DNA輔助識別的西馬特羅分子印跡傳感器

張連明 張東友 曾英 李建平

摘 要 利用DNA改善印跡孔穴對模板分子空間識別性能，建立了高選擇性印跡材料的制備新方法，并用于痕量西馬特羅的測定。在金電極表面自組裝固定雙鏈DNA，待西馬特羅與DNA雙鏈進(jìn)行結(jié)合后，以西馬特羅-DNA復(fù)合物為模板，電聚合制備西馬特羅-DNA復(fù)合物的分子印跡聚合物膜。去除待測分子西馬特羅，得到對西馬特羅具有高特異性識別能力的分子印跡傳感器。對傳感器制備及工作條件進(jìn)行了優(yōu)化，利用紫外吸收光譜對西馬特羅與DNA的結(jié)合方式進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，二者之間的相互作用模式為溝槽式結(jié)合。印跡膜以乙醇-乙酸（8∶1，V/V）為洗脫劑，洗脫時(shí)間為35 min，重吸附時(shí)間為45 min。以鐵氰化物作為探針，其氧化電流與西馬特羅濃度在1.0 × 1013～1.0 × 1010 mol/L范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，檢出限為3.2×1014 mol/L（S/N=3）。將傳感器成功應(yīng)用于豬肉樣品中西馬特羅的檢測，結(jié)果良好。

關(guān)鍵詞 分子印跡； 西馬特羅； 電化學(xué)傳感器； DNA； 選擇性識別

1 引 言

西馬特羅（Cimaterol，CIM）是繼萊克多巴胺、沙丁胺醇和克倫特羅之后的新型“瘦肉精”[1]。因西馬特羅可以減少胴體脂肪含量，促進(jìn)家畜生長，改變?nèi)赓|(zhì)，經(jīng)常被非法加入到肉畜飼料中[2]。長期大量使用西馬特羅會使其在動物組織內(nèi)積累殘留，造成食用者中毒，產(chǎn)生目眩、惡心、嘔吐、心率加快等癥狀，嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡[3]。我國農(nóng)業(yè)部公告第193號文件明確規(guī)定西馬特羅禁止在畜禽生產(chǎn)中使用[4]?，F(xiàn)有的檢測動物組織中西馬特羅的方法主要有氣相色譜-質(zhì)譜法[5，6]、高效液相色譜法[7，8]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[9，10]、酶免疫分析法[11，12]和毛細(xì)管電泳法[13，14]等。但是，這些方法均存在一定的缺陷，如樣品前處理繁瑣、檢測耗時(shí)過長、樣品中組份對分析干擾較大等[15]。因此，發(fā)展操作簡便、靈敏度高、選擇性好、無需復(fù)雜前處理過程的西馬特羅殘留檢測方法具有重要意義。

分子印跡聚合物（MIPs）是一類對目標(biāo)分子具有專一性識別能力并具有記憶功能的聚合物[16～18]。雖然各種瘦肉精分子印跡聚合物已見報(bào)道[15，19]，但是，這些分子印跡聚合物由于印跡孔穴識別單元種類和數(shù)量不多， 尚不能對結(jié)構(gòu)相近、官能團(tuán)相似的瘦肉精分子作有效地分辨[20]。因此，提高印跡聚合物材料的專一性識別能力，發(fā)展高特異性西馬特羅識別方法很有必要。

DNA由于其特殊鏈狀結(jié)構(gòu)及含有豐富的活性基團(tuán)已被廣泛應(yīng)用于分子識別領(lǐng)域。Nicholas等[21]利用單鏈DNA（ssDNA）與蛋白質(zhì)之間的結(jié)合作用，制備了蛋白質(zhì)分子印跡聚合物。Li等[22]以林可霉素分子為靶物質(zhì)，在堿基庫中篩選出對其具有高親和性的適配體，以適配體-林可霉素復(fù)合物為模板分子電聚合于石墨烯表面，發(fā)展了一種適配體-分子印跡傳感器制備方法，該方法借助ssDNA的基團(tuán)增加印跡膜的識別位點(diǎn)可以增強(qiáng)MIPs的識別能力，然而，印跡孔穴內(nèi)模板分子空間排列的立體選擇性并沒有得到有效改善。研究表明，不同堿基互補(bǔ)可以形成不同的雙鏈DNA（dsDNA）溝槽結(jié)構(gòu)，生物分子可以嵌入dsDNA的溝槽[23，24]，這種結(jié)合方式對生物分子在印跡孔穴中的空間排列可提供構(gòu)象選擇性。

