王從舟,王俊鋒
(1.商城縣動物疫病預(yù)防控制中心,河南 信陽 465350;2.信陽農(nóng)林學(xué)院牧醫(yī)工程學(xué)院,信陽 464000)
弓形蟲病是由弓形蟲寄生于人和動物引起的疾病。目前已知的弓形蟲中間宿主有45種哺乳動物,70余種鳥類和5種爬行動物,終末宿主為貓科動物[1]。弓形蟲寄生在動物體內(nèi),隨糞便排出體外,通過消化道傳染。孕婦感染弓形蟲后,可通過胎盤直接傳染給胎兒,造成胎兒畸形、先天愚、流產(chǎn)、早產(chǎn)死胎等[2]。
近年來,關(guān)于豬弓形蟲病的報道越來越多,在我國能夠自然感染弓形蟲的15種動物中,豬的陽性率最高,加之感染豬癥狀類似豬瘟,多伴有混合感染或繼發(fā)感染,病死率高,對養(yǎng)豬業(yè)造成巨大損失。20世紀(jì)70年代豬的無名高熱,其最終禍?zhǔn)拙褪枪蜗x。豬群患病后表現(xiàn)為高熱稽留(體溫40~42℃)、呼吸困難、咳嗽、腹式呼吸;病豬精神沉郁,結(jié)膜發(fā)紺,皮膚出現(xiàn)紫紅色瘀斑,體表淋巴結(jié)特別是腹股溝淋巴結(jié)明顯腫大,身體下部及耳部出現(xiàn)淤血斑或出現(xiàn)較大面積發(fā)紫,有的出現(xiàn)腸炎及神經(jīng)癥狀;孕母豬發(fā)生早產(chǎn)或產(chǎn)出發(fā)育不全的仔豬或死胎。死后剖檢可見肺、肝、脾、淋巴結(jié)、心肌、腦等處均有炎性壞死性變化,顯微鏡下可見有多形性的滋養(yǎng)體,有的在心、腦、骨骼肌等處有休止期的包囊[3]。
河南省是養(yǎng)豬大省,是我國主要的生豬外調(diào)省份,根據(jù)溫青娜等在2014年對河南省豬弓形蟲感染情況進行調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn),18個地市均有弓形蟲感染,調(diào)查的73個生豬養(yǎng)殖場中有51個豬場弓形蟲IgG抗體存在陽性,陽性率高達(dá)69.9%;在調(diào)查的2 642份血液樣品中,672份血液樣品的弓形蟲IgG抗體呈陽性,陽性率達(dá)23.7%。這表明目前河南省豬群弓形蟲感染處于一個較高的水平[4]。為加快農(nóng)村改革發(fā)展步伐,信陽市于2009年被河南省委省政府確定為農(nóng)村改革發(fā)展綜合試驗區(qū),在全市范圍內(nèi)進行農(nóng)村改革發(fā)展綜合試驗?!缎抨栟r(nóng)村改革發(fā)展綜合試驗總體方案》中強調(diào)要把具有信陽特色的畜禽等支柱產(chǎn)業(yè)實現(xiàn)規(guī)?;a(chǎn)、產(chǎn)業(yè)化經(jīng)營,到2020年,使全市畜牧業(yè)產(chǎn)值占農(nóng)業(yè)總產(chǎn)值的比重達(dá)到60%,使畜牧業(yè)真正成為振興信陽農(nóng)村經(jīng)濟的支柱產(chǎn)業(yè),成為農(nóng)民增收的重要途徑。信陽作為傳統(tǒng)的養(yǎng)豬業(yè)大市,2015年全市生豬飼養(yǎng)量660萬頭,同比增長3.3%,呈現(xiàn)較快增速。結(jié)合畜牧產(chǎn)業(yè)集群化建設(shè)項目,信陽市已形成以畜牧養(yǎng)殖、種豬生產(chǎn)、飼料加工、金融擔(dān)保為一體的產(chǎn)業(yè)集聚區(qū),形成區(qū)域性規(guī)模養(yǎng)殖和產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的良好格局。