產(chǎn)ESBLs腸桿菌科細(xì)菌檢測及藥敏分析

劉艷潔 張靈利

ESBLs主要由腸桿菌科細(xì)菌產(chǎn)生, 這些酶能夠水解青霉素、頭胞菌素、氨曲南等β-內(nèi)酰胺類抗生素, 是介導(dǎo)陰性桿菌對廣譜β-內(nèi)酰胺酶類抗菌藥物耐藥的主要機(jī)制之一［1,2］。隨著廣譜抗菌藥物廣泛應(yīng)用, 細(xì)菌耐藥性不斷增加, 各地因使用的抗生素種類和習(xí)慣的不同, 產(chǎn)ESBLs腸桿菌科細(xì)菌分離率和耐藥率可能存在明顯的不同?，F(xiàn)對本院2016年1～12月產(chǎn)ESBLs菌株的菌譜分布情況和細(xì)菌耐藥情況進(jìn)行統(tǒng)計分析, 為臨床醫(yī)生抗感染治療提供有力的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1標(biāo)本來源 所有標(biāo)本均來自本院2016年1～12月住院患者送檢的各種標(biāo)本。

1.1.2培養(yǎng)基 5%兔纖維血培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂、巧克力瓊脂、M-H培養(yǎng)基均購自溫州康泰有限責(zé)任公司。

1.1.3鑒定及藥敏試條 自動化鑒定及藥敏板購自上海星佰生物技術(shù)有限公司；藥敏紙片購自北京天壇。

1.1.4質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株 金黃色葡萄球菌ATCC29213、大腸埃希菌ATCC25922、銅綠假單胞菌ATCC27853均購自衛(wèi)計委藥品和生物制品檢定所。

1.2方法

1.2.1室內(nèi)質(zhì)控 微生物人員、儀器和設(shè)備、平板、鑒定及藥敏試條和紙片均在質(zhì)控范圍之內(nèi)。

1.2.2將送檢標(biāo)本立即接種于血平板、麥康凱、巧克力平板培養(yǎng)基, 36℃、5%～7% CO2、24～48 h, 分離出可疑菌落。

1.2.3用上海星佰BIOJOSUN-Ⅱ微生物鑒定藥敏分析儀進(jìn)行細(xì)菌鑒定及藥物敏感試驗。

1.2.4對儀器提示為產(chǎn)ESBLs的菌株, 用紙片協(xié)同法進(jìn)行ESBLs的確證試驗。細(xì)菌培養(yǎng)鑒定和藥敏試驗嚴(yán)格按全國臨床檢驗操作規(guī)程(第4版)進(jìn)行［3］。

1.2.5細(xì)菌鑒定及藥敏試驗結(jié)果通過WHONET5.6進(jìn)行統(tǒng)計。

2 結(jié)果

2.1細(xì)菌分離率 2016年1～12月共檢出大腸埃希菌677株,其中產(chǎn)ESBLs237株, 占 35.0%；檢出克雷伯菌屬276株,產(chǎn)ESBLs116株, 占42.0%；檢出變形桿菌46株, 其中產(chǎn)ESBLs20株, 占 43.5%。

2.2產(chǎn)酶株與非產(chǎn)ESBLs株耐藥率 產(chǎn)ESBLs的大腸埃希菌為237株, 對哌拉西林的耐藥率為98.0%, 對哌拉西林/他唑巴坦的耐藥率為22.6%, 對頭孢吡肟的耐藥率為78.9%, 對頭孢他啶的耐藥率為82.6%, 對美羅培南的耐藥率為1.5%, 對亞胺培南的耐藥率為1.2%, 對慶大霉素的耐藥率為50.6%, 對環(huán)丙沙星的耐藥率為80.5%, 對阿米卡星的耐藥率為28.6%。非產(chǎn)ESBLs的大腸埃希菌為440株, 對哌拉西林的耐藥率為78.9%, 對哌拉西林/他唑巴坦的耐藥率為14.3%, 對頭孢吡肟的耐藥率為20.5%, 對頭孢他啶的耐藥率為30.7%, 對美羅培南的耐藥率為0.5%, 對亞胺培南的耐藥率為0.5%, 對慶大霉素的耐藥率為41.2%, 對環(huán)丙沙星的耐藥率為39.9%, 對阿米卡星的耐藥率為2.3%。產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯菌為116株,對哌拉西林的耐藥率為89.1%, 對哌拉西林/他唑巴坦的耐藥率為14.8%, 對頭孢吡肟的耐藥率為70.5%, 對頭孢他啶的耐藥率為80.4%, 對美羅培南的耐藥率為1.8%, 對亞胺培南的耐藥率為0.7%, 對慶大霉素的耐藥率為59.7%, 對環(huán)丙沙星的耐藥率為45.1%, 對阿米卡星的耐藥率為21.8%。非產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯菌為160株, 對哌拉西林的耐藥率為49.4%,對哌拉西林/他唑巴坦的耐藥率為9.6%, 對頭孢吡肟的耐藥率為30.2%, 對頭孢他啶的耐藥率為40.3%, 對美羅培南的耐藥率為0, 對亞胺培南的耐藥率為0, 對慶大霉素的耐藥率為25.4%, 對環(huán)丙沙星的耐藥率為26.6%, 對阿米卡星的耐藥率為9.3%。根據(jù)藥敏試驗結(jié)果顯示, 產(chǎn)酶株比非產(chǎn)酶株的耐藥率高。

