魚腥草總黃酮提取工藝研究進(jìn)展

田 洋

（本溪化學(xué)工業(yè)學(xué)校，遼寧 本溪 117004）

魚腥草（Houttuynia Cordata）是三白草科多年生草本植物，其味辛、性微寒，具有清熱解毒、利尿消腫等功效，是傳統(tǒng)的藥食兼用天然植物。現(xiàn)代研究表明，黃酮類化合物是魚腥草的主要活性成分之一，具有降血壓、降血脂、利尿通便、抗菌消炎、抗氧化等功效。國內(nèi)對魚腥草總黃酮提取工藝進(jìn)行了大量研究。綜述近幾年魚腥草總黃酮的提取工藝研究進(jìn)展，旨在為魚腥草黃酮提取提供技術(shù)參考。

1 魚腥草總黃酮提取方法

1.1 溶劑提取法

采用溶劑提取魚腥草總黃酮是較為傳統(tǒng)的方法，常用的溶劑是乙醇，常用的方法有常溫提取、加熱提取和索氏回流提取等。

閻紅等以魚腥草為原料進(jìn)行總黃酮提取，篩選優(yōu)化最佳工藝條件，并對其進(jìn)行抑菌作用研究，確定最佳條件為：提取溫度80℃，料液比1∶10，乙醇體積分?jǐn)?shù)60%，提取時間90 min，提取率1.868%。

伍曉春利用響應(yīng)面分析法對魚腥草中黃酮的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，在單因素試驗的基礎(chǔ)上選取試驗因素與水平，根據(jù)中心組合試驗設(shè)計原理分析各個因素的顯著性和交互作用。確定魚腥草黃酮提取的最佳工藝條件為：乙醇濃度70%，提取時間52 min，料液比1∶26，魚腥草黃酮含量 15.58 μg/mg。

張素林等在單因素試驗的基礎(chǔ)上，以總黃酮含量提取率為指標(biāo)，篩選最佳提取條件，再以驗證試驗確定最佳條件。結(jié)果表明，魚腥草總黃酮的最佳提取條件為：料液比1∶35，以50%乙醇溶液為提取劑、80℃的水浴中萃取 2.0 h，總黃酮得率為 0.369 mg/g。

黃小蕾采用改良流體萃取法提取魚腥草中黃酮類化合物，優(yōu)選最佳提取工藝，并進(jìn)行含量測定。結(jié)果顯示，在乙醇濃度50%，溶液流量1.8 mL/min的條件下，溫度70℃，萃取時間27 min的條件下，萃取率為3.15%，總黃酮含量為 24.0%，其中蘆丁、金絲桃苷、槲皮苷、 槲皮素的萃取率分別為 0.35，1.52，1.70，0.50 mg/g。

蔣海明等以乙醇為溶劑，采用索氏回流法提取魚腥草全草中的黃酮，優(yōu)化提取溫度、乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取時間、固液比等提取條件。確定最佳提取條件為：提取溫度100℃、乙醇體積分?jǐn)?shù)80%、提取時間4 h、固液比 1∶30（m/V，g∶mL），在此條件下的黃酮提取率為12.59%。

樓穎等以乙醇為溶劑，采用索氏回流法提取魚腥草葉中的黃酮類化合物，并采用分光光度法測定黃酮含量。以80%的乙醇水溶液為溶劑，固液比為1∶40，提取溫度80℃，回流提取時間3 h，在此工藝條件下進(jìn)行試驗，黃酮提取率可達(dá)90%以上。

1.2 超聲波輔助法

超聲波輔助提取是在水浸提的同時加超聲波輔助，此法不僅能縮短提取時間，提高提取率，同時避免高溫對有效成分的影響。

楊文婷等以黃酮含量為檢測指標(biāo)，考察乙醇濃度、液固比和提取時間對超聲提取魚腥草黃酮得率的影響，在單因素試驗的基礎(chǔ)上，通過Box-Behnken響應(yīng)面分析法進(jìn)行三因素三水平的試驗設(shè)計。結(jié)果表明：提取魚腥草黃酮的最佳工藝為乙醇濃度74.67%，超聲時間 69.88 min，液固比 20.20∶1（mL/g），預(yù)測魚腥草黃酮得率為2.654%，實際得率為2.663%，說明該模型合理有效。

李湘等通過單因素和正交試驗對魚腥草根總黃酮的超聲波輔助提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果表明：在超聲功率 200 W 下，按固液比 1∶60（g/m L）加入 60%乙醇，于55℃下提取35 min，總黃酮提取率達(dá)2.00%。

高天曙等探討魚腥草總黃酮提取的最佳方法時，采用水提法、乙醇浸提法、超聲波法提取魚腥草的總黃酮，對3種提取液進(jìn)行定性鑒定，利用紫外可見分光光度計測定黃酮含量。同時對影響超聲波法提取魚腥草中總黃酮的多個因子進(jìn)行正交試驗，以確定最佳提取工藝。結(jié)果表明：采用超聲波法提取魚腥草總黃酮較佳，其最佳提取條件為料液比 1∶10、乙醇濃度50%、提取時間40 min、功率250W。