然而,由于養(yǎng)殖規(guī)模大、密度大、衛(wèi)生條件差及農(nóng)民對疾病的防控認(rèn)識不足,豬弓型蟲病的發(fā)病率不斷上升,大幅制約了養(yǎng)豬業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。但是豬弓形蟲病發(fā)病因素多,繼發(fā)、混合感染情況復(fù)雜,涉及飼養(yǎng)管理等多方面因素,往往給防控帶來很大的難度。此外,由于生產(chǎn)上盲目用藥,造成極大的副作用和耐藥細(xì)菌的不斷增多,留下嚴(yán)重的藥物殘留,嚴(yán)重危害消費者健康。本文就從病原學(xué)、流行病學(xué)、發(fā)病癥狀及病理變化、診斷、防控等角度對豬弓形蟲病進行概述。
弓形蟲病的病原體只有一個種,即剛地弓形蟲(Taxoplasma gondi),它屬于真球蟲目(Eucoccidiida)、艾美亞目(Eimeriina)、弓形蟲屬(Toxoplasma),可以分為不同的蟲株。
弓形蟲在不同的發(fā)育階段有不同的形態(tài)。在中間宿主體內(nèi)有滋養(yǎng)體和包囊發(fā)育階段,在終末宿主體內(nèi)還有裂殖體、配子體和卵囊等發(fā)育階段。滋養(yǎng)體、包囊和卵囊對中間宿主和終末宿主均具有感染性。
滋養(yǎng)體:又稱速殖子,主要發(fā)現(xiàn)在急性病例或感染早期的腹水和有核細(xì)胞胞漿里。呈弓形、月牙形或香蕉形,一端偏尖,一端偏鈍圓。平均大小為4~7 μm×2~4 μm。經(jīng)姬姆薩氏液染色或瑞氏液染色后,胞漿呈淡藍(lán)色,有顆粒。核呈深藍(lán)色,偏于鈍圓的一端。速殖子主要出現(xiàn)在急性病例的腹水中,??梢姷接坞x的(細(xì)胞外的)單個蟲體;在有核細(xì)胞(單核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞)內(nèi)可見到正在進行內(nèi)出芽增殖的蟲體;有時在宿主細(xì)胞的胞漿里,許多滋養(yǎng)體簇集在一起形成“假囊”。電鏡觀察可見有極環(huán)、類錐體、8~10條棒狀體及高爾基體和線粒體等細(xì)胞器。
包囊:常發(fā)現(xiàn)在慢性病例或無癥狀病例的腦、骨骼肌、心、肺、肝、腎等組織內(nèi)。呈卵圓形,有較厚的囊膜,囊內(nèi)的蟲稱為慢殖子,數(shù)目可由數(shù)十個至數(shù)千個;包囊的直徑為50~60 μm,可在患畜體內(nèi)長期存在,并隨蟲體的繁殖而逐漸增大,可大至100 μm。包囊在某些情況下可破裂,蟲體從包囊中逸出后進入新的細(xì)胞內(nèi)繁殖,再度形成新的包囊。在機體內(nèi)腦組織的包囊數(shù)可占包囊總數(shù)的57.8%~86.4%。
裂殖體:寄生在貓的腸上皮細(xì)胞中。成熟的裂殖體呈圓形,直徑為12~15 μm,內(nèi)有4~20個裂殖子。游離的裂殖子大小為 7~10 μm×2.5~3.5 μm,前端尖,后端圓,核呈卵圓形,常位于后端。
配子體:寄生于貓的上皮細(xì)胞中。經(jīng)過數(shù)代裂殖生殖后的裂殖子進入另一細(xì)胞內(nèi)變?yōu)榕渥芋w,配子體有大小兩種,大配子體的核致密,較小,含有著色明顯的顆粒;小配子體色淡,核疏松,后期分裂形成許多小配子,每個小配子有1對鞭毛。大小配子結(jié)合形成合子,由合子形成卵囊。
卵囊:在貓的腸道上皮細(xì)胞中形成,破裂后隨貓糞便排出。卵囊呈橢圓形,大小為11~14 μm×7~11 μm。孢子化后每個卵囊內(nèi)有2個孢子囊,每個孢子囊內(nèi)有4個子孢子。子孢子一端尖,一端鈍,其胞漿內(nèi)含暗藍(lán)色的核,靠近鈍端。卵囊無微孔、極粒、斯氏體和外殘體,有內(nèi)殘體。
