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    淺析如何做好微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制

    2018-01-17 06:03:42徐雪梅白雯靜蘭州市食品藥品檢驗(yàn)所
    食品安全導(dǎo)刊 2018年33期
    關(guān)鍵詞:實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)質(zhì)量

    □ 周 斌 徐雪梅 白雯靜 蘭州市食品藥品檢驗(yàn)所

    質(zhì)量控制是檢驗(yàn)工作中很重要的一項(xiàng)工作,特別在微生物檢驗(yàn)中質(zhì)量控制顯得尤為重要。微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制主要包括:實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部制定質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn),進(jìn)行人員比對(duì)或者購(gòu)買(mǎi)質(zhì)控樣定期對(duì)實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行考核;實(shí)驗(yàn)室參加外部組織及專門(mén)機(jī)構(gòu)進(jìn)行的室間質(zhì)控評(píng)價(jià)與比對(duì)。

    要做好微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制,除了制定嚴(yán)格的管理制度和規(guī)范化的操作程序外,更應(yīng)對(duì)影響實(shí)驗(yàn)的重要因素進(jìn)行嚴(yán)格的管理。主要從以下幾個(gè)方面進(jìn)行控制。

    培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

    目前,微生物檢驗(yàn)工作中最常用的培養(yǎng)基有脫水合成培養(yǎng)基和商品化即用型培養(yǎng)基。質(zhì)控合格的培養(yǎng)基要嚴(yán)格按供應(yīng)說(shuō)明書(shū)的要求存放,大部分培養(yǎng)基都是陰涼干燥保存,部分還需要冷藏。開(kāi)封后的脫水合成培養(yǎng)基,實(shí)驗(yàn)室一定要按貯藏條件的要求存放,且要標(biāo)注開(kāi)封日期。

    培養(yǎng)基的制備

    正確制備培養(yǎng)基是微生物檢驗(yàn)的最基礎(chǔ)工作。培養(yǎng)基在配制過(guò)程中稱量時(shí),為防止吸入含有有毒物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末,操作人員盡量佩戴口罩或在通風(fēng)柜中進(jìn)行。將配好的培養(yǎng)基分裝到適當(dāng)?shù)娜萜髦校囵B(yǎng)基的分裝量按要求進(jìn)行分裝,不得超過(guò)容器的2/3,避免滅菌時(shí)溢出。包扎滅菌時(shí),盛裝培養(yǎng)基容器的塞子必須塞緊,以免塞子松動(dòng)或脫落造成污染。配制好的培養(yǎng)基應(yīng)按說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行煮沸滅菌、濕熱滅菌、過(guò)濾除菌等,具體按檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中的規(guī)定進(jìn)行滅菌。脫水培養(yǎng)基在分裝或滅菌前均應(yīng)完全溶解于水中。所有的培養(yǎng)基對(duì)熱都有或多或少的敏感性,所以培養(yǎng)基需要加熱助溶時(shí),不要過(guò)度加熱,否則會(huì)使培養(yǎng)基的顏色變深,甚至影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。滅菌效果的控制是微生物檢驗(yàn)者面臨的關(guān)鍵問(wèn)題,對(duì)滅菌的效果應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。驗(yàn)證通常采用滅菌指示膠帶或嗜熱脂肪芽孢桿菌進(jìn)行,驗(yàn)證時(shí)按各自說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行操作。

    培養(yǎng)基的使用

    固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化,在加熱的水中或者采用流體蒸汽以及微波爐中進(jìn)行,且只允許融化一次,不可用電爐直接熔化瓊脂培養(yǎng)基,避免營(yíng)養(yǎng)成分過(guò)度受熱而破壞,影響微生物的檢驗(yàn)結(jié)果。固體培養(yǎng)基滅菌或融化后,融化狀態(tài)放置不得超過(guò)8小時(shí),剩余培養(yǎng)基不宜再用。商品化即用型的培養(yǎng)基嚴(yán)格按廠家提供的說(shuō)明書(shū)使用,超過(guò)有效期的培養(yǎng)基不得使用。

    培養(yǎng)基的質(zhì)量驗(yàn)收和質(zhì)量控制

    實(shí)驗(yàn)室購(gòu)買(mǎi)來(lái)后要做培養(yǎng)基的質(zhì)量驗(yàn)收和質(zhì)量控制,食品微生物用培養(yǎng)基按GB 4789.28-2013做質(zhì)量驗(yàn)收和控制;藥品檢驗(yàn)用培養(yǎng)基應(yīng)按《中國(guó)藥典》2015年版四部做培養(yǎng)基的適用性檢查,驗(yàn)收和質(zhì)量控制合格后方可使用。

