食品常用合成色素高效液相色譜檢測方法的改進

□ 厲 芬 王鳳麗 陳 敏 湖州市食品藥品檢驗研究院

1 合成色素的應(yīng)用

色素包含天然和人工合成色素兩種類型，合成色素的成本較低，色澤鮮艷，著色力強，色調(diào)多樣，加工難度不大，所以在我國食品加工領(lǐng)域當(dāng)中，合成色素應(yīng)用更為廣泛一些[1]。合成色素多以苯、甲苯、萘等化工產(chǎn)品為原料，經(jīng)過磺化、硝化、偶氮化等一系列有機反應(yīng)而成，大多為含有R -N N -R′鍵、苯環(huán)或氧雜蒽結(jié)構(gòu)化合物。許多合成色素有一定毒性，超量應(yīng)用合成色素會對人體造成不同程度的危害。鑒于食用合成色素的不安全性，國家也加強了對合成色素的監(jiān)管，制定了食品添加劑使用標準（GB 2760-2014），目前對合成色素的檢測手段有高效液相色譜法、薄層色譜法、示波極譜法。現(xiàn)階段我國食品合成色素檢測時，一般將高效液相色譜法作為主要檢測方法，高效液相色譜檢測法實際應(yīng)用的過程當(dāng)中，可以將食品當(dāng)中合成色素的含量檢測出來，以便讓食品合成色素管理力度得到大幅度提升，讓消費者的合法權(quán)益得到保護[2]。

2 高效液相色譜法

食品中人工合成色素用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離，根據(jù)保留時間定性和與峰面積比較進行定量[3]。我國食品合成色素檢測范圍包含糖果、果汁以及飲料等食品，蛋白質(zhì)含量比較高的食品以及基質(zhì)復(fù)雜性的食品當(dāng)中合成色素的檢測難度比較高，合成色素和蛋白質(zhì)相互結(jié)合在一起，難以提取與凈化，檢測工作的穩(wěn)定性與準確性比較弱，現(xiàn)階段我國施行的GB2760-2014中明確規(guī)定，需要使用高效液相色譜法完成檢測工作。高效液相色譜檢測過程中應(yīng)用到高壓輸液系統(tǒng)，將不同性質(zhì)的溶劑或者比例不同的混合型溶劑、緩沖溶劑通過色譜，樣品經(jīng)過分離之后，憑借檢測器完成樣品合成色素檢測工作，各項工作的選擇性與準確性比較強，分離效果也可以得到保證，在檢測中將待測物質(zhì)的性質(zhì)作為依據(jù)，科學(xué)合理地在各種類型的方法當(dāng)中進行選擇，在樣品提取工作完成之后，可以使用色譜柱開展長波掃描，依據(jù)波長將色素的種類以及數(shù)量確定下來，完成合成色素檢測工作。目前，我國市場中流通的食品合成色素種類逐漸增多，食品基質(zhì)復(fù)雜性也逐漸增強，高效液相色譜法實際應(yīng)用的過程中，想要迅速將色素檢測工作完成，是一件比較困難的事情，因此產(chǎn)生超高效液相色譜法，超高效液相色譜法實際應(yīng)用的過程中，可以承受更大的壓力，流速也更大，既可以讓高效液相色譜法的檢測效率得到保證，也可以讓各項檢測工作的精準性得到大幅度提升。

3 檢驗方法的改進

在實際應(yīng)用高效液相色譜法過程當(dāng)中，將0.02mol/L的乙酸銨-甲醇作為流動相，應(yīng)用梯度洗脫分離方法，根據(jù)國家標準要求，在檢測開始的時候，甲醇20%～35%梯度變化洗脫，容易產(chǎn)生新紅和檸檬黃分離不完全甚至分不開這種問題，容易產(chǎn)生誤判問題。改進之后的方法：在檢測開始后，將0.02mol/L的乙酸銨-甲醇比例按9∶1維持10min，在 10～15min將二者之間的比例調(diào)整是65∶34，在15～25min將二者的比例調(diào)整成2∶98，在22～25min將二者的比例調(diào)整為80∶20，在25～28min重新將二者的比例調(diào)整成初始比例，梯度洗脫法可以較好地對多種色素進行分離，特別是可以將新紅和檸檬黃完全分離開來。

檢測環(huán)節(jié)當(dāng)中波長的選擇，針對254nm波長檢測，亮藍靈敏度較為低下的問題，實際應(yīng)用過程中用多種波長同時開展檢測工作，新紅、莧菜紅以及靛藍等合成色素在254nm之下開展檢測工作，亮藍檢測過程中，波長選取595nm。

固相萃取柱的選擇。固相萃取主是憑借固體吸附劑將樣品當(dāng)中目標化合物吸附起來，讓目標化合物與基質(zhì)干擾物之間相互分類，再使用洗脫液淋洗之后，實現(xiàn)分離和富集目標。目前，我國市場當(dāng)中流通的傳統(tǒng)型固相萃取吸附劑基本一樣，實際應(yīng)用的過程中，有可能發(fā)生分析物回收率低下、凈化不完全以及重現(xiàn)性差等問題。在對市場當(dāng)中流通的幾種固相萃取主進行相互比較之后發(fā)現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)StrataX-AW固相萃取柱在實際應(yīng)用的過程中，可以滿足實驗要求，StrataX吸附劑應(yīng)用創(chuàng)新型的聚合物技術(shù)，二氨基官能團會對帶點酸性化合物展現(xiàn)出來比較強的選擇性，可以完成100%有機洗滌工作，讓固相萃取柱的靈敏性以及改進型方法的重現(xiàn)性得到保證。檢測食品合成色素時，在改進高效液相色譜法的過程中，應(yīng)當(dāng)考慮到以往高效液相色譜法檢測合成色素的過程中存在的問題，并使用適應(yīng)性比較強的措施，對高效液相色譜法進行改進，以保證高效液相色譜法的實際應(yīng)用效果。