聚山梨酯80在中藥注射劑中的應(yīng)用現(xiàn)狀

1.天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥制藥工程學(xué)院，天津 300193； 2. 浙江大學(xué)藥物信息學(xué)研究所，浙江 杭州 310058

聚山梨酯80(吐溫80)系油酸山梨坦和環(huán)氧乙烷聚合而成的聚氧乙烯20油酸山梨坦, 是一種非離子型表面活性劑, 可用作分散劑、乳化劑、增溶劑或穩(wěn)定劑, 廣泛應(yīng)用于藥物、食品行業(yè)，用量不等。張銳等[1]采用搖瓶法結(jié)合高效液相色譜(HPLC) 測(cè)定了8 類吐溫80中所含的化學(xué)組分水溶液對(duì)4 種不同結(jié)構(gòu)的難溶性藥物的增溶能力。結(jié)果表明，8類吐溫80中所含的化學(xué)組分的增溶作用有明顯差別，并且對(duì)不同類型的難溶性藥物具有最佳增溶作用的化學(xué)組分也不盡相同，據(jù)此推斷市售吐溫80中不同類型化學(xué)組分的含量差異是造成其增溶性差異的物質(zhì)基礎(chǔ)。中藥注射劑化學(xué)成分復(fù)雜，難溶性物質(zhì)眾多，因此，常用吐溫80的助溶性質(zhì)提高相關(guān)藥效物質(zhì)的溶解度，從而改善注射液的澄明度。但由于吐溫80來源復(fù)雜、質(zhì)量控制水平較低、加之過量使用、非法添加等因素，已成為中藥注射劑不良反應(yīng)的一個(gè)重要誘因。本文對(duì)吐溫80在中藥注射劑中的應(yīng)用現(xiàn)狀、不良反應(yīng)機(jī)理及含量測(cè)定方法進(jìn)行文獻(xiàn)綜述，以期為該輔料在中藥注射劑中的合理應(yīng)用提供參考。

1 應(yīng)用現(xiàn)狀

吐溫80 是常見的乳化劑，由于其優(yōu)良的乳化性能，在藥物制劑特別是注射劑中應(yīng)用廣泛，近年來，臨床上含吐溫80 的注射劑多有臨床不良反應(yīng)發(fā)生，如依托泊苷注射液、多西紫杉醇注射液和魚腥草注射液等事件，相對(duì)于化學(xué)藥和生物藥而言，中藥注射劑成份更為復(fù)雜，難溶性物質(zhì)眾多，如揮發(fā)油、生物堿、皂苷、黃酮等，一般助溶劑難以普遍提高多類成份的溶解性能，因此吐溫80的實(shí)用尤為廣泛，據(jù)國(guó)家食品與藥品監(jiān)督管理局公布, 中藥注射劑共134種，其中注明含有吐溫80 者24種, 不含吐溫80者30種, 情況不明者74種(包括未查到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)者62種，在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中未注明輔料者12種)。但是，該輔料的應(yīng)用狀況較為混亂，體現(xiàn)在4個(gè)方面，一是吐溫80來源復(fù)雜，質(zhì)量難以嚴(yán)格控制；二是超標(biāo)使用；三是非法添加；四是對(duì)藥效成分與吐溫80的相互作用缺少研究。上述不合理應(yīng)用共同導(dǎo)致了中藥注射劑的不良反應(yīng)。

2 不良反應(yīng)

隨著中藥注射劑在臨床上廣泛應(yīng)用, 含吐溫80的藥物經(jīng)常出現(xiàn)一些不良反應(yīng), 臨床多表現(xiàn)為過敏反應(yīng)。目前已經(jīng)基本確定吐溫80是導(dǎo)致中藥注射劑不良反應(yīng)的原因之一，但對(duì)于其導(dǎo)致不良反應(yīng)的原因、機(jī)理及類型尚缺少必要的研究。