本研究將dsDNA與有機(jī)分子溝槽結(jié)合產(chǎn)生的構(gòu)象選擇性引入分子印跡聚合物材料的制備，以進(jìn)一步提高印跡聚合物的專一性識別能力。以西馬特羅為目標(biāo)分子，通過AuS鍵將dsDNA固定在金電極表面，待 dsDNA與西馬特羅分子結(jié)合后，以復(fù)合物為模板，電聚合形成分子印跡聚合物。去除西馬特羅后，得到與西馬特羅在作用位點(diǎn)、結(jié)構(gòu)及3D構(gòu)象相匹配互補(bǔ)的印跡孔穴，據(jù)此對西馬特羅進(jìn)行高選擇性識別； 采用鐵氰化物作為探針，實(shí)現(xiàn)西馬特羅的定量測定。識別機(jī)理如圖1所示。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器與試劑

PGSTAT 128N Autolab電化學(xué)工作站（瑞士萬通有限公司），采用三電極系統(tǒng)：工作電極為DNA/MIPs修飾金電極（Φ=3 mm），Ag/AgCl（飽和KCl）電極作為參比電極，鉑絲電極作為對電極； UV-2400PC紫外-可見分光光度計(jì)（日本島津公司）； S4800場發(fā)射掃描電子顯微鏡（日本日立有限公司）。

西馬特羅（CIM）、鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺、班布特羅、馬布特羅、西布特羅、溴布特羅標(biāo)準(zhǔn)品（德國Witega Laboratorien公司）； DNA序列（ssDNA序列為：AGAGAG-C6-3′-SH，互補(bǔ)DNA序列為：SH-5′-C6-CTCTCT）由上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成，使用時(shí)用TE緩沖液（10.0 mmol/L Tris-HCl，100.0 mmol/L NaCl，1.0 mmol/L EDTA，pH 8.0）配制和稀釋； 0.1 mol/L HCl，乙醇-乙酸混合液（8∶1，V/V）、 乙酸乙酯、 10% Na2CO3溶液、 Tris-HCl緩沖溶液（0.24 mol/L HCl，0.002 mol/L Tris，pH 7.47）、 0.05 mol/L 三（2-甲酰乙基）膦鹽酸鹽（TCEP）、 鄰苯二胺（o-PD，Aladdin公司）。探針分子溶液是含有0.1 mol/L KCl的0.05 mol/L K4[Fe（CN）6]/K3[Fe（CN）6]溶液，若無特殊說明，所用試劑均為分析純。實(shí)驗(yàn)用水均為二次去離子水。

2.2 DNA/MIPs、DNA/nMIPs及常規(guī)印跡傳感器的制備

將金電極用氧化鋁粉在麂皮上打磨至鏡面。將ssDNA與其互補(bǔ)鏈分別取出解凍10 min并離心， 用TE緩沖液溶解，并用TCEP溶液進(jìn)行活化1 h后得到1.0×105 mol/L ssDNA及互補(bǔ)鏈（TCEP活化的目的是將巰基修飾的ssDNA之間自然形成的雙硫鍵斷開，便于AuS鍵結(jié)合）。將金電極浸入ssDNA溶液2 h，使ssDNA通過AuS鍵結(jié)合于金電極表面，將上述修飾電極浸入互補(bǔ)DNA鏈溶液2 h， 得到雜交后的dsDNA修飾金電極。將修飾dsDNA的金電極置于4.6×105 mol/L西馬特羅溶液中孵育3.5 h， 使西馬特羅與dsDNA結(jié)合。以1.0×104 mol/L 鄰苯二胺為功能單體，電聚合制備得到印跡聚合物膜（循環(huán)伏安掃描電位范圍：0～0.8 V，掃描速率為0.05 V/s，掃描圈數(shù)為25）。以乙醇-乙酸（8∶1， V/V）為洗脫液，將上述修飾電極置于洗脫液中輕微攪拌35 min， 除去西馬特羅，得到對西馬特羅具有特異性識別能力的DNA/MIPs傳感器。利用相同方法制備了非分子印跡修飾電極（DNA/nMIPs傳感器，制備過程中不添加西馬特羅）及常規(guī)分子印跡傳感器（MIPs傳感器，制備過程中不添加DNA）。

