Th17細(xì)胞在乙型肝炎病毒相關(guān)性肝病中的表達(dá)及意義

楊新霞

[摘要] 目的 分析Th17細(xì)胞在乙型肝炎病毒相關(guān)性肝病中的表達(dá)及意義。 方法 隨機(jī)抽取該院自2012年11月—2014年12月收治的55例慢性乙型肝炎、55例相關(guān)性肝硬化患者及抽取同時(shí)段內(nèi)來(lái)該院實(shí)施健康體檢的受檢者55名作為研究對(duì)象；將前者作為觀察1組、觀察2組，后者作為對(duì)照組，針對(duì)所有研究對(duì)象，均實(shí)施相對(duì)應(yīng)的檢查，分析血漿IL-17水平、外周血Th17細(xì)胞頻率。結(jié)果 血漿IL-17水平、外周血Th17細(xì)胞頻率觀察1組（21.73±4.66）pg/mL、（2.16±0.40）%、觀察2組（32.52±9.58）pg/mL、（2.19±0.33）%明顯高于對(duì)照組（11.75±3.3）pg/mL、（1.10±0.25）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且血漿IL-17水平、外周血Th17細(xì)胞頻率呈正相關(guān)性；觀察2組患者中肝臟中的α-平滑肌肌動(dòng)蛋白水平、IL-17mRNA表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，故α-平滑肌肌動(dòng)蛋白水平與纖維分化期、肝臟炎癥水平呈正相關(guān)性，（r=0.430、0.660、0.601、0.506，P<0.05）。 結(jié)論 Th17細(xì)胞在乙型肝炎病毒相關(guān)性肝病中發(fā)生與發(fā)展中發(fā)揮著作用。

[關(guān)鍵詞] Th17細(xì)胞；乙型肝炎病毒；相關(guān)性肝病

[中圖分類號(hào)] R512 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2018）11（a）-0030-03

[Abstract] Objective To analyze the expression and significance of Th17 cells in hepatitis B virus-associated liver disease. Methods A total of 55 patients with chronic hepatitis B and 55 patients with related cirrhosis who were admitted to the hospital from November 2012 to December 2014 were enrolled. The subjects were treated as the observation group 1 and the observation group 2， and the latter as the control group. The corresponding examinations were performed for all the subjects， and the plasma IL-17 level and the peripheral blood Th17 cell frequency were analyzed. Results Plasma IL-17 levels and peripheral blood Th17 cell frequency were observed in 1 group （21.73±4.66） pg/mL， （2.16±0.40）%， and observation group 2 （32.52±9.58） pg/mL， （2.19±0.33）%， significantly higher than the control group （11.75±3.3） pg/mL， （1.10±0.25）%，the different was statistically significant（P<0.05）， and plasma IL-17 level， peripheral blood Th17 cell frequency was positively correlated； observation group 2 of patients in the liver α - the levels of smooth muscle actin and IL-17 mRNA were significantly higher than those in the control group， so α-smooth muscle actin level was positively correlated with fibrosis stage and liver inflammation level（r=0.430， 0.660， 0.601， 0.506，P<0.05）. Conclusion Th17 cells play a role in the occurrence and development of hepatitis B virus-associated liver disease.

[Key words] Th17 cells； Hepatitis B virus； Related liver diseases

臨床研究表明，細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)在乙型肝炎病毒感染中發(fā)揮著重要作用，特別是病毒特異性的T淋巴細(xì)胞反應(yīng)中，其是控制乙型肝炎病毒感染的關(guān)鍵。而Th17細(xì)胞作為T淋巴細(xì)胞中的新成員，其以維甲酸相關(guān)的孤兒受體γt為特異性轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子而存在，以分泌IL-17、IL-21、IL-22等而命名[1]。該次研究隨機(jī)選取該院2012年11月—2014年12月收治的55例慢性乙型肝炎、55例相關(guān)性肝硬化患者及55名健康體檢者為研究對(duì)象，分析Th17細(xì)胞在乙型肝炎病毒相關(guān)性肝病中的表達(dá)及意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)取該院收治的55例慢性乙型肝炎、55例相關(guān)性肝硬化患者及抽取同時(shí)段內(nèi)來(lái)該院實(shí)施健康體檢的受檢者55名作為研究對(duì)象；將前者作為觀察1組、觀察2組，后者作為對(duì)照組。觀察1組男39例、女16例，年齡19～72歲，平均（45.5±10.7）歲。觀察2組男36例、女19例，年齡20～71歲，平均（45.0±11.2）歲。對(duì)照組男37名，女18名，年齡20～72歲，平均（46.0±10.5）歲。對(duì)比分析3組研究對(duì)象基線資料，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。經(jīng)該院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者或家屬知情同意。

1.2 方法

流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)方法：抽取患者清晨空腹靜脈血3 mL，將其置入肝素抗凝真空采血管中，取300 μL全血，加入50 ng/mL十四烷酸PMA、0.7 μg/mL莫能霉素（型號(hào)BJ-0015-2016）、1 μg/mL離子霉素（美國(guó)生產(chǎn)、I-6800-5 mga），進(jìn)行培養(yǎng)箱孵育5 h，24 h內(nèi)檢測(cè)外周血Th17細(xì)胞頻率。