目前吐溫80相關(guān)的的臨床安全性問題報(bào)道主要有：生殖與發(fā)育毒性、抑制P-糖蛋白活性、外周神經(jīng)毒性、急性超敏反應(yīng)、內(nèi)在抗腫瘤效應(yīng)，以及肝毒性等，并且不良反應(yīng)強(qiáng)弱與其濃度有關(guān)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，犬靜滴吐溫80溶液及含吐溫80的中藥注射劑5 mL·kg-1后，均出現(xiàn)血壓下降、心率減慢及皮膚紅斑、流涎嘔吐、痙攣抽搐等過敏反應(yīng)[2]。李振虎等[3]采用小鼠耳廓藍(lán)染模型考察吐溫80對(duì)血管通透性的影響，驗(yàn)證吐溫80具有誘發(fā)類過敏反應(yīng)效應(yīng)，并采用RBL-2H3 細(xì)胞脫顆粒模型探索吐溫80誘發(fā)類過敏反應(yīng)的可能作用機(jī)制。結(jié)果表明吐溫80誘導(dǎo)類過敏反應(yīng)發(fā)生機(jī)制可能是通過提高細(xì)胞膜流動(dòng)性加速了囊泡循環(huán)，促進(jìn)了細(xì)胞脫顆粒，增加了過敏介質(zhì)釋放引起類過敏反應(yīng)癥狀。羅霞等[4]觀察了不同濃度吐溫80 溶液、吐溫-80 含量不同的中藥注射劑對(duì)RBL-2H3 細(xì)胞脫顆粒的影響，探討了中藥注射劑所含吐溫80 與過敏反應(yīng)的關(guān)系。結(jié)果表明，當(dāng)吐溫-80 溶液濃度較高時(shí)，可引起RBL-2H3 細(xì)胞脫顆粒釋放炎癥介質(zhì); 而當(dāng)中藥注射劑中吐溫-80 含量較多時(shí)，引起RBL-2H3 細(xì)胞脫顆粒釋放組胺也較多，提示中藥注射劑中吐溫-80 的含量可能與其引起的過敏反應(yīng)有關(guān)。

值得注意的是，吐溫80本身的質(zhì)量也是產(chǎn)生不良反應(yīng)的重要原因，郭志鑫等[5]通過對(duì)全國(guó)10 家藥用輔料吐溫80的抽樣、檢驗(yàn)和探索性研究，探討了吐溫80質(zhì)量差異及注射劑中致敏性較強(qiáng)原因。研究結(jié)果表明:在所檢測(cè)的樣品中，存在氯乙醇、乙二醇、二甘醇含量超標(biāo)現(xiàn)象。且全都檢測(cè)出了雙氧水，這表明，導(dǎo)致中藥注射劑不良反應(yīng)的原因有可能是吐溫80，也有可能是不合格的吐溫80輔料中自帶的雜質(zhì)。再如，魚腥草注射液所含的魚腥草油不溶于水，生產(chǎn)中需加入一定的助溶劑吐溫80，經(jīng)對(duì)9 個(gè)企業(yè)、19 批次的魚腥草注射液進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，其所使用的吐溫80的含量為0.07%～0.59%，相差8 倍，這說明一些企業(yè)在添加時(shí)存在一定的隨意性[6]。因此筆者建議，增加對(duì)吐溫80的檢查項(xiàng)，提升其質(zhì)量，同時(shí)規(guī)范其在中藥注射劑中的應(yīng)用。

3 吐溫80的分析方法

吐溫80可以通過核磁共振(NMR)、分光光度法、分子排阻-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法(SEC-ELSD)、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法(HPLC-MS)直接測(cè)定，也可以水解后采用HPLC或氣相色譜法(GC)進(jìn)行測(cè)定。近年來有關(guān)吐溫80 的組分分析和雜質(zhì)檢查的研究已經(jīng)取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步。但由于該輔料的原料純度差異較大，制劑中該輔料的分析方法還有待深入研究。

3.1 核磁共振波譜法 張琪等[7]采用核磁共振波譜法研究了吐溫80 的結(jié)構(gòu)，利用核磁共振技術(shù)1H 譜、13C 譜和相關(guān)2D 譜圖對(duì)吐溫80的結(jié)構(gòu)式進(jìn)行了詳細(xì)的解析，通過這些圖譜解析得到其核磁共振圖譜歸屬及結(jié)構(gòu)式，為進(jìn)一步研究聚山梨酯80 奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