弓形蟲的全部發(fā)育過程需要兩個宿主,在終末宿主(貓科中貓屬和山貓屬)腸內(nèi)進行球蟲型發(fā)育,在中間宿主(哺乳類、鳥類等)體內(nèi)進行腸外期發(fā)育。
在中間宿主體內(nèi)的發(fā)育:中間宿主(包括人、豬等多種動物)食入或飲入污染有孢子化卵囊或包囊的食物和水,或滋養(yǎng)體通過口、鼻、咽、呼吸道黏膜和皮膚傷口入侵中間宿主體內(nèi)后,子孢子、速殖子和慢殖子侵入腸壁,再經(jīng)淋巴、血液循環(huán)擴散至全身各組織器官,入侵有核細(xì)胞,在胞漿中以內(nèi)出芽或二分裂的方式進行繁殖。如果感染的蟲株毒力很強,而且宿主又未能產(chǎn)生足夠的免疫力,或者由于其他因素的作用,即可引起弓形蟲病的急性發(fā)作;反之,若蟲株毒力弱,宿主又能很快產(chǎn)生免疫力,則弓形蟲繁殖受阻,疾病發(fā)作得緩慢,或稱為無癥狀的隱性感染,這時存留的蟲體就會在宿主的一些臟器組織(尤其是腦組織)中形成包囊型蟲體。當(dāng)機體免疫力下降時,組織內(nèi)的包囊可破裂,釋放慢殖子,進入血液循環(huán)系統(tǒng)或其他新的組織細(xì)胞形成包囊或假包囊繼續(xù)發(fā)育繁殖。包囊有較強的抵抗力,能存活數(shù)月至數(shù)年或更長。
在終末宿主體內(nèi)的發(fā)育:貓吞食了弓形蟲的包囊、假包囊或卵囊后,大部分子孢子、速殖子或慢殖子侵入小腸的上皮細(xì)胞,進行球蟲型的發(fā)育和繁殖,經(jīng)裂殖生殖和配子生殖最后產(chǎn)生卵囊。卵囊隨貓的糞便排到外界,在適宜的環(huán)境條件下,經(jīng)2~4 d,經(jīng)孢子生殖發(fā)育為感染性卵囊。也有一部分子孢子、速殖子或慢殖子侵入腸壁,進入淋巴、血液循環(huán),隨之被帶到全身各臟器和組織,侵入有核細(xì)胞內(nèi)進行無性增殖(又稱弓形蟲型增殖),最后形成包囊。因此,貓科動物是弓形蟲的終末宿主,同時也是中間宿主。通常貓吞食包囊4~10 d就能排出卵囊,而吞食假包囊或卵囊后約需20 d以上。受感染的貓一般每天排出10萬~100萬個卵囊,排卵囊可持續(xù)10~20 d。
本病分布于全世界,造成廣泛流行的因素很多,其生活史各階段皆有感染性。感染方式多樣,除經(jīng)口和損傷的皮膚、黏膜感染外,還可經(jīng)胎盤感染。中間宿主廣泛,140余種哺乳動物易感;除終末宿主與中間宿主互相交替進行感染傳播外,也可在中間宿主之間、終末宿主之間相互傳播。包囊可長期生存在中間宿主組織內(nèi);卵囊排放量大,且對環(huán)境抵抗力也較大,對酸、堿、消毒劑均有相當(dāng)強的抵抗力,室溫下可生存3~18個月,在自然界常溫、常濕條件下可存活1~1.5年。
弓形蟲病動物感染十分普遍,但大多數(shù)為隱性感染。食肉的哺乳動物主要是吃到另一動物體內(nèi)的蟲體而感染;草食動物主要是吃到被卵囊污染的飼料和飲水及含蟲的生肉屑(泔水)而感染。豬則兩類感染方式兼有。豬、牛、羊等哺乳動物及人均可發(fā)生胎內(nèi)感染。在畜禽中,豬對弓形蟲最敏感,從哺乳仔豬到成年母豬均可感染發(fā)病,但對哺乳仔豬、小架子豬和懷孕母豬危害最嚴(yán)重。對規(guī)?;B(yǎng)豬場的育種母豬、肥育豬和保育仔豬的血清學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示,育種母豬、肥育豬、保育仔豬陽性率分別為42.4%、22.6%、12.5%。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析,育種母豬、肥育豬和保育仔豬的弓形蟲感染率存在顯著性差異,育種母豬的感染率顯著高于肥育豬;而肥育豬和保育仔豬的弓形蟲感染率雖然沒有統(tǒng)計學(xué)差異,但肥育豬的血清弓形蟲抗體陽性率高于保育仔豬。而對于不同季節(jié)河南省豬群的弓形蟲感染率研究顯示,秋季的豬群感染率最高,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析顯著高于春、夏、冬3個季節(jié),春、夏、冬3個季節(jié)的弓形蟲豬群感染率之間無顯著性差異。