酶聯(lián)免疫吸咐法檢測(cè)方法：血液離心處離后，取離心血漿，將其保存于零下80℃的冰箱內(nèi)，通過ELISA檢測(cè)IL-17水平。

熒光定量法檢測(cè)IL-17mRNA表達(dá)情況：取健康研究對(duì)象及乙型肝炎病毒患者的肝組織，將其放置于液痰中轉(zhuǎn)移，并保存于-80℃的冰箱內(nèi)備用，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄試劑合成cD-NA，待其迅速冰浴后。實(shí)施熒光定量PCR，擴(kuò)增IL-17mRNA[2-3]。

取新鮮肝組織后，將其固定于甲醛溶液中，24 h內(nèi)將其制作成蠟塊，對(duì)蠟塊連續(xù)切片后，進(jìn)行常規(guī)HE染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察，α-平滑肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)情況采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)。

1.3 分析指標(biāo)

分析3組研究對(duì)象血漿IL-17水平、外周血Th17細(xì)胞頻率、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白水平、IL-17mRNA表達(dá)水平，并對(duì)Th17細(xì)胞在乙型肝炎病毒相關(guān)性肝病中的表達(dá)及意義進(jìn)行分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料采用（x±s）表示，行t檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用n（%）表示，行χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組血漿IL-17水平、外周血Th17細(xì)胞頻率、IL-17mRNA表達(dá)水平

觀察1組、觀察2組血漿IL-17水平、外周血Th17細(xì)胞頻率明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 血清學(xué)指標(biāo)、外周血Th17細(xì)胞頻率相關(guān)性分析

分析觀察1組、觀察2組患者的血漿IL-17與外周血Th17細(xì)胞頻率發(fā)現(xiàn)，以上兩個(gè)指標(biāo)呈正相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

3 討論

乙型肝炎病毒感染在臨床疾病治療上較為常見，隨著病情發(fā)展，會(huì)引起乙型肝炎病毒相關(guān)性肝病，如慢性乙型肝炎、相關(guān)性肝硬化[4]。臨床研究表明[5]，乙型肝炎病毒引起的肝臟損傷與轉(zhuǎn)歸情況，與患者機(jī)體細(xì)胞免疫功能下降、免疫耐受有著密切關(guān)系。而淋巴細(xì)胞是免疫應(yīng)答的重要組成部分，其在免疫調(diào)節(jié)中占據(jù)重要作用。目前Th17是臨床新發(fā)現(xiàn)的一個(gè)細(xì)胞亞群，其特征為大量分泌IL-17，故Th17在肝臟疾病的發(fā)生與發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。

Th17細(xì)胞會(huì)分泌IL-17、IL-21、細(xì)胞腫瘤因子等，以上因子會(huì)聚集在炎癥部位，增加炎癥反應(yīng)，從而加重患者病情。同時(shí)IL-17還會(huì)引發(fā)其它炎細(xì)胞因子的出現(xiàn)，增加對(duì)組織的損傷程度。在肝臟組織中，通過對(duì)Th17、IL-17、IL-17mRNA表達(dá)水平的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在乙型肝炎病毒相關(guān)性肝病患者中，以上指標(biāo)的表達(dá)水平，明顯要高于健康人群，且Th17與血清學(xué)指標(biāo)呈正相關(guān)性[6]。此外，肝纖維化是一種修復(fù)過程，臨床特征為ECM的過度沉淀與異常增生，當(dāng)肝纖維處于晚期階段時(shí)，HCS會(huì)發(fā)揮中心作用，而α-平滑肌肌動(dòng)蛋白水平又是HCS的標(biāo)志物，故當(dāng)肝硬化患者α-平滑肌肌動(dòng)蛋白水平升高時(shí)，患者體內(nèi)有肝臟炎癥與纖維化程度均較高，說(shuō)明患者肝臟炎癥較高且肝臟損傷較嚴(yán)重。由此推斷，Th17細(xì)胞會(huì)參與HCS的激活過程[7]。該次研究顯示：血漿IL-17水平、外周血Th17細(xì)胞頻率觀察1組[（21.73±4.66）pg/mL、（2.16±0.40）%]、觀察2組[（32.52±9.58）pg/mL、（2.19±0.33）%]明顯高于對(duì)照組[（11.75±3.3）pg/mL、（1.10±0.25）%]（P<0.05）。是由此，Th17是最重要的效應(yīng)因子，其在患者體內(nèi)表達(dá)廣泛，不僅是重要的促炎因子，還可誘導(dǎo)其它炎細(xì)胞因子等進(jìn)行表達(dá)，從而加重炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)及對(duì)組織損傷。該次研究血漿IL-17水平、外周血Th17細(xì)胞頻率。其與陳梅等人[8]研究結(jié)果相似，即相關(guān)性肝硬化患者血漿IL-17水平、外周血Th17細(xì)胞頻率分別為（32.51±9.57）pg/mL、（2.18±0.34）%[8]。

綜上所述，在乙型肝炎病毒相關(guān)性肝病的發(fā)生與發(fā)展過程中，Th17細(xì)胞起著重要作用，值得推廣。

[參考文獻(xiàn)]

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（收稿日期：2018-08-02）