球菌的分析鑒定

□ 樊云霄 河南省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院

模仿葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、糞腸球菌、表皮葡萄球菌這四種菌株在血平板和BP平板上很容易混淆，實(shí)驗(yàn)室對這四種菌株做進(jìn)一步生化鑒定研究。這樣以后在微生物實(shí)驗(yàn)中能夠快速取得準(zhǔn)確、真實(shí)的結(jié)果，實(shí)驗(yàn)人員的檢測質(zhì)量也可以大大提高，對整個(gè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制結(jié)果給予肯定。微生物實(shí)驗(yàn)跟別的實(shí)驗(yàn)不一樣，實(shí)驗(yàn)當(dāng)中工作人員一定要小心，注意安全。

1 材料及試劑

采用北京路橋提供的3 mm無菌接種環(huán)、血平板、BP平板、營養(yǎng)瓊脂平板、革蘭染色液、凍干血漿，所選材料及試劑均在有效期之內(nèi)。

標(biāo)準(zhǔn)菌株：模仿葡萄球菌 ATCC 27851、金黃色葡萄球菌 ATCC 6538、糞腸球菌 ATCC 29212、表皮葡萄球菌ATCC 12228。

2 菌株活化

在無菌環(huán)境下，從凹口處撕開產(chǎn)品包裝，撕掉標(biāo)簽上的拉片，將其貼于初級培養(yǎng)平板上；捏管帽處安瓿瓶中部（僅一次）使其釋放水合液體，垂直握住試管并輕拍之，使液體流入含小球的管底；通過擠捏壓碎小球，使其與液體混合；立即將拭子浸于水合懸液中，擠壓并旋轉(zhuǎn)拭子，接種于營養(yǎng)瓊脂上，用一無菌接種環(huán)在先前的接種區(qū)劃線20次，使其分離出單菌落。倒置36 ℃培養(yǎng)24 h。

3 分離

模仿葡萄球菌在營養(yǎng)瓊脂上為白色圓形濕潤菌落；金黃色葡萄球菌在營養(yǎng)瓊脂上為黃色圓形濕潤菌落；糞腸球菌在營養(yǎng)瓊脂上為無色針尖狀菌落；表皮葡萄球菌在營養(yǎng)瓊脂上為白色針尖狀菌落。

4 接種

挑取模仿葡萄球菌在營養(yǎng)瓊脂上的白色圓形濕潤菌落劃線接種血平板和BP平板；挑取金黃色葡萄球菌在營養(yǎng)瓊脂上的黃色圓形濕潤菌落劃線接種血平板和BP平板；挑取糞腸球菌在營養(yǎng)瓊脂上的無色針尖狀菌落劃線接種血平板和BP平板；挑取表皮葡萄球菌在營養(yǎng)瓊脂上的白色針尖狀菌落劃線接種血平板和BP平板。血平板倒置36 ℃培養(yǎng)24 h。BP平板倒置36 ℃培養(yǎng)48 h。模仿葡萄球菌在血平板上為白色圓形濕潤菌落，有溶血；金黃色葡萄球菌在血平板上為黃色圓形光滑濕潤菌落，有溶血；糞腸球菌在血平板上為白色圓形濕潤菌落，有溶血；表皮葡萄球菌在血平板上為白色圓形濕潤菌落，無溶血。模仿葡萄球菌在BP平板上為灰色圓形大菌落，周圍有暈圈，暈圈外有透明帶。金黃色葡萄球菌在BP平板上為黑色圓形小菌落，有光澤，有渾濁帶。糞腸球菌在BP平板上為黑色圓形小菌落，有光澤，無暈圈。表皮葡萄球菌在BP平板上為黑色圓形菌落，無暈圈。

5 鑒定

（1）革蘭氏染色及鏡檢。模仿葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌，金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌，糞腸球菌為革蘭氏陽性球菌，表皮葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌。

（2）挑取五個(gè)營養(yǎng)瓊脂上的模仿葡萄球菌接種5 mL BHI，挑取五個(gè)營養(yǎng)瓊脂上的金黃色葡萄球菌接種5 mL BHI，挑取五個(gè)營養(yǎng)瓊脂上的糞腸球菌接種5 mL BHI，挑取五個(gè)營養(yǎng)瓊脂上的表皮葡萄球菌接種5 mL BHI，36 ℃培養(yǎng)24 h。按照凍干血漿的操作方法做血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)，每半個(gè)小時(shí)觀察一次，觀察六小時(shí)。如出現(xiàn)凝固或凝固體積大于一半即為陽性。模仿葡萄球菌無凝固、金黃色葡萄球菌凝固、糞腸球菌無凝固、表皮葡萄球菌無凝固。

6 結(jié)語

在微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)當(dāng)中，能夠取得準(zhǔn)確、真實(shí)的結(jié)果，與實(shí)驗(yàn)人員的技術(shù)息息相關(guān)。優(yōu)質(zhì)的實(shí)驗(yàn)操作，提高實(shí)驗(yàn)的效率和實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，也是微生物發(fā)展的基礎(chǔ)，所以在實(shí)驗(yàn)管理工作中，要熟悉實(shí)驗(yàn)過程，了解標(biāo)準(zhǔn)中常規(guī)的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，掌握一些易混淆的菌株的生理生化特征現(xiàn)象。微生物實(shí)驗(yàn)過程中一定要小心，要避免泄露。泄露一是會(huì)對實(shí)驗(yàn)人員造成一定的傷害，二是對整個(gè)實(shí)驗(yàn)室也會(huì)造成污染。另外，微生物中很多致病菌在一定的條件見下很容易增長和變異，會(huì)對結(jié)果造成一定的偏差和影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后一定要對用過的試劑和耗材進(jìn)行高壓滅菌。通過實(shí)驗(yàn)可以驗(yàn)證理論，工作人員要提高實(shí)驗(yàn)操作的熟練度，培養(yǎng)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的工作能力和思考能力，并具有過硬的專業(yè)技術(shù)水平，熟練地操作技術(shù)同時(shí)還要保證自身的安全性。微生物實(shí)驗(yàn)室堅(jiān)持以發(fā)展為主題，以服務(wù)客戶為中心，以提高實(shí)驗(yàn)質(zhì)量為重點(diǎn)，緊緊圍繞實(shí)驗(yàn)的整體工作，解放思想，更新觀念，開拓進(jìn)取，不斷推進(jìn)微生物實(shí)驗(yàn)室工作向前發(fā)展。微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)質(zhì)量對于檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性至關(guān)重要，因此應(yīng)當(dāng)?shù)玫礁叩闹匾暋?/p>