3 討論

ESBLs主要由腸桿菌科細(xì)菌產(chǎn)生, 大多為質(zhì)粒介導(dǎo)的ESBLs, 往往是由普通的β-內(nèi)酰胺酶基因(TEM-1、TEM-2、SHV-1)突變而來［4］。這些酶能夠水解青霉素、頭胞菌素、氨曲南等β-內(nèi)酰胺類抗生素。隨著廣譜抗菌藥物廣泛應(yīng)用于臨床, 產(chǎn)ESBLs菌株越來越多。由于ESBLs的編碼基因位于質(zhì)粒上, 可通過接合、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)移、轉(zhuǎn)整、轉(zhuǎn)座等形式使耐藥基因在細(xì)菌間傳遞, 易造成耐藥菌的流行, 從而導(dǎo)致嚴(yán)重醫(yī)院內(nèi)交叉感染［5］。ESBLs可以通過接合、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)導(dǎo)等形式使耐藥基因在細(xì)菌中擴(kuò)散, 從一個細(xì)菌傳遞到另一個細(xì)菌, 甚至在不同的菌種之間傳遞。三代頭孢菌素能夠誘導(dǎo)腸桿菌科細(xì)菌產(chǎn)生ESBLs, 本院三代頭孢菌素使用已非常普及, 對頭孢菌素類耐藥率都非常高, 可能與這些藥物為本院常規(guī)用藥, 誘導(dǎo)產(chǎn)生耐藥有關(guān)。以往認(rèn)為ESBLs主要由克雷伯菌和大腸埃希菌產(chǎn)生, 現(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)其他腸桿科細(xì)菌有明顯上升趨勢。第三、四代頭孢菌素對產(chǎn)ESBLs菌株即使體外敏感, 也不能用于臨床治療［6-9］。目前認(rèn)為可用于治療產(chǎn)ESBLs菌引起感染的藥物有：碳青霉烯類抗生素、頭霉烯類抗生素、阿米卡星及廣譜頭孢菌素/β-內(nèi)酰胺酶抑制劑。

隨著廣譜抗菌藥物的大量應(yīng)用, 細(xì)菌耐藥性越來越嚴(yán)重,控制耐藥菌株流行刻不容緩, 做好細(xì)菌耐藥性監(jiān)測, 及時切斷傳播途徑, 加強(qiáng)抗生素的合理使用及管理, 對有效控制產(chǎn)ESBLs菌株的流行將起到至關(guān)重要作用。因此, 實驗室對革蘭陰性桿菌ESBLs檢測顯得更加重要, 對ESBLs檢測應(yīng)擴(kuò)展到腸菌科所有陰性桿菌, 需引起臨床和臨床微生物檢驗工作人員的重視。

［1］ 金輝, 趙旺勝, 翁幸鐾, 等 .2006—2008年大腸埃希菌耐藥基因的研究.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志, 2011, 21(24):5107-5110.

［2］ 李耘, 呂媛, 王珊.2010年度衛(wèi)生部全國細(xì)菌耐藥監(jiān)測報告:非發(fā)酵革蘭陰性桿菌耐藥監(jiān)測.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志, 2011,21(24):5133-5137.

［3］ 葉應(yīng)嫵, 王毓三.全國臨床檢驗操作規(guī)程.南京:東南大學(xué)出版社, 1997:472-531.

［4］ 符永玫, 張永標(biāo), 席云, 等 .產(chǎn) ESBLs肺炎克雷伯菌的流行狀況與藥敏譜調(diào)查.中國衛(wèi)生檢驗雜志, 2010, 20(2):402-403.

［5］ 黃彬, 陳茶, 湯曉麗, 等.肺炎克雷伯菌對喹諾酮類及氨基糖苷類耐藥基因檢測及耐藥機(jī)制分析.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2011, 21(1):5-7.

［6］ 李玉梅, 安宏志.產(chǎn)ESBLs腸桿菌科細(xì)菌檢測及藥敏分析.中外健康文摘, 2014(15):60-61.

［7］ 王卓, 王雨新, 陳強(qiáng), 等 .產(chǎn) ESBLs腸桿菌科細(xì)菌的檢測及耐藥性.中國微生態(tài)學(xué)雜志, 2016, 28(5):564-566.

［8］ 周勇, 張晶, 陶霞, 等 .廣州市健康人群腸道攜帶產(chǎn)ESBLs腸桿菌科細(xì)菌的耐藥分析.中國衛(wèi)生檢驗雜志, 2014(14):2104-2107.

［9］ 王喜仁, 薛峰, 朱月秋, 等.腸桿菌科細(xì)菌中產(chǎn)超廣譜 β-內(nèi)酰胺酶菌株的檢測及藥敏分析.中國抗生素雜志, 2003, 28(12):730-732.