3.2 比色法 基于吐溫80中聚乙氧基團(tuán)與硫氰酸鈷銨生成可溶于有機(jī)溶劑的藍(lán)色復(fù)合物的顯色反應(yīng)，楊倩文等[8]建立了一種定量的比色測(cè)定吐溫80的方法，在反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究基礎(chǔ)上，對(duì)顯色反應(yīng)溫度、時(shí)間和萃取有機(jī)溶劑等關(guān)鍵條件進(jìn)行了優(yōu)化，并以苦木注射液為供試品進(jìn)行系統(tǒng)的方法學(xué)驗(yàn)證和適用性考察，結(jié)果表明該方法可快速、準(zhǔn)確測(cè)定藥物制劑中吐溫80 的含量，適用于中藥注射劑的質(zhì)量控制。吳燕等[9]聯(lián)合采用比色法和HPLC-MS法定性判定中藥注射液中是否含有吐溫80，并采用HPLC-ELSD法測(cè)定了吐溫80的含量。結(jié)果表明，14 種中藥注射劑(其中3 種中藥注射劑廠家聲稱未添加吐溫80) 中均含有吐溫80，含量范圍0.18%～0.57%。閆位娟等[10]采用硫氰酸鈷銨和薄層層析兩種方法結(jié)合定性判定中藥注射劑是否含有吐溫80，并采用分光度度比色法測(cè)定了42 種中藥注射劑中吐溫80的含量，結(jié)果表明，魚腥草注射液等15種中藥注射劑中含有吐溫80, 含量分布在0.72～6.85 g.L-1之間。

3.3 色譜法 萬曉君等[11]采用氣相色譜雙柱篩選、測(cè)定了吐溫80輔料和脈絡(luò)寧注射液中吐溫80產(chǎn)生的3種有害物質(zhì)：2-氯乙醇、二甘醇和乙二醇的含量，并對(duì)滅菌工藝進(jìn)行考察，研究結(jié)果提示，在研究吐溫80所導(dǎo)致的不良反應(yīng)機(jī)制時(shí)，要同時(shí)注意其降解產(chǎn)生的雜質(zhì)。李建偉等[12]建立測(cè)定復(fù)方苦參注射液中吐溫80含量的氣相色譜方法。該方法簡(jiǎn)便快速，可用于復(fù)方苦參注射液中吐溫80的含量測(cè)定。李建偉等[13]還建立了HPLC-ELSD 測(cè)定復(fù)方苦參注射液中吐溫80 含量的方法，并與分光光度法測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較?？疾炝瞬煌腿》椒▽?duì)萃取的影響，認(rèn)為紫外分光光度法前處理過程復(fù)雜，方法重現(xiàn)性稍差。唐登峰等[14]用HPLC-ELSD 測(cè)定莪術(shù)油注射液中聚山梨酯80 的含量，測(cè)定了30 個(gè)市售批次的莪術(shù)油注射液中聚山梨酯80 含量。結(jié)果顯示莪術(shù)油注射液中聚山梨酯80 的含量在4.7%～15.3%之間?？梢姴煌髽I(yè)莪術(shù)油注射液中聚山梨酯80用量相差很大，由于增溶劑的用量未在處方中明確標(biāo)出，因而不同生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品之間存在著較大的質(zhì)量差異。李櫻紅等[15]采用HPLC-ELSD法，建立冠心寧注射液中聚山梨酯80 的含量測(cè)定方法。

中藥注射液成分復(fù)雜, 部分品種不適合直接采用凝膠色譜柱進(jìn)行分析, 樣品的前處理力法需視具體情況進(jìn)行, 根據(jù)雜質(zhì)的性質(zhì)，可采用液-液萃取或上凝膠小柱等方法去除小分子雜質(zhì), 才能保證該測(cè)定方法的準(zhǔn)確性。沈娟等[16]采用液-液萃取方法去除干擾，建立了高效凝膠色譜-蒸發(fā)光散射法( HGPC-ELSD) 測(cè)定熱毒寧注射液中吐溫80的含量測(cè)定方法，控制熱毒寧注射液中吐溫80 的質(zhì)量。吳毅等[17]建立了測(cè)定中藥注射液中吐溫80含量的SEC-ELSD 方法，對(duì)魚腥草注射液、新魚腥草素鈉注射液、柴胡注射液中的吐溫80進(jìn)行測(cè)定, 結(jié)果表明該方法專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好, 可用于注射液中吐溫80的含量控制。尹利輝等[18]運(yùn)用凝膠色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法( GPC-ELSD) 建立一種中藥注射劑中吐溫80 檢測(cè)的通用方法，檢出限為達(dá)到1.27 μg，用該方法檢測(cè)了19 種78 批中藥注射劑中吐溫80 含量，結(jié)果滿意，可作為檢測(cè)中藥注射劑中吐溫80 的通用方法。張銳等[19]利用制備的吐溫80化學(xué)組分對(duì)照品，按照分子排阻色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法的色譜條件進(jìn)行樣品分析，研究其化學(xué)組分在分子排阻色譜上保留行為。結(jié)果表明所有組分不能在相同的時(shí)間出峰，部分組分在SEC-ELSD的色譜條件下不能出峰。結(jié)論為保證分子SEC-ELSD法的合理應(yīng)用，需要關(guān)注表面活性劑分子在流動(dòng)相中的狀態(tài)及與固定相的相互作用問題，并且實(shí)施以化學(xué)組分控制為核心的聚山梨酯80 新藥用輔料標(biāo)準(zhǔn)。

