液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法測定植物樣品中6種合成大麻素

徐秀明

（遼寧警察學(xué)院 刑事技術(shù)系，大連116036）

近年來，國際國內(nèi)流行一種稱為“Spice”的新型毒品［1］，它是由不同的草藥、香料混合不同的化學(xué)物質(zhì)制成的新型香料毒品，外觀與香草或茶葉很難區(qū)分，吸毒者通過卷成煙卷燃燒吸食。此毒品會(huì)產(chǎn)生與大麻極其相似的反應(yīng)，如欣快感、亢奮、幻覺，有報(bào)道其效果是大麻的4～5倍，其主要精神活性物質(zhì)被證實(shí)為各種合成大麻素。這些合成大麻素都是天然大麻素的受體（CB1和CB2）激動(dòng)劑，有些物質(zhì)對CB1受體的激動(dòng)能力甚至超過Δ9－四氫大麻酚，因此吸食這些合成大麻素類的新型毒品后能產(chǎn)生更為強(qiáng)烈的快感，這導(dǎo)致合成大麻素迅速蔓延；合成大麻素是一系列結(jié)構(gòu)類似的化合物，如1－戊基－3－（4－氯－1－萘甲?；┻胚?、2－甲基－1－戊基－3－（1－萘甲酰基）吲哚等都是萘甲酰吲哚類化合物，某些化合物被監(jiān)管后，很快會(huì)出現(xiàn)結(jié)構(gòu)類似的替代產(chǎn)品［2］。因此，合成大麻素類化合物已成為新精神活性物質(zhì)中涵蓋物質(zhì)種類最多、濫用也最為嚴(yán)重的家族。

2008年以來，某些合成大麻素類化合物已陸續(xù)被多個(gè)國家列為管制藥品［3］，我國也有破獲合成大麻素的案例報(bào)道［4－7］。我國在2009年10月將9種合成大麻素類化合物列入《非藥用類麻醉藥品和精神藥品管制品種增補(bǔ)目錄》中。合成大麻素的測定方法主要有氣相色譜－質(zhì)譜法［7－9］、液相色譜法［10－11］、液相色譜－質(zhì)譜法［12－14］等，國內(nèi)對合成大麻素的研究主要采用氣相色譜－質(zhì)譜法或液相色譜法，還未見液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法測定合成大麻素的報(bào)道，合成大麻素測定方法研究尚處于起步階段。

本工作針對目前國內(nèi)外較為常見的2－甲基－1－丙基－3－（1－萘甲?；┻胚?（JWH－015）、1－（5－氟戊基）－3－（4－甲基－1－萘甲?；┻胚幔∕AM－2201）、1－戊基－3－（2－甲氧基苯乙?；┻胚幔↗WH－250）、2－甲基－1－戊基－3－（1－萘甲酰基）吲哚（JWH－007）、1－戊基－3－（2－氯苯乙酰基）吲哚（JWH－203）、1－戊基－3－（4－氯－1－萘甲?；┻胚幔↗WH－398）等6種合成大麻素，采用液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法對其進(jìn)行測定。

1 試驗(yàn)部分

1．1 儀器與試劑

Agilent 1200infinity LC 型液相色譜－質(zhì)譜儀，配電噴霧離子源的 Agilent 6460Triple Quadrupole質(zhì)譜系統(tǒng)；Millipore Simplicity純水制備系統(tǒng)。

6種合成大麻素的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：200mg·L－1，稱取各合成大麻素的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)粉末或移取各標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，用甲醇定容至5mL，保存于冰箱（－20℃）中備用。使用時(shí)用甲醇稀釋成所需質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

JWH－015、MAM－2201、JWH－007、JWH－203、JWH－398、JWH－250等6種合成大麻素標(biāo)準(zhǔn)品的純度依次為95%，98%，98%，98%，97%，98%。6種合成大麻素的結(jié)構(gòu)式見圖1。

圖1 6種合成大麻素的結(jié)構(gòu)式Fig．1 Structural formulas of 6synthetic cannabinoids

甲醇為色譜純，試驗(yàn)用水為超純水。

1．2 儀器工作條件

1）色譜條件 C18色譜柱（2．1mm×50mm，3μm），柱溫30℃；進(jìn)樣量5μL；流量0．2mL·min－1。流動(dòng)相：A為甲醇，B為水。梯度洗脫：0～3．5min時(shí)，A 為80%；3．5～5．5min時(shí)，A 由80%升至100%，保持2．5min；8．0～8．1min時(shí)，A 由100%降至80%，保持5．0min。

2）質(zhì)譜條件 電噴霧離子源（ESI），正離子檢測；毛細(xì)管電壓4 000V；干燥氣為氮?dú)?，流?0L·min－1，干燥氣溫度350℃；霧化器壓力3．1×105Pa；鞘氣流量11L·min－1，鞘氣溫度350℃；多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式。

其余的質(zhì)譜條件見表1，表1中“＊”為定量離子。

1．3 試驗(yàn)方法

稱取案件中收繳的植物樣品20mg，置于塑料離心試管中，加入甲醇50mL振蕩混勻后，超聲提取30min，以4 200r·min－1轉(zhuǎn)速離心后取上清液，按儀器工作條件進(jìn)行測定。

