干細(xì)胞標(biāo)志物CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4在胃癌組織中表達(dá)及其臨床意義

曾春蘭

近年來(lái)，胃癌的發(fā)病率不斷攀升，致死率位于所有癌癥致死率的第二位。患者病情復(fù)發(fā)甚至出現(xiàn)死亡的主要原因是胃癌出現(xiàn)了侵襲和轉(zhuǎn)移[1-2]。因此在臨床上找到一種對(duì)胃癌的發(fā)生和發(fā)展具有指向性的有效檢測(cè)方法，幫助醫(yī)師及時(shí)發(fā)現(xiàn)病情并針對(duì)治療，以便有效改善患者預(yù)后、明顯降低患者的死亡率。為了分析干細(xì)胞標(biāo)志物CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4在胃癌組織中表達(dá)的臨床意義，希望能為胃癌的診斷和預(yù)后提供幫助，選擇重慶兩江新區(qū)第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科51例胃癌患者，以及同時(shí)期治療的70例患有其他胃部良性、惡性疾病患者作為研究對(duì)象，比較四種干細(xì)胞標(biāo)記物的不同表達(dá)情況。

資料與方法

一、一般資料

選擇重慶兩江新區(qū)第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科收治的51例胃癌患者作為研究對(duì)象，其中男37例，女14例，年齡34 ～ 57（45.23±2.14）歲，體重44 ～ 73（53.62±4.61）kg。按病理類型劃分主要為高分化腺癌15例，中低分化腺癌36例；癌細(xì)胞浸潤(rùn)的深度為T17例、T210例、T316例、T418例。腫塊直徑≥5 cm為35例，直徑＜ 5 cm為16例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶共26例、原發(fā)灶共25例。選取門診收治的（1）慢性淺表性胃炎10例，男7例，女3例；年齡33 ～ 54歲，平均年齡（44.78±2.32）歲，體重44 ～ 72（53.28 ±4.72）kg；（2）萎縮性胃炎12例，男10例，女2例；年齡34 ～ 54（45.03±2.34）歲，體重43 ～ 73（52.98±4.73）kg；病理診斷為輕度萎縮4例、中度5例、重度3例；（3）胃潰瘍15例，男11例，女4例；年齡34 ～ 56（44.91±2.42）歲，體重45 ～ 75（53.54±4.52）kg。潰瘍直徑1 ～ 2.5（1.78 ± 0.52）cm；（4）胃息肉18例，男14例，女4例；年齡34 ～ 53（45.01±2.10）歲，體重44 ～ 74（53.53 ± 4.74）kg。息肉直徑1.5 ～ 2.5（1.82 ± 0.31）cm。病理診斷為單純息肉12例，腺瘤性息肉6例；（5）胃腺瘤15例，男12例，女3例；年齡34 ～ 55（45.34±2.11）歲，體重45 ～ 73（53.32 ± 4.83）kg。腺瘤直徑2 ～ 3.5（2.91±0.42） cm。各組患者一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞ 0.05）。所有研究對(duì)象病情經(jīng)過(guò)病理學(xué)檢查并確診，之前未經(jīng)過(guò)放化療治療。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

入組標(biāo)準(zhǔn)：（1）均經(jīng)病理學(xué)證實(shí)，之前未經(jīng)過(guò)放化療治療者；（2）患者年齡30 ～ 60歲；（3）均經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核，且均簽訂知情同意思者。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）精神疾病或者認(rèn)知障礙者；（2）合并其他惡性腫瘤者；（3）合并肺、肝、腎等功能嚴(yán)重異常者；（4）哺乳期或者妊娠期婦女。

二、方法

1.研究試劑：CD133、PSCA 和Oct-4蛋白抗體均為美國(guó)Abcam公司生產(chǎn)、CD44v6蛋白抗體為南京凱基生物科技有限公司生產(chǎn)；CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4的表達(dá)使用免疫組化法進(jìn)行檢測(cè)（病理科常規(guī)檢查），進(jìn)行組織切片，將切片在400×的顯微鏡下隨機(jī)選擇5個(gè)視野，切片的總灰度分析使用Motic Image Advanced 3.2圖形分析系統(tǒng)進(jìn)行。

2.檢測(cè)指標(biāo)：比較胃癌患者與其他胃部良性、惡性疾病患者CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4的表達(dá)陽(yáng)性率；比較癌干細(xì)胞標(biāo)記物CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4的表達(dá)與胃癌臨床特征之間以及淋巴結(jié)狀態(tài)的關(guān)系。

陽(yáng)性率根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞比例和著色強(qiáng)度聯(lián)合評(píng)定。陽(yáng)性細(xì)胞比例：陽(yáng)性細(xì)胞比例＜ 10%：0分、11%≤比例＜ 35%：1分、36%≤比例＜ 70%：2分、71%≤比例：3分。著色強(qiáng)度：無(wú)色：0分、淺色：1分、較深：2分、深色：3分。陽(yáng)性細(xì)胞比例得分×著色強(qiáng)度得分＞ 3分為陽(yáng)性，0 ～ 3分為陰性。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法

