糞便毛蚴孵化法診斷家畜血吸蟲病

文│彭又新 熊家亮（湖北省荊州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）

湖北省自20世紀(jì)60年代開始開展了糞便毛蚴孵化法診斷家畜血吸蟲病的研究。最初試驗(yàn)的方法為瓦缽試管倒插孵化法，幾經(jīng)改進(jìn)之后用特制的塑料杯取代瓦缽，于20世紀(jì)70年代末將塑料糞杯設(shè)計(jì)定型并批量生產(chǎn)，使試管倒插孵化法在全省范圍內(nèi)得到推廣應(yīng)用。目前，該方法仍用于家畜血吸蟲病的確診。

但隨著時(shí)代的發(fā)展變化，以前制定的操作規(guī)程中的某些內(nèi)容需要進(jìn)行適當(dāng)?shù)男薷?。同時(shí)，隨著老一代的動(dòng)物血防工作者陸續(xù)離開工作崗位，現(xiàn)在能夠熟練掌握該方法的人越來越少。為此，筆者根據(jù)多年的實(shí)際運(yùn)用經(jīng)驗(yàn)，對(duì)糞便毛蚴孵化法診斷家畜血吸蟲病進(jìn)行了一次全面深入的總結(jié)，現(xiàn)將經(jīng)驗(yàn)介紹給大家，希望對(duì)大家的工作能夠有所裨益。

一、糞便毛蚴孵化法的種類

1.尼龍網(wǎng)兜淘洗孵化法（三角燒瓶）。該方法是最早應(yīng)用于家畜血吸蟲病診斷的方法。采用兩層尼龍網(wǎng)兜進(jìn)行淘洗，上層網(wǎng)兜孔大，主要起過濾糞渣的作用；下層網(wǎng)兜孔小，主要起兜住蟲卵的作用；洗好后將下層網(wǎng)兜中的內(nèi)容物到入三角燒瓶中進(jìn)行孵化。由于該方法操作繁瑣，耗時(shí)長，在家畜的診斷上早已棄用，但衛(wèi)生部門目前仍在應(yīng)用。

2.頂管法（試管）。用一特制的糞杯盛裝糞液，上面再倒插一裝滿清水的試管。我國大部分血吸蟲病流行區(qū)均采用該方法用于家畜血吸蟲病的診斷，根據(jù)盛糞液容器的不同又分為幾種，湖北省又將此方法稱為試管倒插孵化法。

3.直孵法（平底長頸燒瓶）。糞液直接裝入平底長頸燒瓶中，頸的中部放入適量的脫脂棉，再加入清水進(jìn)行孵化。全國有少數(shù)地方采用該方法用于家畜的查病。直孵法的檢出率與試管倒插法相比略優(yōu)相當(dāng)，可作為試管倒插法的補(bǔ)充，其缺點(diǎn)是在搬運(yùn)過程中易破損。

二、糞便毛蚴孵化法的原理

血吸蟲蟲卵具有與一般寄生蟲蟲卵不一樣的特征，呈橢圓形、淡黃色、卵殼較薄，無卵蓋，側(cè)方有一小逗點(diǎn)狀或小鉤狀的棘突，其最主要的特點(diǎn)就是成熟蟲卵卵內(nèi)含有毛蚴。家畜體內(nèi)寄生的其他吸蟲的蟲卵內(nèi)均沒有毛蚴。成熟、未成熟及死亡變性卵，都可在糞便中發(fā)現(xiàn)。但在正常情況下，即未經(jīng)抗血吸蟲藥治療或未腹用服瀉劑的情況下，糞便內(nèi)的卵，大多數(shù)是含毛蚴的成熟蟲卵，而未成熟或變性卵只占少數(shù)。蟲卵隨同家畜糞便排出體外并在自然環(huán)境中遇到水后，在適當(dāng)條件下就會(huì)孵出毛蚴。

影響毛蚴孵化的因素。溫度：以水溫20～30℃最為適宜。當(dāng)氣溫低于10℃或高于37℃時(shí)，大多數(shù)蟲卵的孵化被抑制。pH：以7.5～7.8最為適宜，當(dāng)pH在3以下和10以上時(shí)，孵化完全受到抑制。光線：光能加速蟲卵的孵化，黑暗則抑制孵化。滲透壓：毛蚴在清水中孵化率100%，在1.2%以上的鹽水中，蟲卵的孵化完全被抑制。

三、畜糞的采集和送檢

1.采集量。畜糞的采集量與每頭家畜檢查所用糞杯數(shù)密切相關(guān)。如果進(jìn)行一糞三檢，大家畜（牛、馬屬）的采糞量應(yīng)為200克，豬100克，羊、犬50～60克。