2.3 實(shí)驗(yàn)方法

將傳感器置于不同濃度的西馬特羅溶液中重吸附45 min后檢測。在含有0.1 mol/L KCl的0.05 mol/L K4[Fe（CN）6]/K3[Fe（CN）6]的探針溶液中，考察傳感器的電化學(xué)性能。差分脈沖伏安法（DPV）參數(shù)為：初始電位0.2 V，終止電位+0.6 V，振幅0.05 V，掃速50 mV/s。交流阻抗法（EIS）頻率范圍為100 mHz～100 kHz，振幅為5 mV。

2.4 樣品處理

豬肉樣品購于本地超市， 按農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)方法（NY/T 486-2006）處理[25]。取5 mL乙酸乙酯和0.6 mL 10% Na2CO3加入1.0 g磨碎的樣品攪拌均勻，經(jīng)3500 r/min離心，收集有機(jī)層，重復(fù)操作并收集提取液，待測。

3 結(jié)果與討論

3.1 自組裝時(shí)間及雜交時(shí)間的選擇

考察了ssDNA自組裝時(shí)間（圖2，曲線a）及互補(bǔ)DNA雜交時(shí)間（圖2，曲線b）對電極電化學(xué)響應(yīng)信號強(qiáng)度的影響。當(dāng)ssDNA濃度為1.0×105 mol/L時(shí)，響應(yīng)信號隨自組裝時(shí)間延長而明顯降低，

當(dāng)自組裝時(shí)間超過120 min后，響應(yīng)信號強(qiáng)度趨于穩(wěn)定，表明自組裝過程達(dá)到飽和。將上述修飾電極置于1.0×105 mol/L互補(bǔ)鏈溶液中進(jìn)行孵育雜交，隨著雜交時(shí)間延長，響應(yīng)信號強(qiáng)度逐漸下降，于120 min后趨于穩(wěn)定。因此選擇自組裝時(shí)間及雜交時(shí)間均為120 min。

3.2 dsDNA與西馬特羅相互作用研究

利用紫外-可見吸收光譜法研究了西馬特羅與dsDNA之間的相互作用。作用時(shí)間對CIM-dsDNA復(fù)合物形成的影響如圖3A所示，修飾電極響應(yīng)信號強(qiáng)度隨著孵育時(shí)間的延長而顯著降低，表明隨著孵育時(shí)間延長，越來越多的西馬特羅與dsDNA結(jié)合，當(dāng)孵育時(shí)間達(dá)到210 min后， 西馬特羅的結(jié)合量達(dá)到飽和，響應(yīng)信號強(qiáng)度趨于穩(wěn)定。因此，后續(xù)實(shí)驗(yàn)選擇西馬特羅與dsDNA的作用時(shí)間為210 min。 以Tris-HCl為緩沖液，分別研究了1.2 × 107mol/L西馬特羅溶液、1.2 × 107 mol/L dsDNA溶液及1.2 × 107 mol/L 西馬特羅-dsDNA復(fù)合物溶液的吸收光譜（圖3B）。結(jié)果表明，西馬特羅在320 nm處有明顯的紫外吸收，而dsDNA在290 nm處有最大吸收，西馬特羅與dsDNA相互結(jié)合后，西馬特羅-dsDNA （CIM-dsDNA） 復(fù)合物最大吸收波長位于320 nm，同時(shí)其最大吸收峰強(qiáng)度明顯增強(qiáng)，表明dsDNA與西馬特羅通過弱作用力相互結(jié)合，無新官能團(tuán)產(chǎn)生。上述結(jié)論與文獻(xiàn)[26]相同。

3.3 聚合條件的選擇

以洗脫效果、印跡膜穩(wěn)定性及識別效果為考察標(biāo)準(zhǔn)，利用DPV研究了聚合物底液中模板分子西馬特羅與功能單體（鄰苯二胺）的配比、掃描速率和電聚合掃描圈數(shù)的影響。掃速及掃描圈數(shù)直接影響印跡膜的厚度及致密度，進(jìn)而影響洗脫效果及識別效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在1.0 × 105 mol/L ssDNA、1.0 × 105 mol/L互補(bǔ)鏈及4.6 × 105mol/L西馬特羅條件下，使用1.0 × 104 mol/L o-PD作為功能單體、掃描速率為0.05 mV/s、電聚合掃描圈數(shù)為25圈時(shí)，傳感器對目標(biāo)分子響應(yīng)效果最佳。