    菌種的保藏、傳代、管理的控制

    實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立菌種的保藏、傳代、管理的控制程序,在實(shí)際的工作中應(yīng)按本實(shí)驗(yàn)室制定的程序執(zhí)行。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)盡可能減少菌種污染和生長(zhǎng)特性的改變,按制定的程序定期做好菌種的傳代和保藏以及管理工作,傳代后的菌種要做必要的鑒定或生化實(shí)驗(yàn),確保菌種的生物學(xué)特性和純度。

    標(biāo)準(zhǔn)貯備菌株一般保存在-70 ℃超低溫冰箱中,這樣可以延長(zhǎng)菌種保存的時(shí)間,避免頻繁傳代造成菌株的變異。標(biāo)準(zhǔn)菌株是用來(lái)制備工作菌株的,冷凍菌種一旦解凍轉(zhuǎn)種制備工作菌株后,不得重新冷凍和再次使用。為此實(shí)驗(yàn)室最好采用小體積的凍存管來(lái)制備標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株,每支保證一次的使用量即可。

    實(shí)驗(yàn)室工作菌株的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制,《中國(guó)藥典》四部規(guī)定不得超過(guò)5代,以防止過(guò)度的傳代增加菌種變異的風(fēng)險(xiǎn)。工作菌株不可替代標(biāo)準(zhǔn)菌株,標(biāo)準(zhǔn)菌株如果經(jīng)過(guò)確認(rèn)試驗(yàn)證明已經(jīng)老化、退化、變異、污染等或該菌株已無(wú)使用需要時(shí),應(yīng)及時(shí)滅菌銷(xiāo)毀。菌種必須定期轉(zhuǎn)種傳代,并做純度、特性等實(shí)驗(yàn)室所需關(guān)鍵指標(biāo)的確認(rèn),并及時(shí)做好記錄。

    實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備的控制

    設(shè)備的維護(hù)

    為保證儀器設(shè)備處于良好工作狀態(tài),應(yīng)定期對(duì)其進(jìn)行維護(hù)和性能驗(yàn)證。微生物實(shí)驗(yàn)室用到的重要的儀器設(shè)備,如培養(yǎng)箱、冰箱等,實(shí)驗(yàn)室要指定人員負(fù)責(zé)進(jìn)行維護(hù)與保管,確保設(shè)備運(yùn)行狀態(tài)正常且受控。微生物實(shí)驗(yàn)室用到的特殊設(shè)備如高壓鍋、隔離器、生物安全柜等,操作人員要經(jīng)過(guò)專業(yè)培訓(xùn)后方可上崗操作。培養(yǎng)箱、冰箱、高壓鍋等影響實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性的關(guān)鍵設(shè)備要在其運(yùn)行使用過(guò)程中對(duì)其關(guān)鍵參數(shù)如溫度、壓力進(jìn)行連續(xù)觀測(cè)和記錄,以免造成檢驗(yàn)結(jié)果偏差。另外,實(shí)驗(yàn)室還應(yīng)定期做好一些容易污染微生物的儀器設(shè)備如水浴鍋、培養(yǎng)箱、冰箱和生物安全柜的清潔和消毒。

    校準(zhǔn)和使用檢測(cè)

    微生物實(shí)驗(yàn)室所用的儀器應(yīng)根據(jù)日常使用的情況進(jìn)行定期的校準(zhǔn),并記錄和做必要的評(píng)定。微生物培養(yǎng)的溫度不但對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有直接的影響,還對(duì)儀器設(shè)備的正常運(yùn)轉(zhuǎn)和正確操作起關(guān)鍵作用。相關(guān)的溫度測(cè)量裝置如培養(yǎng)箱和高壓滅菌器中的溫度計(jì)、熱電耦和鉑電阻溫度計(jì),應(yīng)具有可靠的質(zhì)量并進(jìn)行定期校準(zhǔn),以確保所需的精確度,溫度設(shè)備的校準(zhǔn)應(yīng)遵循國(guó)家和國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)。

