miR-16在早產兒呼吸窘迫綜合征患兒血清中表達水平的研究

朱天一 許云仙 金蕊 陳筱青 胡毓華

早產兒出生之后, 很容易患上呼吸窘迫綜合征［1］, 主要癥狀有呼吸急促、呻吟、發(fā)紺等, 一旦出現(xiàn)這樣的問題就需要及早進行治療, 否則很容易導致早產兒呼吸衰竭死亡［2］。即使是存活下來的早產兒, 也很容易留下一系列的后遺癥,比如說, 由于吸入了大量的高體積分數(shù)氧最終導致支氣管的發(fā)育不良, 這些后遺癥會大大降低早產兒的生存和生活質量,同時也給早產兒的家庭帶來承重的經(jīng)濟和精神負擔。micro RNAs是一種新發(fā)現(xiàn)的單鏈小分子RNA, 這種RNA具有很強的調節(jié)活性, 同時micro RNAs還能與其他的分子共同組成一種新的沉默復合體, 這一沉默復合體也受到RNA的誘導。另外, 沉默復合體還與mRNA 的 3’端非編碼區(qū)相互影響, 并在最終的相互作用下能夠抑制翻譯過程的進行, 或者是實現(xiàn)對mRNA的降解, 進而調節(jié)蛋白質的表達結果, 最終對細胞的活動過程進行調控, 也就是對病理的生理過程進行調控。在炎癥的調控中, micro RNAs發(fā)揮了重要的作用, 這也為分析早產兒呼吸窘迫綜合征的發(fā)病機制探討提供了新的思路。如前所述, 早產兒呼吸窘迫綜合征具有發(fā)病急、病情惡化快和死亡率高的特征, 因此在臨床治療過程中, 需要對該病癥進行及時的診斷, 然而現(xiàn)有的臨床和實驗都缺乏早產兒呼吸窘迫綜合征的早期診斷指標, 鑒于此, 本研究通過PCR檢測方法來測量炎癥因子miR-16在呼吸窘迫綜合征早產兒血清中的表達情況, 旨在為呼吸窘迫綜合征的治療提供參考。現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選擇2016年1月~2018年2月于本院出生的60例早產兒作為研究對象, 根據(jù)是否合并呼吸窘迫綜合征分為RDS組(合并呼吸窘迫綜合征)和對照組(未合并呼吸窘迫綜合征), 每組30例。

1. 2 方法 以歐洲共識指南為依據(jù), 對所有早產兒進行處理, 具體的包括給予肺磷脂注射、機械通氣等。兩組早產兒均采用PCR檢測方法測定血清中的miR-16表達水平, 在血清miR-16表達的檢測過程中, 首選要提取每一個標本的RNA, 并檢測標本RNA的吸光度值, 計算標本總RNA的純度和質量。然后將RNA轉錄為cDNA, 并在溫度為82℃的條件下進行熒光信號的采集, 運用PCR自帶軟件分析溶解曲線。并將上述過程重復3次。

1. 3 觀察指標 分析PCR檢測血漿miR-16水平的可行性,比較兩組早產兒血漿miR-16表達水平。

1. 4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計學軟件對研究數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù) ± 標準差(±s)表示, 采用t檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2. 1 PCR檢測血漿miR-16水平的可行性分析 將樣本RNA進行轉錄之后, 需要運用PCR方法進行miR-16表達水平的檢測。最終的溶解曲線為單峰, 且PCR的產物是單一條帶, 沒有進行轉錄的RNA和對照組都沒有出現(xiàn)增產物, 這一結果表示可以運用RT-PCR進行miR-16表達水平的檢測。為了進一步分析血清中miR-16的表達水平, 需要對miR-16進行合成, 并構建相應的標準曲線, 最終所得的Ct值在現(xiàn)行檢測范圍之內。

2. 2 兩組早產兒血漿miR-16表達水平比較 RDS組早產兒miR-16表達水平為(18.59±0.66), 對照組早產兒的miR-16表達水平為(19.10±0.85), RDS組早產兒miR-16表達水平低于對照組, 差異具有統(tǒng)計學意義(t=2.596, P＜0.05)。

3 討論

早產兒呼吸窘迫綜合征發(fā)生的主要原因包括：早產兒的肺發(fā)育不成熟和肺表面活性劑合成不足, 呼吸窘迫綜合征大大提高了早產兒的死亡率［3］。在炎癥的調控中, microRNAs發(fā)揮了重要的作用, 這也為分析早產兒呼吸窘迫綜合征的發(fā)病機制探討提供了新的思路。本研究通過PCR檢測方法來測量炎癥因子miR-16在呼吸窘迫綜合征早產兒血清中的表達水平, 旨在為呼吸窘迫綜合征的治療提供參考。本研究運用RT-PCR進行miR-16表達水平的檢測, 首選要提取每一個標本的RNA, 然后將RNA轉錄為cDNA, 最后運用PCR自帶軟件分析溶解曲線。最終的研究結果顯示溶解曲線為單峰,且PCR的產物是單一條帶, 這一結果表示可以運用RT-PCR進行miR-16表達水平的檢測。

在腫瘤的治療過程中, miR-16是一種十分重要的抑制劑, 比如說在乳腺癌和淋巴癌中miR-16的表達水平都出現(xiàn)下降的情況［4］。本研究通過運用RT-PCR的方法檢測呼吸窘迫綜合征早產兒血漿中的miR-16表達水平, 結果顯示RDS組早產兒miR-16表達水平低于對照組, 差異具有統(tǒng)計學意義(t=2.596, P＜0.05) , 并且下降程度與疾病的活動度存在顯著相關。分析早產兒呼吸窘迫綜合征的發(fā)病機制可知, 細胞的過渡活化是主要原因之一, 而臨床上對早產兒呼吸窘迫綜合征的治療方法主要包括抑制B細胞的增殖和促進細胞的凋亡［5］。通過本研究結果可以推測, miR-16表達水平的降低可能會降低細胞增殖的抑制作用, 進而加快了早產兒呼吸窘迫綜合征的發(fā)病速度。

綜上所述, 通過分析miR-16的表達水平能夠分析早產兒呼吸窘迫綜合征的發(fā)病情況, 可以將miR-16看作是早產兒呼吸窘迫綜合征的一種標志物。