小麥中真菌毒素的快速檢測(cè)技術(shù)

□ 趙麗杰 西安市糧油質(zhì)量檢驗(yàn)中心

1 以往真菌毒素檢測(cè)方法存在的問題及真菌毒素造成的影響

真菌毒素是指曲霉、鐮刀菌、展青霉等真菌生長(zhǎng)發(fā)育過程中產(chǎn)生的有毒次級(jí)代謝產(chǎn)物，目前已經(jīng)為人們所知的就達(dá)到了400多種。真菌毒素通過對(duì)糧食、果蔬的污染，可通過飲食進(jìn)入人和家畜體內(nèi)，引起人和家畜的急性或慢性中毒，進(jìn)而損害肝臟、腎臟及神經(jīng)組織等[1]。真菌毒素對(duì)人類和家畜健康造成的嚴(yán)重危害，引起世界范圍內(nèi)各個(gè)國家對(duì)真菌毒素污染問題的重視?，F(xiàn)階段至少已經(jīng)有超過100個(gè)國家對(duì)糧食中真菌毒素的限量作出了明確的規(guī)定，隨著各個(gè)國家把食品中真菌毒素的限量作為強(qiáng)制性規(guī)定，真菌毒素檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展速度得到了大幅度提升。

高效液相色譜檢測(cè)法具有分辨率高、準(zhǔn)確性好、靈敏度高、檢測(cè)限低等優(yōu)點(diǎn)，是以往一段時(shí)間中小麥真菌毒素含量檢測(cè)最為廣泛應(yīng)用的研究方法，搭配上合適的檢測(cè)器，基本上可以對(duì)各種真菌毒素進(jìn)行檢測(cè)。但是此方法實(shí)際應(yīng)用的過程當(dāng)中，首先需要在樣品當(dāng)中進(jìn)行提取，其次要經(jīng)免疫親和柱凈化，操作相對(duì)來說比較復(fù)雜，檢測(cè)周期也比較長(zhǎng)，特別是液相色譜條件的選擇以及標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液的配制，會(huì)對(duì)檢測(cè)人員的專業(yè)技術(shù)水平及實(shí)際工作經(jīng)驗(yàn)提出比較高的要求，也會(huì)對(duì)生態(tài)環(huán)境穩(wěn)定性以及檢測(cè)人員的人身安全造成一定影響[2]。

真菌毒素對(duì)農(nóng)作物及食品的影響，首先展現(xiàn)出的是不均勻性，真菌毒素在農(nóng)作物當(dāng)中的分布并不是十分均勻。其次是低水平，農(nóng)作物當(dāng)中平均真菌毒素含量一般都比較低。再次是真菌毒素種類相對(duì)來說比較多，一種菌在生長(zhǎng)發(fā)育的過程中有可能產(chǎn)生各種類型的毒素，比方：禾谷鐮刀菌可以產(chǎn)生玉米赤霉烯酮以及T-2毒素等，同種毒素也有可能是不同種類菌產(chǎn)生的。最終一個(gè)問題是，受到污染的食品基質(zhì)構(gòu)成成分十分復(fù)雜，比方谷物當(dāng)中包含難以溶解的纖維及脂肪，也包含大量的色素及蛋白質(zhì)等物質(zhì)，因此想要在正式開始檢測(cè)之前完成提純工作，是一件十分困難的事情。

2 小麥真菌毒素含量快速檢測(cè)技術(shù)概述

2.1 真菌毒素替代物

真菌毒素的獲取相對(duì)來說比較困難，價(jià)格也非常高，并且黃曲霉毒素等對(duì)人體的危害非常嚴(yán)重，因此研究人員希望可以找尋到模擬器反應(yīng)原性，也可以當(dāng)成真菌毒素檢測(cè)領(lǐng)域中的真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)替代品?，F(xiàn)階段已經(jīng)研發(fā)出的替代品是

獨(dú)特型抗體?？贵w可變區(qū)除去展現(xiàn)出抗體活性之外，還有獨(dú)特的抗原決定簇，展現(xiàn)出抗原的活性，是可以被其他細(xì)胞克隆并識(shí)別的，產(chǎn)生抗獨(dú)特型抗體。Guan等人使用抗AFM抗體的某一片段得到高特異性抗AFM抗獨(dú)特性抗體，和其他黃曲霉毒素之間不會(huì)發(fā)生任何交叉反應(yīng)。以此為基礎(chǔ)構(gòu)建出AFM和獨(dú)特性抗體之間的定量轉(zhuǎn)換公式。替代物標(biāo)準(zhǔn)曲線的半數(shù)抑制濃度是2.4 μg/mL，能夠滿足現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)中提出的要求，因此可以在日后小麥真菌毒素含量快速檢測(cè)工作進(jìn)行的過程中得到應(yīng)用[3]。

2.2 免疫層析法

免疫層析法是以往一段時(shí)間研發(fā)出的一種快速診斷技術(shù)措施，它的工作原理是將特異抗體率先固定在硝酸纖維素膜的某一個(gè)區(qū)域當(dāng)中，將干燥的硝酸纖維素膜一端浸入樣品當(dāng)中之后，在毛細(xì)管的作用之下，樣品就會(huì)沿著膜的方向移動(dòng)，在移動(dòng)到固定著抗體的區(qū)域之后，樣品當(dāng)中相應(yīng)的抗原就會(huì)和此抗體之間發(fā)生特異性結(jié)合，通過免疫膠體金、熒光微球或者免疫霉染色能夠讓此區(qū)域展現(xiàn)出一定顏色，從而實(shí)現(xiàn)特異性免疫診斷這一個(gè)目標(biāo)[4]。

現(xiàn)階段膠體金檢測(cè)技術(shù)在真菌毒素類物質(zhì)檢測(cè)中得到的應(yīng)用較為廣泛，具有成本低、操作難度低以及快速精準(zhǔn)等特征，且得到了我國相關(guān)部門的認(rèn)可。此技術(shù)措施實(shí)際應(yīng)用的過程當(dāng)中，從樣品墊位置上滴上一定量的樣品，等到開始反應(yīng)之后，隨著樣品液體的流動(dòng)，偶聯(lián)抗體的金顆粒就會(huì)流向抗原位置上，在抗原抗體的結(jié)合讓偶聯(lián)的金顆粒聚集到一定數(shù)量之后，就可以構(gòu)成肉眼可見的紅色條帶。在加樣的液體也包含待測(cè)物質(zhì)的情況下，固定在固相載體上的抗原和樣品之間的抗原競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合待測(cè)物抗體，從而使碳酸纖維素膜上聚焦的金顆粒數(shù)量減少，紅色條帶的顏色就會(huì)逐漸變淺，一直到無色，充分利用上文中所說的各種特性，就可以在非常短暫的時(shí)間之內(nèi)將小麥當(dāng)中真菌毒素的含量檢測(cè)出來。

真菌毒素種類多、污染廣、毒性強(qiáng)、危害重，不僅是我國食品安全監(jiān)管的重點(diǎn)，也是世界性的公共安全問題。真菌毒素快速檢測(cè)技術(shù)仍會(huì)繼續(xù)發(fā)展。