方氏頭皮針對血管性癡呆大鼠海馬組織中炎性因子IL－6表達的影響＊

黃琳娜 安軍明 田文靜 董 博 白赟軒 趙靖宇 楊曉波

西安市中醫(yī)醫(yī)院針灸科（西安 710001）

隨著人類社會年齡比例的老齡化和腦卒中治療存活率的提高，血管性癡呆（Vascular dementia，VaD）的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，已成為繼阿爾茨海默氏?。ˋlzheimer＇s Disease，AD）后另一大類最常見的癡呆疾病，常導致患者嚴重的記憶和認知功能缺損，不僅給患者造成長期的痛苦，嚴重影響其生活質(zhì)量，也給家庭、社會帶來沉重負擔。但目前臨床治療VaD尚缺乏行之有效的方法，筆者長期的臨床研究表明，方氏頭皮針對VaD具有良好的治療作用［1～4］，在此基礎上，本研究通過觀察方氏頭皮針對VaD大鼠海馬組織中炎性因子IL－6的影響，闡明方氏頭皮針治療VaD的作用機制。

1 材料與方法 1.1 材 料 1.1.1 實驗動物 健康雄性SD大鼠60只，由西安交通大學動物實驗中心提供，體重280～300g，SPF級鼠房飼養(yǎng)，實驗過程中各組大鼠自由攝食和飲水（術前禁食除外），室外20℃～22℃，相對濕度為60%～70%，光照周期為12h（7：00～19：00光照；19：00～7：00黑暗）。

1.1.2 主要儀器與藥品 SDQ－30雙極射頻電凝器（上海手術器械廠），一次性無菌華佗牌針灸針（蘇州醫(yī)療用品廠提供，規(guī)格：￠0.40mm×13mm，執(zhí)行標準號：GB2024－1994），大鼠IL－6ELISA試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司）。

1.2 方 法 1.2.1 動物分組 將60只健康雄性SD大鼠隨機分為6組，每組各10只，分別為：Ⅰ組：模型組（VaD組）；Ⅱ組：模型加頭針組（VaD＋SA組）；Ⅲ組：假手術組（Mock組）；Ⅳ組：假手術加頭針組（Mock＋SA組）；Ⅴ組：正常組（Normal組）；Ⅵ組：正常加頭針組（Normal＋SA組）。

1.2.2 模型制備 根據(jù)改良Pulsinelli四血管阻斷（4－vo）法制作VaD模型［5］：大鼠術前禁食12h，禁水6h。VaD組、VaD＋SA組大鼠用3.5mL／kg10% 的水合氯醛腹腔麻醉，手術期間保證大鼠能自主呼吸。大鼠俯臥位固定于操作臺上，局部去毛、聚維酮碘（碘伏）消毒后，于背部第一頸椎水平作1～2cm長的正中縱形切口，在正中線兩側(cè)約2mm處逐層鈍性分離至第一頸椎翼突，暴露左右兩側(cè)的翼突孔，用直徑為0.5mm SDQ－30雙極射頻電凝器插入雙側(cè)翼小孔燒灼雙側(cè)椎動脈，造成永久性閉塞。再將大鼠仰臥位固定，頸部去毛、聚維酮碘（碘伏）消毒后，行腹側(cè)頸正中切口，鈍性分離雙側(cè)頸總動脈，以“4”號絲線穿線備用，用微動脈夾夾閉雙側(cè)頸總動脈5min，間隔1h后再夾閉5min，共夾閉3次，術中大鼠肛溫保持在36.5～37.5℃，術后每只動物皮下注射給予8萬單位青霉素鈉預防細菌感染，待大鼠完全清醒后送至溫度為21～23℃的動物房飼養(yǎng)，觀察。Mock組及Mock＋SA組，除雙側(cè)椎動脈不電凝，雙側(cè)頸總動脈不結扎外，余處理皆同VaD組，Normal組及Normal＋SA組常規(guī)飼養(yǎng)。

1.2.3 治療方法 1.2.3.1 頭針組選穴：造模10d后，參照方氏針灸創(chuàng)新體系之一《頭皮針》［6］選穴：倒臟上焦（取雙側(cè)）、記憶穴（取雙側(cè)）、信號穴（取雙側(cè)）、思維穴。根據(jù)華氏等［7］介紹的大鼠穴位圖譜，模擬人體經(jīng)穴定位。

1.2.3.2 操作：穴位常規(guī)消毒，采用飛針直刺法。用拇指、食指、中指緊持針柄，以肩肘帶動腕力，針體平直，垂直快速刺入，立即松手，深達骨膜，可聽到?jīng)_擊骨膜的響聲。頭針治療均在每日9：00～11：00之間進行，每日1次，每次留針30min，每15min使用重壓、震顫手法行針1次，確定5d為1個療程，休息2d，共進行2個療程，非頭針干預組大鼠常規(guī)飼養(yǎng)直至規(guī)定的頭針療程結束。