表1 質(zhì)譜參數(shù)Tab．1 MS parameters

2 結(jié)果與討論

2．1 色譜行為

6種合成大麻素的MRM色譜圖見圖2。

圖2 6種合成大麻素的MRM色譜圖Fig．2 MRM chromatogram of 6synthetic cannabinoids

2．2 質(zhì)譜條件的選擇

根據(jù)圖1中各種合成大麻素的結(jié)構(gòu)特征可知：這些化合物更易獲得質(zhì)子形成［M＋1］＋，試驗(yàn)選擇正離子（ESI＋）檢測模式，以0．5mg·L－1的標(biāo)準(zhǔn)溶液為對象，通過優(yōu)化質(zhì)譜的碎裂電壓、碰撞能量，確定了最優(yōu)的質(zhì)譜檢測條件，為每種合成大麻素選擇并優(yōu)化了兩個(gè)離子對。測定合成大麻素的轉(zhuǎn)換離子對、母離子［M＋1］＋的優(yōu)化碎裂電壓和子離子碎片的碰撞能量見表1。

試驗(yàn)采用串聯(lián)質(zhì)譜的MRM模式，可以大大降低背景干擾，提高檢測靈敏度［15］；另一方面，MRM模式中，兩對特定的母離子與子離子反應(yīng)離子對，與一級質(zhì)譜檢測方式相比增強(qiáng)了定性分析的可靠性，提高了抗干擾能力。

2．3 色譜條件的選擇

以 0．2mg·L－1的 JWH－015、MAM－2201、JWH－007、JWH－250和 2mg·L－1的 JWH－203、JWH－398組成的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液為檢測對象，考察了以甲醇、乙腈和水為流動(dòng)相時(shí)6種合成大麻素的測定結(jié)果。結(jié)果表明：以甲醇－水體系為流動(dòng)相時(shí)，測定結(jié)果較好。試驗(yàn)選擇流動(dòng)相為甲醇－水體系，并采用梯度洗脫，梯度洗脫程序見1．2節(jié)，這樣既可以改善峰形與分離度，還可以縮短分析時(shí)間。

合成大麻素類化合物疏水性強(qiáng)，在C18柱上保留很強(qiáng)；該類化合物結(jié)構(gòu)相近，只是取代基不同，它們在固定相上的保留行為相差不大。這導(dǎo)致個(gè)別化合物間不能完全分離，圖2中JWH－015、MAM－2201和JWH－250不能完全分離，但由于采用MRM模式的質(zhì)譜檢測器，可以在檢測結(jié)果的總離子流圖中提取特征反應(yīng)離子對的色譜峰，所以不影響混合物的測定。

2．4 標(biāo)準(zhǔn)曲線及檢出限

按儀器工作條件對混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列（JWH－015、MAM－2201、JWH－007、JWH－250的質(zhì)量濃度均依次為500，300，50，10，5，1，0．5μg·L－1，JWH－203、JWH－398的質(zhì)量濃度均依次為1 000，500，200，100，50，10，5μg·L－1）進(jìn)行測定，以各化合物的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的定量離子峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合出各化合物的線性回歸方程，6種化合物的線性范圍、線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)見表2。

以信噪比等于3為標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算各化合物的檢出限（3S／N），以信噪比等于10計(jì)算各化合物的測定下限（10S／N），結(jié)果見表2。

2．5 精密度和回收試驗(yàn)

取200mg·L－16種合成大麻素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液適量，用甲醇稀釋成高、中、低等3個(gè)濃度水平的質(zhì)控樣品。3個(gè)濃度水平的質(zhì)控樣品中，JWH－015、MAM－2201、JWH－007、JWH－250的高、中、低濃度水平均依次為200，50，5μg·L－1，JWH－203、JWH－398的高、中、低濃度水平均依次為500，200，50μg·L－1。按試驗(yàn)方法對上述質(zhì)控樣品進(jìn)行測定，每個(gè)樣品連續(xù)進(jìn)樣5次，計(jì)算日內(nèi)精密度，連測5d，計(jì)算日間精密度，其結(jié)果見表3。

表2 線性范圍、線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和測定下限Tab．2 Linearity ranges，linear regression equations，correlation coefficients，detection limits and lower limits of determination

表3 精密度和回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝5）Tab．3 Results of tests for precision and recovery（n＝5）

由表3可知：加標(biāo)回收率為95．9%～104%，日內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于6．5%，日間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于8．0%，各項(xiàng)指標(biāo)符合分析鑒定的要求。

2．6 樣品分析

按試驗(yàn)方法對2016年4月某公安分局繳獲的茶葉狀植物（嫌疑人稱其為“音樂小草”）提取后進(jìn)行測定，檢出合成大麻素 MAM－2201（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2．04%）。

本工作結(jié)合液相色譜的高效分離能力和三重四極桿質(zhì)譜的高靈敏度檢測的特點(diǎn)，建立了6種合成大麻素的液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法。該方法具有快速、靈敏、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，能夠滿足相關(guān)司法鑒定工作的要求，可以為相關(guān)案件中新精神活性物質(zhì)的鑒定提供參考。

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