響Table 6 Effects of Morinda citrigolia fruit powder on delayed type hypersensitivity of mice

注：*表示與陰性對照組比較,差異顯著(p<0.05);**表示與陰性對照組比較,差異極顯著(p<0.01);表8同。

2.3.2 諾麗果粉對ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗的影響 當T淋巴細胞受ConA刺激后發(fā)生母細胞增殖反應(yīng),最后分化成為效應(yīng)性T細胞,具備細胞免疫功能。淋巴細胞增殖能力可以反映小鼠的特異性細胞免疫功能[24]。由表7可見,連續(xù)灌胃小鼠30 d后,諾麗果粉各受試組小鼠的淋巴細胞增殖能力均高于陰性對照組,但與陰性對照組相比,差異均無統(tǒng)計學意義(p>0.05),表明諾麗果粉對小鼠淋巴細胞增殖能力無明顯的促進作用。

表7 諾麗果粉對ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗的影響Table 7 Effects of Morinda citrigolia fruit powder on lymphocyte transformation test of mice induced by ConA

綜上,根據(jù)1.2.3.6判定標準可得出諾麗果粉對小鼠細胞免疫實驗結(jié)果為陽性。

2.4 諾麗果粉對小鼠體液免疫的影響

2.4.1 諾麗果粉對抗體生成細胞的影響 經(jīng)過SRBC免疫的小鼠脾細胞懸液與一定量的SRBC混合,借助補體使分泌抗體的脾細胞周圍的SRBC溶解,形成肉眼可見的空斑,計算形成空斑數(shù)目,通過抗體細胞形成空斑數(shù)目的多少,反映抗體形成細胞產(chǎn)生抗體的能力[25]。由表8可見,連續(xù)灌胃30 d后,諾麗果粉受試組中的三個劑量組小鼠的溶血空斑數(shù)均高于陰性對照組,且中、高劑量組小鼠均顯著高于陰性對照組(p<0.05),表明諾麗果粉具有促進小鼠的抗體生成細胞增殖的作用。

表8 諾麗果粉對小鼠抗體生成細胞的影響Table 8 Effects of Morinda citrigolia fruit powder on antibody forming cells of mice

2.4.2 諾麗果粉對小鼠血清溶血素的影響 用SRBC免疫小鼠后,由B淋巴細胞產(chǎn)生抗SRBC抗體(溶血素),這些抗體可以在培養(yǎng)孔導(dǎo)致綿羊血凝集,利用其凝集程度(以抗體積數(shù)計)來檢測溶血素的水平,抗體積數(shù)可作為B細胞免疫功能強弱的反映[26]。由表9可見,連續(xù)灌胃30 d后,諾麗果粉各受試組小鼠的抗體積數(shù)均高于陰性對照組,但與陰性對照組相比,差異均無統(tǒng)計學意義(p>0.05),表明諾麗果粉對小鼠的血清溶血素無明顯提高作用。

表9 諾麗果粉對小鼠血清溶血素的影響Table 9 Effects of Morinda citrigolia fruit powder on serum hemolysin of mice

綜上,根據(jù)1.2.3.6判定標準可得出諾麗果粉對小鼠體液免疫實驗結(jié)果陽性。

2.5 諾麗果粉對小鼠單核-巨噬細胞吞噬功能的影響

2.5.1 諾麗果粉對小鼠單核-巨噬細胞碳廓清功能的影響 巨噬細胞具有吞噬異物、處理抗原等功能,當顆粒狀異物(碳粒)被靜脈注射進入血液循環(huán)后,即可被單核巨噬細胞迅速吞噬而從血液中廓清,其中主要被肝臟和脾臟內(nèi)的巨噬細胞所吞噬,因此單核巨噬細胞的吞噬能力是反映機體非特異性免疫功能的重要指標之一[27]。由表10可見,連續(xù)灌胃30 d后,諾麗果粉各受試組小鼠的吞噬指數(shù)均高于陰性對照組,但與陰性對照組相比,差異均無統(tǒng)計學意義(p>0.05),表明諾麗果粉對小鼠的單核-巨噬細胞碳廓清功能無明顯促進作用。