使用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，胃良性和惡性病變組織中CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4的表達(dá)陽(yáng)性率，癌干細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá)與胃癌臨床特征，淋巴結(jié)狀況與CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4的表達(dá)陽(yáng)性率采用百分率表示，組間差異采用c2檢驗(yàn)，以P＜ 0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、胃良性、惡性疾病中CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4的表達(dá)陽(yáng)性率比較

與胃癌組患者比較，其他類型的胃部病變中患者的CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4的表達(dá)陽(yáng)性率明顯更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05，表1）。

二、癌干細(xì)胞標(biāo)記物CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4的表達(dá)與胃癌臨床特征的聯(lián)系

四種干細(xì)胞標(biāo)志物CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4與胃癌的分化程度無(wú)明顯關(guān)系，差異不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞ 0.05）；浸潤(rùn)深度與腫塊最大徑≥5 cm的患者中四種干細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá)陽(yáng)性率更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05，表2）。

三、淋巴結(jié)狀況與CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4的表達(dá)陽(yáng)性率的關(guān)系

轉(zhuǎn)移灶和原發(fā)灶淋巴結(jié)中的CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4表達(dá)陽(yáng)性率之間的比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞ 0.05，表3）。

討 論

胃癌是一種常見(jiàn)的癌癥，致死率很高，嚴(yán)重威脅患者的生命安全。因此，臨床上需要找到有效的檢測(cè)指標(biāo)，預(yù)示胃癌的發(fā)生和發(fā)展。

CD133是一種5次跨膜的糖蛋白，有研究表明[3]CD133存在于內(nèi)皮干細(xì)胞、造血干細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞和其他原始細(xì)胞等多種細(xì)胞中，并且細(xì)胞侵潤(rùn)越深、分化越差、陽(yáng)性率越高，患者的生存時(shí)間就越短[4-5]。Oct-4屬于八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子，在生殖腫瘤、瑞腺癌、胰腺癌和膀胱癌等多種癌癥中呈高度陽(yáng)性表達(dá)，表達(dá)水平與腫瘤的發(fā)展有關(guān)[6-7]。CD44屬于細(xì)胞表面黏附分子，是一種細(xì)胞表面跨膜糖蛋白，具有高度特異性，與細(xì)胞和基質(zhì)和細(xì)胞之間的特異性黏連有關(guān)[8]。CD44由于外顯子的選擇性剪切，分為CD44標(biāo)準(zhǔn)型和CD44變異型兩種亞型。標(biāo)準(zhǔn)型CD44s在人體的正常組織中都有所表達(dá)，變異型CD44v在正常組織和腫瘤中都有所表達(dá)，但差異很大[9-10]。PSCA是Thy-1/Ly-6家族中的一員，是一種在前列腺上皮細(xì)胞表面表達(dá)的GPI錨定蛋白[11]。近年來(lái)，有研究表明[12-13]PSCA的單核苷酸多態(tài)性與中日韓三國(guó)中的胃癌發(fā)生密切相關(guān)。

表1 胃良性、惡性病變組織中CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4的表達(dá)陽(yáng)性率比較[例（%）]

表2 癌干細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá)與胃癌臨床特征的聯(lián)系

表3 淋巴結(jié)狀況與CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4的表達(dá)陽(yáng)性率的關(guān)系[例（%）]

本研究為了探究胃癌組織中干細(xì)胞標(biāo)志物CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4表達(dá)的臨床意義，比較四種干細(xì)胞標(biāo)記物的不同表達(dá)情況。研究結(jié)果顯示，與胃癌組患者比較，其他類型的胃部病變中患者的CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4的表達(dá)陽(yáng)性率明顯更低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）。近年來(lái)，有研究顯示PSCA在胃癌組織中表達(dá)，表明PSCA可能與腫瘤抗藥性有關(guān)。并且CD133和Oct-4在胃癌組織中表達(dá)量高，說(shuō)明有胃癌干細(xì)胞存在，并且表達(dá)情況與胃癌的情況有關(guān)。CD44v6作為CD44的變異型在正常組織和腫瘤組織中的表達(dá)差別很大，有研究表明在很多惡性腫瘤中CD44v6的表達(dá)出現(xiàn)失控，是一種癌干細(xì)胞標(biāo)記蛋白，CD44v6的表達(dá)和數(shù)量與腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移、侵襲和預(yù)后密切相關(guān)[14-15]。四種干細(xì)胞標(biāo)志物CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4與胃癌的分化程度無(wú)明顯關(guān)系，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞ 0.05）；浸潤(rùn)深度與腫塊最大徑≥5 cm的患者中四種干細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá)陽(yáng)性率更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）。轉(zhuǎn)移灶和原發(fā)灶淋巴結(jié)中的CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4表達(dá)陽(yáng)性率之間的比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞ 0.05）。因此，CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4這四種干細(xì)胞標(biāo)記物可能是一種重要的標(biāo)記蛋白，其陽(yáng)性表達(dá)的水平與胃癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和預(yù)后有關(guān)，對(duì)于胃癌的早期發(fā)現(xiàn)和預(yù)防具有明顯的臨床價(jià)值。

綜上所述，腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4表達(dá)，與胃癌的分化程度、浸潤(rùn)深度與腫塊最大徑有關(guān)，但與胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)，對(duì)胃癌的發(fā)病情況有指示作用，有可能作為檢測(cè)胃癌的分子標(biāo)記，具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。

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