    稱量設(shè)備

    天平、重量稀釋器和標(biāo)準(zhǔn)砝碼應(yīng)定期進(jìn)行校準(zhǔn),天平、重量稀釋器使用過(guò)程應(yīng)采用標(biāo)準(zhǔn)砝碼進(jìn)行校準(zhǔn),以確保稱量的準(zhǔn)確性。每次使用完后應(yīng)及時(shí)清潔,必要時(shí)用非腐蝕消毒劑進(jìn)行消毒。

    容量測(cè)定設(shè)備

    容量測(cè)定設(shè)備如移液槍、移液管等應(yīng)進(jìn)行檢定或校準(zhǔn),以確保儀器準(zhǔn)確度。對(duì)于一次性使用的容量設(shè)備,實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該從具有相關(guān)質(zhì)量保證的公司購(gòu)買(mǎi)。購(gòu)進(jìn)后對(duì)儀器適用性進(jìn)行驗(yàn)證,要對(duì)其精密度隨時(shí)進(jìn)行檢查。必要時(shí)應(yīng)該對(duì)每批購(gòu)進(jìn)的定容設(shè)備進(jìn)行適用性檢查。

    實(shí)驗(yàn)環(huán)境的控制

    微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具有進(jìn)行微生物檢測(cè)所需的適宜、充分的設(shè)施條件,實(shí)驗(yàn)環(huán)境應(yīng)不影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)專用,工作服區(qū)域與辦公區(qū)域應(yīng)分開(kāi)。

    微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)制定完整的潔凈室(區(qū))和環(huán)境監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程,環(huán)境監(jiān)測(cè)項(xiàng)目和監(jiān)測(cè)頻率及對(duì)超標(biāo)結(jié)果的處理要有書(shū)面程序。監(jiān)測(cè)項(xiàng)目包括對(duì)空氣懸浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物、溫度、相對(duì)濕度、換氣次數(shù)、氣流速度、壓差、噪聲等的有效控制和監(jiān)測(cè)。

    微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定清潔、消毒的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程,實(shí)驗(yàn)室在每次實(shí)驗(yàn)使用前和使用后應(yīng)進(jìn)行消毒,并做好記錄。

    實(shí)驗(yàn)結(jié)果的正確分析判斷

    影響微生物實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素

    因?yàn)槲⑸餀z驗(yàn)工作比較特殊,它的檢驗(yàn)對(duì)象都是一些活的微生物,再加上受到外界影響因素也比較多,因此檢驗(yàn)結(jié)果分析也是比較困難的。在日常檢驗(yàn)工作中影響因素主要如下:①微生物存在的廣泛性,它在自然界中普遍存在如空氣、水、土壤等;②采集和實(shí)驗(yàn)人員在樣品處理過(guò)程或其他操作步驟中樣品可能有微生物污染;③采樣人員在樣品的運(yùn)輸過(guò)程中未嚴(yán)格按樣品的貯存要求貯藏樣品,造成微生物的繁殖或者死亡;④微生物在樣品或環(huán)境中分布不均勻以及微生物在原料、輔料或試驗(yàn)環(huán)境中存活的可能性。這些原因很有可能造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的誤差大和重現(xiàn)性差。因此,實(shí)驗(yàn)室在檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)盡最大程度地避免被檢樣品的污染。對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果要進(jìn)行全面的分析,在檢驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果不符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定,應(yīng)進(jìn)行原因調(diào)查。

    微生物實(shí)驗(yàn)室對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行客觀全面的分析十分重要

    異常結(jié)果出現(xiàn)時(shí),應(yīng)進(jìn)行偏差調(diào)查。調(diào)查時(shí)應(yīng)考慮的因素如下:實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境、抽樣過(guò)程中樣品的貯存條件、抽樣區(qū)的防護(hù)條件以及本樣品以往的檢驗(yàn)情況等等,都要進(jìn)行一一排查。找出問(wèn)題,對(duì)癥解決最終報(bào)告一個(gè)準(zhǔn)確的結(jié)果。

    以上是筆者多年來(lái)對(duì)做好微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的一些認(rèn)識(shí)。總而言之,微生物檢驗(yàn)整個(gè)過(guò)程十分繁瑣,影響因素眾多,要做好質(zhì)量控制在日常工作中就要不怕麻煩、嚴(yán)謹(jǐn)細(xì)致,嚴(yán)格按所制定的程序操作。工作中發(fā)現(xiàn)問(wèn)題多思考,多方位尋找問(wèn)題產(chǎn)生的根源,最終解決問(wèn)題是做好微生物質(zhì)量控制的根本。

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