表10 諾麗果粉對小鼠單核-巨噬細胞碳廓清功能的影響Table 10 Effects of Morinda citrigolia fruit powder on mononuclear macrophage carbon clearance of mice

2.5.2 諾麗果粉對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力的影響 巨噬細胞是主要的免疫調(diào)節(jié)和免疫應(yīng)答細胞,在體內(nèi)參與免疫防御,能有效清除病原體,小鼠腹腔注射雞紅細胞后,通過記錄被吞噬的雞紅細胞總數(shù),判斷巨噬細胞的吞噬功能[28]。由表11可見,連續(xù)灌胃30 d后,諾麗果粉各受試組小鼠的吞噬率和吞噬指數(shù)均高于陰性對照組,但與陰性對照組相比,差異均無統(tǒng)計學意義(p>0.05),表明諾麗果粉對小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬能力無明顯提高作用。

表11 諾麗果粉對小鼠巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力的影響Table 11 Effects of Morinda citrigolia fruit powder on ability of chicken-red cells phagocytosis of mice

綜上,根據(jù)1.2.3.6判定標準可得出諾麗果粉對小鼠單核-巨噬細胞吞噬功能實驗結(jié)果陰性。

2.6 諾麗果粉對小鼠NK細胞活性的影響

NK細胞是機體免疫監(jiān)視功能的重要執(zhí)行者,其先于T細胞發(fā)揮作用,可殺傷某些腫瘤細胞、病毒感染細胞、某些自身組織細胞(如血細胞)、寄生蟲等,因此NK細胞是機體抗腫瘤、抗感染的一種重要免疫細胞[29]。由表12可見,連續(xù)灌胃30 d后,諾麗果粉各受試組小鼠的NK細胞活性與陰性對照組相比,差異均無統(tǒng)計學意義(p>0.05),表明諾麗果粉對小鼠的NK細胞活性無明顯促進作用。因此,可判定諾麗果粉對小鼠NK細胞活性實驗結(jié)果陰性。

表12 諾麗果粉對小鼠NK細胞活性的影響Table 12 Effects of Morinda citrigolia fruit powder on NK cell activity of mice

3 結(jié)論

本實驗研究結(jié)果顯示,經(jīng)口給予小鼠低、中、高三個劑量組的諾麗果粉30 d后,對小鼠體重增長、脾臟/體重比值、胸腺/體重比值、ConA誘導(dǎo)小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化能力、小鼠血清溶血素、單核-巨噬細胞碳廓清功能、小鼠巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力和NK細胞活性無明顯影響。諾麗果粉中、高劑量組能提高小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng),并促進小鼠的抗體生成細胞增殖,具有提高機體細胞免疫功能和體液免疫功能的作用,從而可以判定諾麗果粉具有增強免疫力的作用。

[1]張偉敏,符文英,施瑞城,等.諾麗果實和葉中主要功能性物質(zhì)的分布與營養(yǎng)評價[J]. 食品科學,2008,29(10):575-577.

[2]陳新璐,狄志彪,孫稚穎,等. 中藥海巴戟的現(xiàn)代研究進展[J]. 環(huán)球中醫(yī)藥,2016,9(10):1280-1284.

[3]徐賢柱,饒華,蔡險峰,等. 杜仲葉多糖提取及對小鼠免疫功能影響研究[J]. 時珍國醫(yī)國藥,2013,24(3):541-542.

[4]王麗娟,張彥青,王勇,等. 姬松茸多糖增強免疫作用及急性毒性研究[J]. 食品科學,2014,35(13):258-261.

[5]SUN W J,MENG K,Qi C H,et al. Immune-enhancing activity of polysaccharides isolated fromAtractylodismacrocephalaeKoidz[J]. Carbohydrate Polymers,2015,126:91-96.

[6]Hirazumi A,Furusawa E,Chou S C,et al. Immuno-modulation contributes to the anticancer activity ofMorindacitrifolia(Noni)fruit juice[J]. Proceedings of the Western Pharmacological Society,1996,39:7-9.

[7]Hirazumi A,Furusawa E. An immunomodulatory polysacchar-ide-rich substance from the fruit juice ofMorindacitrifolia(Noni)with antitumor activity[J]. Phytotherapic Research,1999,13(5):380-387.

