多肉類十二卷屬植物組織培養(yǎng)技術

金 燕 陸錦明 卜順法 顧春峰 (上海市閔行區(qū)三農綜合服務中心 201109）

湯桂鈞* （上海市閔行區(qū)農業(yè)技術服務中心 201101）

多肉類植物為百合科多年生常綠草本，是近年在我國快速發(fā)展的觀賞花卉，其中以十二卷屬較為名貴。多肉類十二卷屬植物全屬約有150余個種，廣泛分布于世界各地，在我國華南、西南地區(qū)的熱帶、亞熱帶地區(qū)亦有分布；性喜溫暖、干燥和陽光充足的生態(tài)環(huán)境，忌寒冷、霜凍和潮濕，最適生長溫度15～25 ℃，冬季最低5 ℃以上，夏季能耐40 ℃左右的高溫，最適生長期為3～11月；對土壤要求不嚴，以肥沃疏松的沙壤土為最適。

多肉類十二卷屬植物利用價值較高，葉片呈披針形三角狀、長條狀或圓柱狀，肉質厚實，表面光滑革質、有光澤，葉色淺綠或深綠，葉上有彩色條紋或彩色星狀斑點，有的品種葉片上鑲嵌有叢狀金黃色、粉紅色的條紋，十分美麗，具有較強的觀賞性；作盆栽植物極適宜用于辦公室、居室、廳堂、陽臺等擺放裝飾，不僅具有清新優(yōu)雅之美，還可以吸收空中的有害氣體，潔凈空氣環(huán)境，具有環(huán)保功能。因此，近十多年來，多肉類十二卷屬植物在我國許多大中城市流行，成為熱門的新寵花卉，單價數十元至數百元，經濟效益顯著。但多肉類十二卷屬植物通?；ǘ粚?，繁殖方式以分株、葉片扦插等為主，年繁殖率只有1∶3～5，種苗稀缺，抑制了其產業(yè)發(fā)展。為此，筆者引進了近30個多肉類十二卷屬植物新品種，從中選取了代表性種類與品種，以其花梗嫩莖段、嫩葉等組織為外植體，進行了離體培養(yǎng)技術研究，最終掌握了整套組織培養(yǎng)技術體系，培育出了一批試管苗并作盆花栽培[1]。現將其組培技術研究結果報道如下。

1 外植體誘導培養(yǎng)

1.1 花梗嫩莖段離體誘導培養(yǎng)

1.1.1 消毒處理與接種

多肉類十二卷屬植物無莖稈，葉片簇生、厚實肉質，常年5、6月及10、11月從中心處抽出細長花梗開花，不結實無種子（人工授粉可結實）。根據其獨特的生物學特征特性，選擇新抽生、半木質化的花梗嫩莖段作外植體，誘導發(fā)生無菌芽。

具體方法為：將抽生的花梗自植株基部剪下，并剪去下部老熟部分及頂端幼嫩部分，用洗潔精清洗2遍，然后剪成長6cm左右的莖段，用紗布包裹后置自來水下沖洗3 h。在無菌室超凈臺上對花梗進行消毒，先用75%酒精溶液消毒1min，然后用10%次氯酸鈉消毒15min，最后用無菌水沖洗3遍后瀝干備用。將消毒后的花梗切成1cm長的莖段，每段帶2～3個節(jié)間，接種于發(fā)生培養(yǎng)基上，以誘導不定芽產生，從而培育成無菌系[2]。誘導培養(yǎng)基配方為MS+BA 2.0mg+NAA 0.2mg+活性炭1.0g/L+瓊脂5g/L+蔗糖30g/L，pH 5.8，其中活性炭可起到減輕外植體褐化死亡及促進培養(yǎng)基通氣的作用。為防止莖段離體消毒后產生褐化現象（離體后多酚類物質外滲），前3周內暗培養(yǎng)不加光，以后光照13 h/d，光照強度3 000 Lux左右。

1.1.2 培養(yǎng)結果

經過7～15 d的誘導培養(yǎng)（品種間有差異），莖段自頂端切口處或節(jié)間處膨大形成愈傷組織并不斷生長，先呈黃白色，再經30多d的培養(yǎng)，愈傷組織脫分化長出淺綠色且有光澤的亮點，表面凹凸不平，直徑0.5～1.0cm。經約2個月的培養(yǎng)，愈傷組織分化，轉變成淺綠色、有光亮的芽點，此為不定芽雛形，以后芽點繼續(xù)生長成幼葉并呈淺綠色至濃綠色，再生為叢生苗，再經1個多月培養(yǎng)，葉腋處抽出分枝生成叢生芽，一般有2～4個，多的可達5個以上，由此誘導成功，一般誘導率可達90%以上。

1.2 嫩葉離體誘導培養(yǎng)

葉片離體培養(yǎng)是植物組織培養(yǎng)的常用方法，具有取材方便、不受季節(jié)限制等優(yōu)點，但相對于花梗嫩莖段培養(yǎng)，其培養(yǎng)周期明顯較長，成功率也相對較低。