查病時(shí)糞樣的送檢次數(shù)及每個(gè)糞樣檢測份數(shù)（幾糞幾檢），達(dá)標(biāo)考核必須采用一糞三檢；而一般的查病和疫情監(jiān)測建議采用一糞兩檢。據(jù)試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)，血吸蟲病畜一糞一檢的檢出率約為60%，一糞兩檢的檢出率約為70%，一糞三檢的檢出率約為72%。

2.采集方法。

（1）拾糞。即采取家畜自然排出的糞便，用一次性筷子或樹枝將其采集。為了避免污染，采糞時(shí)所用采糞器具不能連續(xù)使用，要求一具采一頭畜糞，糞樣要新鮮。

（2）掏糞。即用手伸進(jìn)直腸采糞，最好是戴上橡皮手套進(jìn)行，每采一頭更換一副手套，如徒手采集，每采完一頭后，必須將手洗凈后再采另一頭，以防交叉污染。

3.包裝送檢。采得糞樣可用潔凈容器（如一次性飯盒）盛裝并再用一干凈的塑料袋包裝，或者使用兩層干凈的塑料袋包裝，詳細(xì)填寫《動(dòng)物血吸蟲病糞樣送檢登記卡》放入對(duì)應(yīng)的塑料袋中送檢。糞樣送檢登記卡須填寫的內(nèi)容有:鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）名，村名，組別，畜主姓名，畜別，性別，年齡，特征，家畜編號(hào)，送檢時(shí)間等。采到糞樣后應(yīng)立即上送，冬季防止冰凍，夏季防止日曬。

四、用水的準(zhǔn)備

將自來水放入潔凈無蓋的容器中靜置12小時(shí)以上即可作為洗糞和孵化用水。一般于前一天下午或晚上將自來水放入無蓋的桶、盆或缸中，第二天上午即可作為洗糞和孵化水使用。

河水、井水、池塘水用做洗糞和孵化用水必須進(jìn)行殺滅水蟲和澄清水質(zhì)的處理。其方法是將水加溫至60℃以上，冷卻后澄清再用。

孵化時(shí)水溫須達(dá)到15℃以上，否則應(yīng)升溫。當(dāng)水溫高于28℃時(shí)，洗糞用水中可按1%的比重加入無碘食鹽以抑制洗糞過程中毛蚴過早逸出。

由于現(xiàn)今自來水已經(jīng)普遍使用，所以一般不用河水、井水和池塘水作為孵化和洗糞用水。有些地方的自來水并不是按標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)的，使用前須檢查水中是否有水蟲。

五、試管倒插孵化法的操作過程

1.工具的準(zhǔn)備。特制的塑料杯及杯蓋，與杯蓋孔相適應(yīng)的玻璃試管以及管口上套用的橡皮筋圈，竹筷、40～60孔/銅篩、無碘食鹽，其他還有剪刀、膠布、5～10倍放大鏡、水溫計(jì)、pH試紙、毛巾、肥皂、糞桶、臉盆、水桶、水瓢、大水桶或水缸、大盆、試管刷、鬧鐘、臺(tái)燈、一次性手套、一次性飯盒、塑料袋、糞檢登記表等。

2.編號(hào)。對(duì)所用的塑料糞杯逐一進(jìn)行編號(hào)，每個(gè)糞杯都有一個(gè)惟一的號(hào)碼。將醫(yī)用膠布剪一小段貼在糞杯的外壁上，將號(hào)碼寫在膠布上。

3.登記。將糞檢登記卡上的內(nèi)容詳細(xì)記入糞檢登記表，記錄對(duì)應(yīng)的糞杯號(hào)，同時(shí)將一定量的糞樣放入對(duì)應(yīng)的糞杯中（或糞杯中的銅篩中）。每個(gè)糞杯中家畜的糞量為：牛、馬屬動(dòng)物糞便50～100克，豬、羊、犬糞便各30～40克。

4.洗糞。將塑料杯內(nèi)加上2/3容量的洗糞用水，用筷子充分?jǐn)嚢杼韵矗笕〕黾S篩糞渣，將杯內(nèi)加滿洗糞用水，靜置25～30分鐘。由于羊糞為顆粒狀、較硬，糞杯中加洗糞水之前需將其弄碎。

由于用銅篩淘洗耗時(shí)較長，且銅篩會(huì)濾掉一部分蟲卵，為了縮短操作時(shí)間，提高檢出率，在實(shí)際工作中進(jìn)行牛糞檢測時(shí)一般不使用銅篩，而是直接將糞樣放入糞杯中進(jìn)行淘洗。

5.換水。靜置到時(shí)后倒去糞杯中1/2的糞水，再加滿洗糞用水，靜置15～20分鐘，此為第一次換水。到時(shí)后再倒去糞杯中2/3的糞水，再加滿洗糞用水，靜置15分鐘為第二次換水。