1.3 微波輔助提取法

微波輔助提取是在水浸提的同時加入微波。與乙醇提取法相比，其具有選擇性強(qiáng)、操作時間短、溶劑消耗小、有效成分收率高的特點(diǎn)。

何潔等以70%乙醇為提取劑，在料液比1∶30的條件下，比較索氏提取法、超聲波輔助提取法與微波輔助提取法的總黃酮提取率，并測定魚腥草總黃酮的還原能力、總抗氧化能力、清除羥基自由基與超氧陰離子自由基的能力。結(jié)果表明，3種提取方法的提取率分別為 3.97%、2.22%和 5.25%；魚腥草總黃酮的抗氧化活性與總黃酮濃度呈良好的量效關(guān)系，其清除羥基自由基與超氧陰離子自由基的能力強(qiáng)于山葡萄籽多酚提取物和VC。

葉春等采用微波輔助提取魚腥草葉中的總黃酮，在單因素試驗的基礎(chǔ)上，用正交試驗進(jìn)行工藝參數(shù)優(yōu)化。優(yōu)化后的工藝條件為：乙醇濃度50%，固液比1∶50，預(yù)浸泡30 min，微波作用時間30 s，微波功率540 W，總黃酮的提取率可達(dá)95%以上。與傳統(tǒng)乙醇提取法相比，微波輔助提取可使每次提取時間由3 h縮短為 30.5 min，提取率從 92.14%增加到 95.93%。

1.4 雙水相萃取提取法

雙水相萃取是指兩種高聚物或高聚物與某種高價無機(jī)鹽溶于水并靜止一段時間后形成不相容的上下兩相，其中兩相都含有大量的水分，這一兩相體系稱作雙水相體系。該法具有分離條件溫和、操作簡單、可連續(xù)操作、易于放大和不使用（或少使用）有機(jī)溶劑等優(yōu)點(diǎn)，目前已廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)、酶、氨基酸和天然產(chǎn)物中有效成分的分離純化。

楊靖等利用聚乙二醇（PEG）-硫酸銨雙水相體系對魚腥草總黃酮進(jìn)行萃取分離，通過單因素試驗分別考察PEG分子量、兩相質(zhì)量比、萃取溫度、萃取pH對魚腥草中總黃酮分離提取的影響，并用正交試驗優(yōu)化萃取工藝。 魚腥草總黃酮在以 PEG800∶（NH4）2SO4＝2.0∶2.0 為雙水相體系、萃取 pH 3.0、水浴溫度 50 ℃的條件下，萃取率高達(dá)98.96%。

1.5 復(fù)合酶提取法

酶解法提取魚腥草總黃酮主要利用酶解使魚腥草結(jié)構(gòu)變得松散，降低與原料的結(jié)合力。

黃德娜等采用響應(yīng)面法優(yōu)化復(fù)合酶提取工藝條件，在對提取時間、酶用量、提取溫度、pH、料液比5個影響因素進(jìn)行單因素試驗的基礎(chǔ)上，以黃酮提取率為響應(yīng)值，采用Box-Behnken中心組合設(shè)計方法建立回歸模型；利用軟件Desing Expert V8.0.6作響應(yīng)面分析，得出理論最佳工藝參數(shù)。對理論參數(shù)進(jìn)行調(diào)整后得到的最優(yōu)工藝參數(shù)為：提取溫度55.0℃，pH 5.5，料液比 1∶60 g/mL， 酶用量 100 μL， 提取時間 150 min，該條件下的黃酮類化合物提取率為 35.207±1.56 mg/g。

段文錄等研究纖維素酶法提取魚腥草總黃酮的工藝條件，魚腥草原料經(jīng)纖維素酶預(yù)處理后浸提，總黃酮得率可達(dá)到8.182%，酶解最佳條件為：料液中酶質(zhì)量濃度 0.2 mg/mL，酶解溫度 45 ℃，酶解 pH 5.0，酶解時間90 min。

1.6 乙醇-硫酸銨雙水相聯(lián)合提取法

郝紅英等為優(yōu)化超聲波輔助的乙醇-硫酸銨雙水相聯(lián)合提取魚腥草總黃酮的工藝，通過單因素試驗確定影響總黃酮提取率的各因素水平，采用正交試驗了解各因素組合的影響程度。結(jié)果表明，各因素的影響排序為乙醇濃度〉提取溫度〉提取時間〉料液比；最佳提取條件為脫脂魚腥草粉末2.0 g、乙醇用量32.50%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）、硫酸銨用量 16.00%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）、料液比1 g∶20 mL、超聲波頻率300 W、超聲波處理溫度70℃、超聲波處理時間50 min，在此條件下的魚腥草總黃酮提取率為2.97%。

2 結(jié)語

魚腥草是一類藥食兩用的傳統(tǒng)天然植物，具有一定的藥用價值和保健作用，而黃酮類成分是魚腥草的有效成分之一。因此，開展魚腥草總黃酮類提取工藝研究，對于魚腥草資源的進(jìn)一步開發(fā)利用具有重要意義。