3.4 DNA/MIPs及DNA/nMIPs傳感器對西馬特羅的響應(yīng)

為驗(yàn)證DNA/MIPs傳感器對西馬特羅的識別響應(yīng)，對傳感器制備過程中的電化學(xué)性能進(jìn)行了研究。如圖4A所示，裸金電極（曲線a）具有良好的導(dǎo)電性，而dsDNA（曲線b）及西馬特羅-dsDNA復(fù)合物（曲線c）在電極表面組裝后，修飾電極響應(yīng)信號強(qiáng)度隨修飾物的增加而減弱。繼續(xù)聚合一層致密的聚o-PD層后，由于聚合物層的存在， 嚴(yán)重阻礙了電子的傳遞，響應(yīng)信號強(qiáng)度急劇下降（曲線d）。洗脫西馬特羅后，印跡孔穴可以作為電子傳遞的通道，響應(yīng)信號增強(qiáng)（曲線e）； 當(dāng)重吸附不同濃度西馬特羅后，西馬特羅重新占據(jù)印跡孔穴通道而阻礙電子傳遞，響應(yīng)信號強(qiáng)度隨西馬特羅濃度增加而降低（曲線f和曲線g）。上述結(jié)果表明，本方法制備的印跡材料能夠識別西馬特羅。

為了進(jìn)一步證明上述結(jié)論，利用交流阻抗法對上述過程進(jìn)行了研究（圖4B），當(dāng)dsDNA-西馬特羅復(fù)合物修飾在裸金電極表面后（曲線b），其阻抗值較裸電極（曲線a）明顯增加，聚合后，由于存在致密的、導(dǎo)電性差的聚合物膜，阻礙了電子的傳遞過程， 因此敏感膜阻抗值較CIM-dsDNA修飾電極明顯增大（曲線c）； 洗脫目標(biāo)分子后，由于印跡孔穴可以作為電子傳遞的通道，因此阻抗值降低（曲線d），而重吸附西馬特羅后，印跡孔穴通道被堵塞，敏感膜阻抗值增加（曲線e）。綜上，本方法制備得到的印跡聚合物材料對西馬特羅有識別能力，所得結(jié)論與DPV響應(yīng)結(jié)論一致。

為了排除物理吸附的干擾，研究了非分子印跡膜DNA/nMIPs傳感器對目標(biāo)分子西馬特羅的識別能力。如圖4C所示，將dsDNA修飾在電極表面后，探針分子響應(yīng)明顯（曲線a）。電聚合后，由于致密的聚合物膜存在，修飾電極響應(yīng)信號強(qiáng)度急劇降低（曲線b），而洗脫后，修飾電極響應(yīng)信號強(qiáng)度無較大變化（曲線c），重吸附西馬特羅后，修飾電極響應(yīng)信號強(qiáng)度仍無明顯變化（曲線d），這是因?yàn)榫酆线^程中未加入西馬特羅，因此洗脫后無任何印跡孔穴產(chǎn)生，即不會產(chǎn)生探針分子到達(dá)電極表面的通道，因而響應(yīng)信號基本無變化。重吸附后，西馬特羅不能穩(wěn)定存在于敏感膜表面，因此響應(yīng)信號無明顯變化。上述研究表明DNA/nMIPs修飾電極對西馬特羅無任何響應(yīng)。

3.5 分子印跡聚合物膜形貌表征

利用掃描電鏡（SEM）對金電極表面電聚合制備的dsDNA/MIPs敏感膜進(jìn)行了形貌分析，如圖5所示，電極表面的分子印跡膜覆蓋較為完整，分布較為致密。

3.6 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化

綜合考慮洗脫效果、印跡材料穩(wěn)定性、 DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的影響等因素，分別以乙醇、甲醇、二甲亞砜、乙酸、HNO3-H2O混合液（1∶1，V/V）、乙醇-乙酸混合液（8∶1，V/V）、甲醇-乙酸混合液（8∶1，V/V）作為洗脫劑， 考察洗脫效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，以乙醇-乙酸混合液（8∶1，V/V）作為洗脫液，洗脫時(shí)間較短，對印跡膜的穩(wěn)定性影響最小。同時(shí)，隨著洗脫時(shí)間延長，傳感器響應(yīng)信號強(qiáng)度逐漸增大，表明越來越多的目標(biāo)分子被洗脫，當(dāng)洗脫時(shí)間超過35 min后，傳感器響應(yīng)信號強(qiáng)度不再變化，并趨于穩(wěn)定，因此選擇最佳洗脫時(shí)間為35 min。