1.2.4 指標檢測 在冰臺上迅速分離大鼠一側(cè)的海馬，按2.5mL／g腦重量加入相當體積的冰生理鹽水，在冰浴中用勻漿器將組織充分研磨，隨后超聲波粉碎進一步將組織進行破碎，接著10000r／min 4℃ 離心10min，取上清液。實驗嚴格按照IL－6ELISA法說明書步驟進行，在酶標儀上讀取各孔的OD值，測量波長為450nm。

1.3 統(tǒng)計學處理 所有數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析（One－way－ANOVA），繼以LSD檢驗，實驗結果以平均值±標準差（）表示，以P＜0.01差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結 果 各組大鼠海馬組織中炎性因子IL－6含量變化 見表1。

表1 各組大鼠海馬組織中IL－6含量（）

表1 各組大鼠海馬組織中IL－6含量（）

注：與正常組及假手術組相比，模型組及模型加頭針組大鼠海馬組織中炎性因子IL－6明顯增加（P＜0.01），而頭皮針治療后，模型加頭針組大鼠海馬組織中IL－6較模型組顯著性降低（P＜0.01），正常加頭針組及假手術加頭針組大鼠海馬組織中IL－6含量較正常組及假手術組比較均無統(tǒng)計學意義（P＞0.01）。提示：方氏頭皮針可明顯抑制海馬組織中炎性因子IL－6的釋放。

3 討 論 血管性癡呆（vascular dementia，VaD）系指在缺血性、出血性及急慢性缺血缺氧性腦血管疾病引起的腦組織損害基礎上產(chǎn)生的以高級神經(jīng)認知功能障礙為主的一組獲得性智能損害的臨床綜合征，是一種慢性的進行性疾病，據(jù)國內(nèi)外資料報道，VaD是迄今為止唯一可防治的癡呆，如早期治療會具有可逆性，因此探索VaD發(fā)病的相關因素及發(fā)病機制，以期尋求早診斷、早預防、早治療的有效措施，已成為醫(yī)學基礎研究和臨床研究的重要課題。

方氏頭皮針是結合中醫(yī)經(jīng)絡學說與大腦生理解剖學基礎上產(chǎn)生的新的治療方法，我們在長期的臨床研究中發(fā)現(xiàn)：方氏頭皮針在改善VaD患者記憶、認知功能方面具有顯著療效。本研究結果表明，血管性癡呆發(fā)生后，模型組及模型加頭針組大鼠海馬組織中炎性因子IL－6的水平較正常組及假手術組明顯升高（P＜0.01），而方氏頭皮針治療后，模型加頭針組大鼠海馬組織中IL－6水平趨向于正常，且正常加頭針組及假手術加頭針組大鼠海馬組織中的IL－6水平均較正常及假手術組有所增加，說明方氏頭皮針可通過顯著性抑制大鼠海馬組織中炎性因子IL－6的釋放從而達到治療血管性癡呆的目的。

血管性癡呆的發(fā)病機制十分復雜，目前尚未完全闡明，本研究只是從在急慢性腦缺血缺氧發(fā)病機制中起重要作用的炎性因子IL－6這單一方面分析方氏頭皮針可能治療血管性癡呆的作用機制，而闡明方氏頭皮針是如何通過抑制大鼠海馬組織中炎性因子IL－6的釋放而延緩神經(jīng)元的變性壞死，尚需期待進一步的研究。

［1］黃琳娜，安軍明，蘇同生，等.頭針治療血管性癡呆隨機對照臨床研究［J］.上海針灸雜志，2010，29（2）：79－82.

［2］黃琳娜，安軍明，蘇同生，等.頭針治療血管性癡呆（肝腎虧虛兼痰疲阻絡證）的隨機對照臨床研究［J］.中國針灸學會臨床分會第十七屆全國針灸臨床學術研討會論文集，2009：126－132.

［3］安軍明，黃琳娜.針灸治療血管性癡呆臨床研究進展［J］.現(xiàn)代中醫(yī)藥，2009，29（3）：85.

［4］安軍明，黃琳娜.血管性癡呆中醫(yī)臨床研究觀察指標的選擇［J］.上海針灸雜志，2010，29（4）：258.

［5］Pulsinelli WA，Brierley JB，plum F.Temporal profile of neuronal damagein a model of transient forebrain ischemia.Ann Neurol，1982，11：491.

［6］方本正.頭皮針［M］.西安：陜西科學技術出版社，1994：100－103.

［7］華興邦.大鼠穴位圖譜的研制［J］.實驗動物與動物實驗，1991，3（1）：1－5.