應用于轉基因食品檢測的PCR技術及其進展研究

近幾年，我國轉基因食品在隨著社會發(fā)展的過程中也在不斷的發(fā)展，其中食品檢測的PCR技術也在快速的發(fā)展當中。轉基因食品檢測是通過蛋白質和外源DNA兩種有效的生物大分子進行著手，通過PCR（聚合酶鏈式反應）和ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測定）以及生物芯片技術。對目前常用的PCR技術進行分析和探究能夠發(fā)現(xiàn)其中的優(yōu)缺點。在現(xiàn)階段的轉基因食品檢測環(huán)節(jié)合理的適用檢測技術能夠對最終的檢測效果精準性有很重大的現(xiàn)實意義。

PCR檢測技術

PCR檢測技術又稱為“聚合酶鏈式反應技術”。該技術能夠完成在體外實現(xiàn)指定基因和DNA序列進行迅速的擴增，此技術最早應用在基因克隆和檢測轉基因環(huán)節(jié)中，以其精準和微量的特性，一直被研究學領域廣泛應用?，F(xiàn)階段，隨著社會的不斷發(fā)展以及科技的不斷進步，人們對食物微生物遺傳性質也在不斷深入和了解，認識和掌握了大部分的致病菌其遺傳的基本條件，PCR技術逐漸被人們所關注并且給予了高度的重視，將其應用在轉基因視頻檢測過程中?，F(xiàn)階段,轉基因食品檢測的PCR技術主要是用于檢測食品當中的成分類別、有益成分、致病菌以及我們的轉基因食品，例如大豆、玉米、番茄等。然而傳統(tǒng)時期的PCR技術隨著社會的發(fā)展會在使用的過程中出現(xiàn)一定的缺點或者是短板，例如當食品中有細菌體存在的時候，該技術會因為假陽性現(xiàn)或者是致毒微生物所產(chǎn)生的病毒并不會被完全的檢測發(fā)現(xiàn)等。

轉基因食品檢測的PCR技術改進發(fā)展

實時定量PCR技術實時定量PCR技術實質上是指將熒光基團加入到PCR整體反應系統(tǒng)中，利用對熒光信號的積累，實現(xiàn)整個PCR過程中的實時檢測，最終通過非常標準的曲線進行未知模板的定量。該技術是通過封閉的環(huán)境下實施檢測工作的，通過該技術能夠使熒光激光的光源處平穩(wěn)同時不會產(chǎn)生太多的干擾，通過PCR技術能夠不需要再度進行處理，能夠最大化的降低交叉感染的機率；該技術在未來的食品檢測過程中能夠縮短整體檢測周期的同時能夠降低操作難度，能夠實現(xiàn)檢測結果的準確性以及特異性。該技術的不斷發(fā)展和進步能夠對轉基因食品加工時檢測外源DNA受到污染的及時定量，同時能夠檢測病原微生物、檢測出食品中摻假量和轉基因食品檢測等多方面都起到良好的促進性作用。

多重PCR技術多重PCR技術又稱之為“復合PCR”，是通過單一形式的PCR技術作為基礎進行改善得到的一種延展性技術，通過將多條引物和多條模板進行混合再加入到一個綜合性的反應系統(tǒng)內(nèi)，將傳統(tǒng)單一的DNA模板加入到同一個反應系統(tǒng)內(nèi)，實現(xiàn)對相同的模板進行不同片段的擴增性處理，用該技術實現(xiàn)超長片段的擴增?，F(xiàn)階段，食品中轉基因成分檢測最困難的挑戰(zhàn)便是對于轉基因生物數(shù)量進行的激增過程。目前唯有美國實現(xiàn)了大量轉基因作物品種的生產(chǎn)。若想從根本解決這一問題，就要在一定的條件下應用多重PCR技術，其基本原理看似簡單，但能夠找到合適的擴增條件卻是在多重PCR技術中最為關鍵且存在一定困難性的。將多重PCR技術和傳統(tǒng)的PCR技術進行比較可以看出，多重PCR技術更加系統(tǒng)化并且較傳統(tǒng)PCR技術簡單便捷。

PCR-DGGE技術PCR-DGGE 技術是實現(xiàn)將變性梯度凝膠電泳技術和傳統(tǒng)的PCR技術相結合的一種新型技術。PCR-DGGE 技術能夠將兩個或者多個相同長度不同堿基的DNA片段進行混合物的分離。通過變性條件允許的情況下，將二者關聯(lián)在一起，PCR-DGGE 技術就能夠對另一種堿基進行辨別，該技術的特異性和敏感性超強。通過成像體系對凝膠染色后進行進一步的分析。能夠在一定的程度和基礎上顯示出整體樣品的復雜繁瑣性。同時，實現(xiàn)整體樣品中存在的不同生物組通過不同的條帶數(shù)量準確的反應出來，條帶的亮度便是微生物的數(shù)量。PCR-DGGE 技術所含有的自身優(yōu)點和特異性能夠為未來轉基因食品檢測帶來非常重大的改變及影響。

轉基因食品的多重PCR檢測多重PCR檢測，又被稱為復合PCR檢測。多重PCR檢測是在同一PCR反應體系里加上二對以上引物，同時擴增出多個把序列的PCR反應。在對其反應原理進行分析時，可以對一般PCR進行查看，將一般PCR作為參考依據(jù)。在對轉基因食品進行檢測時，面臨的最大挑戰(zhàn)就是轉基因生物數(shù)量不斷增多。FDA公布了一個資料，美國經(jīng)過批準投入生產(chǎn)的轉基因作物品種已經(jīng)超過了五十個，這五十多個轉基因作物品種被投入到商業(yè)化生產(chǎn)之中。當前國內(nèi)外的很多實驗室都在研發(fā)轉基因產(chǎn)品的檢測技術，在尋找同時檢測多個轉基因產(chǎn)品的有效路徑。MPCR檢測技術的應用比較普遍，但是其使用難度比較大，需要尋找合適的擴增條件。就目前來看，MPCR技術被廣泛應用在多種轉基因作物的檢測之中，定量檢測和定性檢測效果都比較好。近年來超分支滾環(huán)擴增技術也被應用在轉基因產(chǎn)品的檢測之中，同樣收獲了事半功倍的檢測效果。與MPCR技術相比，超分支滾環(huán)擴增技術具有一定的優(yōu)勢：一方面，超分支滾環(huán)擴增技術只需要一對引物就可以完成對多個轉基因產(chǎn)品的檢測。另一方面，超分支滾環(huán)擴增技術可以避免引物之間的干擾問題，提高轉基因產(chǎn)品的檢測效率。因此在對轉基因食品進行檢測時，應該綜合分析現(xiàn)實情況，采用適宜的檢測技術。

近年來，隨著我國經(jīng)濟的不斷發(fā)展和變化，國家對食品安全問題越來越重視。PCR技術在我國轉基因食品的檢測中體現(xiàn)了極高的優(yōu)勢，隨著市場中出現(xiàn)大量的轉基因食品，對轉基因食品檢測的精準性和實效性的基礎上又提出了新的要求和標準。為了順應市場發(fā)展合理的對轉基因食品進行監(jiān)控，尋求新型便捷、靈敏、精準、高通量的食品檢測技術將成為新的發(fā)展趨勢和方向。