傳感器對西馬特羅的識別過程中，不僅要滿足dsDNA對其的構(gòu)象識別，同時(shí)也要滿足印跡孔穴對其結(jié)構(gòu)、大小及作用位點(diǎn)的互補(bǔ)識別?？疾炝酥匚綍r(shí)間對識別4.6× 1010 mol/L西馬特羅的影響，結(jié)果表明，隨著重吸附時(shí)間延長，傳感器響應(yīng)信號強(qiáng)度逐漸降低，并于45 min后趨于穩(wěn)定，表明西馬特羅與dsDNA的結(jié)合及印跡孔穴的結(jié)合達(dá)到飽和。因此選擇重吸附飽和時(shí)間為45 min。

3.7 傳感器對西馬特羅的分析性能

在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，考察了傳感器對不同濃度的西馬特羅溶液響應(yīng)情況（圖6）。西馬特羅的濃度在1.0×1013～1.0×1010 mol/L范圍內(nèi)，隨著濃度增大，傳感器響應(yīng)信號強(qiáng)度逐漸降低，且傳感器響應(yīng)信號強(qiáng)度與西馬特羅濃度呈線性關(guān)系，線性方程為Δi（μA）=9.255lgC-87.47，相關(guān)系數(shù)r=0.9960， 檢出限（3S/K）為3.2×1014 mol/L （0.007 ng/L）。與已報(bào)道方法相比，本方法具有較高的靈敏度（表1）。

3.10 實(shí)際樣品分析

按照2.4節(jié)的方法對豬肉樣品進(jìn)行處理，將DNA/MIPs傳感器與樣品待測液孵育45 min，記錄電化學(xué)響應(yīng)信號值。同時(shí)，進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)（樣品2加標(biāo)后超出檢測范圍，經(jīng)稀釋后檢測）。結(jié)果如表2所示，DNA/MIPs傳感器對西馬特羅測定結(jié)果的回收率為94.0%～105.5%，與HPLC法所得結(jié)果一致[31]，表明此傳感器可應(yīng)用于豬肉樣品中西馬特羅檢測。

4 結(jié) 論

將dsDNA-有機(jī)分子的嵌合作用與分子印跡技術(shù)相結(jié)合，以固化分子印跡孔穴內(nèi)模板分子的空間排列，有效提高了分子印跡膜的識別能力。本傳感器構(gòu)建策略適用于可與DNA進(jìn)行溝槽式結(jié)合的有機(jī)分子的分離測定，為食品等復(fù)雜樣品分析檢測提供了一種新方法。

References

1 XU Chuan-Lai， PENG Chi-Fang， HAO Kai， JIN Zheng-Yu， WANG Wu-Kang. Chinese J. Anal. Chem.， 2005， 33（5）： 699-702

胥傳來， 彭池方， 郝 凱， 金征宇， 王武康. 分析化學(xué)， 2005， 33（5）： 699-702

2 SUN Xiao-Liang， LI Xue-Lian， CAO Xu-Min， YANG Yan-Fei， WANG Juan， WANG Shu-Ting， ZHAO Si-Jun. Chinese J. Anal. Chem.， 2017， 45（1）： 124-132

孫曉亮， 李雪蓮， 曹旭敏， 楊艷菲， 王 娟， 王淑婷， 趙思俊. 分析化學(xué)， 2017， 45（1）： 124-132

3 Du X D， Wu Y L， Yang H J， Yang T. J. Chromatogr. A， 2012， 1260（10）： 25-32

4 Bulletin of the Ministry of Agriculture of the People′s Repubic of China No 19.-4-2002. The List of Forbidden Veterinary Durgs and Other Compounds in Foodstuff of Animal Origin

農(nóng)業(yè)部公告， 第193號公告-4-2002， 食品動物禁用的首要及其化合物清單

5 CAI Qin-Ren， WU Jie-Shan， QIAN Zhen-Jie， PENG Yu-Fen， CAI Jie， DU Zhi-Feng. Chinese Journal of Chromatography， 2013， 31（3）： 200-205

蔡勤仁， 吳潔珊， 錢振杰， 彭玉芬， 蔡 杰， 杜志峰. 色譜， 2013， 31（3）： 200-205

6 Hsu R Y， Liao J H， Tien H W， Her G R. J. Mass Spectrom.， 2016， 51（10）： 693-698

7 Sun X， Tang Q， Du X， Xi C， Tang B， Wang G， Zhao H. Food Anal. Method.， 2017， 10（10）： 3239-3246

8 Li J， Zhang Z， Liu X， Yan H， Han S， Zhang H， Cheng J. Food Anal. Method.， 2014， 7（5）： 977-985

9 Suo D C， Zhao G L， Wang P L， Su X O. J. Chromatogr. Sci.， 2013， 52（7）： 604-608

10 Liu Y， Uboh C E， Soma L R， Li X， Guan F， You Y， Chen J W. Anal. Chem.， 2011， 83（17）： 6843-6841

11 Li C， Li Y， Zhang Y， Liu J， Li J， Wu M， Yang Z. Anal. Methods， 2018， 10： 548-553

12 HU Hua-Jun， FU Tao， ZHANG Ming-Zhou， HONG Zhi， CHEN Zong-Lun， LIU Jun. Chinese J. Anal. Chem.， 2010， 38（12）： 1727-1731