[8]馬銳,吳勝. 中藥黃酮類化合物藥理作用及作用機制研究進展[J]. 中國藥物警戒,2013,10(5):286-290.

[9]張海燕. 5種皂甙對小鼠免疫功能的影響對比實驗[J]. 山西農(nóng)業(yè)科學,2013,41(5):458-459.

[10]鄭禮勝,劉向前. 環(huán)烯醚萜類研究進展[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2009,21(4):702-711.

[11]Dixon A R,Mcmillen H,ETKIN N L. Ferment this:the transformation of Noni,a traditional Polynesian medicine(Morindacitrifolia,Rubiaceae)[J]. Ecological Botony,1999,53(1):51-68.

[12]Earle J E. Plantas Medicinales en el Tropico Hu medo[M].San Jose:Editorial Guayacan,2001.

[13]楊焱,劉昌芬,李海泉,等. 海巴戟研究進展及開發(fā)應(yīng)用建議[J]. 熱帶農(nóng)業(yè)科技,2009,32(4):23-29.

[14]West B J,Jensen C J,Westendorf J,et al. A safety review of noni fruit juice[J]. J Food Sci,2006,71(8):100-106.

[15]馬德祿,張駿,謝文利,等.大溪地諾麗果汁對正常小鼠免疫功能的影響[C]. 第十屆全國抗炎免疫藥理學學術(shù)會議論文集. 2010,22-23.

[16]林衛(wèi)華,鄭定仙,馮丁山,等. 諾麗果粉食用安全性研究[J]. 中國熱帶醫(yī)學,2011,11(12):1509-1511.

[17]林衛(wèi)華,鄭定仙,王湛,等. 諾麗果粉對小鼠缺氧耐受力的影響[J]. 時珍國醫(yī)國藥,2012,23(12):3009-3010.

[18]林衛(wèi)華,鄭定仙,王湛,等. 諾麗果粉對小鼠運動耐力的影響[J]. 中國熱帶醫(yī)學,2012,12(6):773-774.

[19]李明,符文英,趙帥,等. 海巴戟凍干粉抗氧化活性的研究[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī),2016(12):171-172,177.

[20]王毅虎,張兵,王富榮,等. 膠原蛋白增強免疫力功能研究[J]. 明膠科學與技術(shù),2015,35(3):137-143.

[21]中華人民共和國衛(wèi)生部. 保健食品檢驗和評價技術(shù)規(guī)范(2003年版)[M]. 北京:中華人民共和國衛(wèi)生部,2003.

[22]李俊,黃艷,廖日權(quán),等. 羅漢果多糖對小鼠免疫功能的影響[J]. 中國藥理學通報,2008,24(9):1237-1240.

[23]方筍,王萌,趙曉娟,等. 芍芪多苷對遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)小鼠細胞免疫功能的影響[J]. 中國藥理學通報,2008,24(4):444-448.

[24]李敬雙,劉英姿,唐雨順,等. 苜蓿多糖對小鼠淋巴細胞增殖和NK細胞活性影響的研究[J]. 中國農(nóng)學通報,2012,28(32):89-93.

[25]蔣建江,潘翔,錢銳,等. 微量溶血分光光度法測定氣管炎疫苗的免疫活性[J]. 中國生物制品學雜志,2014,27(9):1217-1219.

[26]彭亮,王彥武,傅偉忠,等. 納豆粉對小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的實驗研究[J]. 中國食品衛(wèi)生雜志,2014,26(4):336-339.

[27]楊蓮,段小花,李松梅,等. 普洱茶對免疫低下小鼠單核-巨噬細胞系統(tǒng)碳粒廓清功能的影響[J]. 云南中醫(yī)中藥雜志,2008,29(10):43-44.

[28]張淑莉,張琪,景曉紅. 小鼠腹腔巨噬細胞的提取與鑒定[J]. 國際檢驗醫(yī)學雜志,2015,36(2):174-175.

[29]劉英姿,羅有梁,周鐵忠. 碎米花杜鵑原花青素A-1對小鼠免疫細胞的影響[J]. 中藥藥理與臨床,2012(2):45-48.