1.2.1 葉片消毒處理與接種

剪取多肉類十二卷屬植物植株中心處或旁邊新長出、已展平的新葉，用洗潔精清洗2遍，用紗布包裹后置自來水下沖洗3 h。在無菌室超凈臺上對葉片進行消毒處理，先用75%酒精溶液消毒1min，然后用10%次氯酸鈉消毒10～15min，最后用無菌水沖洗3遍后瀝干備用。將葉片切成1cm見方的小塊，平放接種至培養(yǎng)基上，一般瓶內接種1～5個。培養(yǎng)基配方及培養(yǎng)條件與花梗嫩莖段離體誘導培養(yǎng)相同。

1.2.2 培養(yǎng)結果

培養(yǎng)7 d后，葉片切口處開始膨大并陸續(xù)脫分化長出愈傷組織，開始呈黃白色，經2個月培養(yǎng)后陸續(xù)轉變成淺綠色、有光亮、凹凸不平的組織，約半年可從愈傷組織上分化出幼苗并不斷生長成叢生苗。

2 繼代增殖培養(yǎng)

誘導成功的叢生苗一般每株有2～4個叢生芽，可將叢生芽切割分株進行增殖擴繁，以不斷擴大繁殖系數，一般每30～45 d繼代增殖1次。

增殖培養(yǎng)基配方為MS+BA0.2～1.0mg+NAA 0.02～0.1mg/L+瓊脂5g/L+蔗糖30g/L，pH 5.8。光照13 h/d，光照強度3 000 Lux左右。應注意BA濃度不宜超過0.3mg/L，避免叢生芽過多而使瓶苗徒長、葉片細長排列不整齊、甚至產生“玻璃苗”[3]。培養(yǎng)室溫度以24 ℃為好，溫度過低幼苗生長慢，溫度過高（25 ℃以上）幼苗生長太快、苗瘦弱細長甚至會產生玻璃化現象[4]。此外，為促進培養(yǎng)基通氣并有利于瓶苗健壯生長，培養(yǎng)基中可添加活性炭1～2g/L。

繼代增殖的目的是將叢生芽不斷切割分株以擴大繁殖系數，并使瓶苗健壯生長，但不能盲目擴大繁殖系數，否則會適得其反，一般增殖系數以1∶2.5～3為宜。

3 生根培養(yǎng)

當繼代增殖至一定數量后，于幼苗長至高2cm左右時將其幼苗切成單株，接種至生根培養(yǎng)基上培育成完整的試管苗，生根培養(yǎng)基配方為1/2MS+IBA 0.2～0.3mg/L+活性炭1.0g/L+瓊脂4.5g/L+蔗糖20g/L，pH 5.8。光照、溫度管理與增殖培養(yǎng)相同。一般生根率可達98%以上，根系一般在3條以上，多的可達7～10條[5、6]。

4 試管苗煉苗馴化培育

將試管苗移出培養(yǎng)室，用鑷子取出幼苗，在清水中漂洗，除盡根系所沾瓊脂，以防栽后滋生病菌而爛根。煉苗移栽容器以30cm×30cm、底部鏤空的塑料框為好，框內平鋪10cm厚基質，煉苗基質選用泥炭、蛭石、珍珠巖、赤玉、竹炭、蛇木、仙土等7種，經一定比例混合配比并用拌和機充分攪拌均勻。基質中需加入殺菌劑、殺蟲劑及NPK三元復合肥，以殺滅基質內病原菌和殘留蟲卵，并補充養(yǎng)分。將苗淺栽于基質內，栽后及時澆足搭根水，而后用75%遮光率的黑色遮陽網覆蓋2層，因多肉類十二卷屬植物的葉片肉質厚實不易失水，故不需覆蓋薄膜，避免基質濕度過高而爛苗。栽植第2天可用噴霧器進行葉片噴霧，每天早晚各噴1次，切忌澆水。新根長出、幼苗完全成活后需嚴格控制澆水，一般夏秋季每7～10 d于清晨澆水1次，冬春季每15～20 d澆水1次，不干不澆，澆則澆透。苗長至5cm以上時（約6個月）可移栽至容器內作盆花養(yǎng)護，煉苗成活率可達99%以上。多肉類十二卷屬植物病蟲害發(fā)生極少且抗病性較強，在煉苗馴化階段及以后正式上盆養(yǎng)護后基本上不進行病蟲害防治。

[1]朱天華，陸錦明，孫清，等.十二卷類植物的離體培養(yǎng)技術研究[J].上海交通大學學報:農業(yè)科學版, 2012,30(3):45-48.

[2]查夫拉.植物生物技術導論[M].北京：化學工業(yè)出版社,2002,2(3）：38-39.

[3]宋曉诪，沈萌，左志宇，等.十二卷屬植物西山壽的組織培養(yǎng)與快速繁殖[J].植物生理學報,2007,43(5）：883-884.

[4]連勇，陳國忠，沈文，等.植物組織與細胞離體培養(yǎng)技術[M]北京: 中國科學技術出版社,2011:10-20.

[5]劉春梅，張紅，等.點紋十二卷的組培與快繁[J].安徽農學通報,2012,18(3）：32-33.

[6]楊娟，俞愛軍，周燕，等.多肉植物花影壽離體快繁技術研究[J].上海農業(yè)科技，2017(2):83-84.