胡華軍， 付 濤， 張明洲， 洪 治， 陳宗倫， 劉 軍. 分析化學(xué)， 2010， 38（12）： 1727-1731

13 Fejs I， Varga E， Benkovics G， Darcsi A， Malanga M， Fenyvesi ， Béni S. J. Chromatogr. A， 2016， 1467（10）： 454-462

14 Chen Y， Wang W， Duan J， Chen H， Chen G. Electroanalysis， 2010， 17（8）： 706-712

15 ZHANG Lian-Ming， HUANG Xiao-Yun， ZHANG Ying-Ming， LI Jian-Ping， ZHANG Lan， ZENG Ying. Chinese J. Anal. Chem.， 2016， 44（10）： 1477-1481

張連明， 黃小云， 張英明， 李建平， 張?zhí)m， 曾 英. 分析化學(xué)， 2016， 44（10）： 1477-1481

16 BAI Hui-Ping， WANG Chun-Qiong， CAO Qiu-E. Chinese J. Anal. Chem.， 2017， 45（10）： 1535-1541

白慧萍， 王春瓊， 曹秋娥. 分析化學(xué)， 2017， 45（10）： 1535-1541

17 Zhong C， Yang B， Jiang X， Li J. Curr. Anal. Chem.， 2018， 48（1）： 15-32

18 Li J， Li Y， Zhang Y， Wei G. Anal. Chem. ， 2012， 84（4）： 1888-1893

19 Guo P， Luo Z， Xu X， Zhou Y， Zhang B， Chang R， Fu Q. Food Chem. ， 2017， 217（2）： 628-636

20 Liu G， Liu H，Kadir A. Med. Biol. Eng. Comput.， 2014， 52（9）： 741-747

21 Nicholas W T， Christopher W J， Keith R B. Biotechnol. Porg.， 2006， 22（6）： 1474-1489

22 Li S， Liu C， Yin G， Zhang Q， Luo J， Wu N. Biosens. Bioelectron.， 2017， 91（2）： 687-691

23 Tang Q， Ma G， Zhang W， Yu N. Int. J. Digit. Crime Forensics， 2014， 6（4）： 1-13

24 WU Shang-Rong， JIN Bing， ZHANG Nan， LIU Ying， LIU Xiang-Jun， LI Song-Qing， SHANGGUAN Di-Hua. Chem. J. Chin. Univ.， 2014， 35（10）： 2085-2092

吳尚榮， 金 冰， 張 楠， 柳 影， 劉祥軍， 李松青， 上官棣華. 高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報(bào)， 2014， 35（10）： 2085-2092

25 NY/T 486-2006， Determination of Clenbuterol Hydrochloride in Animal Tissues. Agricultural Industry Standards of the People′s Republic of China

動物組織中鹽酸克倫特羅的測定. 中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn). NY/T 486-2006

26 Bi S， Zhao T， Wang Y， Zhou H， Pang B.Spectrochim. Acta A， 2015， 150（11）： 921-927

27 Chen Y， Wang W， Duan J P， Chen H Q， Chen G N. Electroanalysis， 2005， 17（8）： 706-712

28 Yoon Y K， Woan T N， Karen O， Michael Z. Asian Pac. J. Trop. Med.， 2014， 4（3）： 244-248

29 Liu R， Liu L Q， Song S S， Cui G， Zheng Q K， Kuang H， Xu C L. Food Arg. Immunol.， 2017， 28（4）： 625-638

30 Yang F， Liu Z C， Lin Y H， Chen J， Pang G F， Chen G N. Food Anal. Method.， 2012， 5（1）： 138-147

31 GB/T 22286-2008， Determination of a Variety of β-Agonist Residues in Animal Derived Food. National Standards of the People′s Republic of China

動物源性食品中多種β-受體激動劑殘留量的測定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法. 中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn). GB/T 22286-2008