通過長期的實(shí)踐證明，減少一次洗糞換水并不影響毛蚴的孵化及觀察效果，在實(shí)際操作中特別是溫度較高時(shí)可減少一次換水，以縮短洗糞時(shí)間及減少工作量。

6.上孵化水。倒去杯中上2/3的糞水，加滿孵化用水，靜置30分鐘。

7.蓋杯蓋及孵化。取與杯蓋孔相適應(yīng)的玻璃試管，裝滿洗糞用水倒插于杯蓋孔上一并蓋在杯上進(jìn)行孵化。為防止試管下滑，應(yīng)在試管上纏上適量的橡筋。

關(guān)于糞杯中的糞水上翻到試管中的問題。當(dāng)試管中的水溫低于糞杯中的水溫時(shí)，就會(huì)出現(xiàn)糞液上翻現(xiàn)象。已加孵化水的糞杯不能放到陽光下直曬，已上試管的糞杯既不能放到陽光下直曬，也不能用電扇吹。糞液上翻的解決辦法：先找出引起糞水上翻的原因予以解決，同時(shí)將試管中的水換成溫度略高的孵化水。

六、直孵法的操作過程

1.器械的準(zhǔn)備。平底長頸燒瓶、燒杯（500毫升）、脫脂棉為本方法專用工具，以取代糞杯，所需其他器械與頂管法相同。

2.操作。將平底長頸燒瓶進(jìn)行編號(hào)，每個(gè)長頸燒瓶配一個(gè)對(duì)應(yīng)的燒杯。將糞檢登記卡上的內(nèi)容詳細(xì)記入糞檢登記表，同時(shí)記錄對(duì)應(yīng)的燒瓶號(hào)。

取家畜糞便于燒杯中，加入自來水充分?jǐn)嚢?，然后將燒杯?nèi)加滿水，靜置25～30分鐘。

將燒杯中的糞液倒去一半，剩余的糞液倒入對(duì)應(yīng)的燒瓶中，未倒干凈的糞渣用孵化水沖洗灌入燒瓶中，將燒瓶頸內(nèi)壁上的糞渣用孵化水沖洗干凈并繼續(xù)向燒瓶中加入孵化水使液面距離瓶口8厘米左右，然后將適量脫脂棉放入頸口中與液面輕輕接觸（要求脫脂棉厚薄均勻，厚度約2厘米左右），在脫脂棉上方輕輕注入孵化水至瓶口，一個(gè)小時(shí)后進(jìn)行毛蚴觀察。

也可將燒杯內(nèi)加上2/3容量的洗糞用水，燒杯中放入一40目(孔)/銅篩，取牛、馬屬動(dòng)物糞便50～100克，豬、羊、犬糞便各30～40克置銅篩內(nèi)，充分?jǐn)嚢杼韵?，而后取出糞篩糞渣，將燒杯內(nèi)糞水倒入對(duì)應(yīng)的燒瓶中，其他操作與前面相同。

七、毛蚴的觀察及結(jié)果判定

通常情況下，牛、羊糞樣于第1、3、5小時(shí)各觀察一次，豬糞樣孵化后5、8小時(shí)各觀察一次，每個(gè)樣品每次觀察應(yīng)在2分鐘以上。實(shí)際操作中，由于時(shí)間所限，每個(gè)糞杯最多觀察兩次。

毛蚴的出現(xiàn)時(shí)間與水溫關(guān)系密切。水溫較高時(shí)，毛蚴出現(xiàn)的時(shí)間早，同時(shí)毛蚴存活的時(shí)間也較短，所以夏季觀察毛蚴的時(shí)間要相應(yīng)地提前并抓緊時(shí)間進(jìn)行觀察。

發(fā)現(xiàn)血吸蟲毛蚴即判定為陽性。在一個(gè)試管中有1～5個(gè)毛蚴判為+，6～10個(gè)為++，11～20個(gè)為+++，21個(gè)以上為++++。在同一糞樣的幾個(gè)試管中，只要在一個(gè)試管中發(fā)現(xiàn)一個(gè)毛蚴，則該家畜為陽性。

毛蚴往往在距水面4厘米的范圍內(nèi)活動(dòng)，灰白色、折光強(qiáng)、梭形，多呈與水面平直或斜向的直線運(yùn)動(dòng)。觀察毛蚴應(yīng)在光線充足的地方進(jìn)行，為了便于觀察，可襯以黑色背景。

觀察時(shí)，毛蚴必須與水蟲嚴(yán)加區(qū)別?？梢蓵r(shí)，應(yīng)用吸管吸取置于載玻片上鏡檢簽別。

在光線較暗的環(huán)境中及夜晚進(jìn)行毛蚴孵化操作時(shí)，必須補(bǔ)充燈光并達(dá)到所需的亮度。

為了便于毛蚴的觀察，可在插好試管的糞杯前放置一臺(tái)燈以增加亮度。