4 應(yīng)用前景

雖然吐溫80是導(dǎo)致中藥注射劑不良反應(yīng)的誘因之一，但由于其卓越的助溶性能，短期內(nèi)尚無更為合適的替代輔料。故吐溫80仍將在今后一個(gè)相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)期內(nèi)廣泛使用。為減少該輔料所導(dǎo)致的不良反應(yīng)，筆者建議從以下幾個(gè)方面著手改進(jìn)。

4.1 不斷提升藥用吐溫80的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 吐溫80 作為增溶劑或穩(wěn)定劑用于中藥注射劑時(shí)必須建立注射級(jí)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，嚴(yán)格控制產(chǎn)品質(zhì)量，在充分的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持下確定其使用量。張海燕等[20]對(duì)吐溫80 在中藥液體制劑中的適應(yīng)性研究進(jìn)行文獻(xiàn)整理和分析，結(jié)果顯示，其生產(chǎn)工藝、產(chǎn)品質(zhì)量和體外安全性成為研究焦點(diǎn)，因此建議提高藥典吐溫80 的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。事實(shí)上，縱覽歷版藥典，也可以發(fā)現(xiàn)該品種的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)也確實(shí)在逐漸提高。2005版藥典主要檢查粘度和酸值[21]；2010版藥典標(biāo)準(zhǔn)則增加了過氧化值、砷鹽、環(huán)氧乙烷、二氧六環(huán)等雜質(zhì)的檢測(cè)[22]；而2015版藥典進(jìn)一步將吐溫80分為普通的和注射級(jí)兩類，增加了脂肪酸組成的測(cè)定，標(biāo)準(zhǔn)更高[23]。法定標(biāo)準(zhǔn)的提高則要求吐溫80生產(chǎn)企業(yè)提高生產(chǎn)水平和質(zhì)量控制水平，全面提升該輔料的質(zhì)量。

4.2 通過對(duì)吐溫80 的增溶適宜性研究，為中藥注射劑合理使用吐溫80 增溶提供理論依據(jù) 叢英等[24]采用表面張力法測(cè)定目前市場(chǎng)常用7 個(gè)廠家的吐溫80 的臨界膠束濃度(CMC)；采用HPLC 法測(cè)定吐溫80 對(duì)國(guó)家中藥部頒標(biāo)準(zhǔn)中包含長(zhǎng)鏈單環(huán)和并環(huán)結(jié)構(gòu)的常用8種中藥注射液中的難溶中藥成分的增溶能力，并提出增溶效力表達(dá)增溶效果的概念。結(jié)果表明，吐溫80 存在較大的表面活性，其對(duì)長(zhǎng)鏈難溶中藥成分增溶遵循相似相溶規(guī)律，增溶適宜性強(qiáng)；而對(duì)無長(zhǎng)鏈的單環(huán)和并環(huán)難溶中藥成分的增溶效果一般，應(yīng)根據(jù)具體要求進(jìn)一步考察其適宜性。

4.3 規(guī)范吐溫80的用法，尋找質(zhì)量更優(yōu)的替代輔料 馬鴻雁等[25]統(tǒng)計(jì)《部頒中藥標(biāo)準(zhǔn)》中藥注射劑中的吐溫80用量，以臨界膠束濃度為參考，分析了吐溫80的用量。結(jié)果表明，34種中藥注射劑中吐溫80的用量在1～20 mL之間，以加劑法為主要的添加方式，用量差異較大。說明中藥注射劑中吐溫80的用量隨意性較大，缺少理論依據(jù)和科學(xué)指導(dǎo)。

總之，隨著吐溫80和中藥注射劑不良反應(yīng)機(jī)理的深入研究，該輔料將會(huì)在全面提升質(zhì)量、嚴(yán)格控制雜質(zhì)的基礎(chǔ)上，更加規(guī)范、更加合理地應(yīng)用于中藥注射劑中，為中藥注射劑的安全性提升發(fā)揮更大作用。