感染弓形蟲后是否發(fā)病取決于蟲株毒力、感染數(shù)量、感染途徑及宿主的抵抗力等。引起發(fā)病的直接原因是蟲體毒素的直接作用、有毒分泌物引起的變態(tài)反應(yīng)以及蟲體繁殖時大量破壞細(xì)胞的綜合作用所致。
豬弓形蟲病的癥狀與豬流感、豬瘟相似:病豬精神沉郁,食欲減退,嚴(yán)重時食欲廢絕,常便秘,后期下痢;頭、耳、下腹部有淤血斑或發(fā)紺,后肢軟弱無力,行走搖晃,喜臥,體溫升高至41~42℃,可延續(xù)7~10 d;呼吸快,有漿液性或膿性鼻漏,嚴(yán)重時呼吸困難,喘氣,犬坐狀張口呼吸,甚至口流泡沫窒息死亡。
急性病例主要見于幼畜,出現(xiàn)全身性病變,淋巴結(jié)、肝、肺和心臟等器官腫大,并有許多出血點和壞死灶;腸道重度充血,腸黏膜上可見扁豆大小的壞死灶;腸腔和腹腔內(nèi)有多量滲出物。病理組織學(xué)變化為網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞和血管結(jié)締組織細(xì)胞壞死,有時有炎性細(xì)胞浸潤,弓形蟲的滋養(yǎng)體位于細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外。
慢性病例常見于老齡家畜,可見有各內(nèi)臟器官的水腫,并有散在的壞死灶。病理組織學(xué)變化為明顯的網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞增生,淋巴結(jié)、腎、肝和中樞神經(jīng)系統(tǒng)等處更為顯著,但不易見到蟲體。
隱性感染的病理變化主要是在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)見有包囊,有時可見有神經(jīng)膠質(zhì)增生性和肉芽腫性腦炎。
弓形蟲病的癥狀、病理變化上雖有一定的特征,但還不足以作為確診的依據(jù),必須做實驗室診斷,查出病原體或其特異性抗體方能確診。實驗室診斷方法如下。
主要包括直接涂片染色、組織切片染色、動物接種或細(xì)胞培養(yǎng)法、卵囊檢查法等。這些方法是從病料里查出弓形蟲存在最可靠的診斷方法,但缺點是敏感性低,耗時長,容易漏診。
主要包括直接凝集試驗(DAT)、間接血凝試驗(IHAT)、改良凝集試驗(MAT)。間接血凝試驗主要用于大規(guī)模的流行病學(xué)調(diào)查。Jm Senet等證實IHAT檢測IgM抗體更敏感,且比間接免疫熒光試驗(IFAT)更能檢測低滴度弓形蟲抗體。王貝貝等[5]用建立的MAT方法適合于對初篩樣本以及臨床上疑似弓形蟲感染個體的篩查,但該方法費時費力,不宜在基層推廣使用。Lorry B等發(fā)現(xiàn)MAT可用于畜群血清學(xué)檢測,且該法可作為檢測組織液的良好候選法。
ELISA因為靈敏度高、特異性強等優(yōu)點已被廣泛應(yīng)用于弓形蟲病的診斷。羅才慶等[6]對ELISA和IHAT比較發(fā)現(xiàn),ELISA更適用于豬弓形蟲抗體檢測。楊亞曉等[7]對臨床上常見的金標(biāo)法、IHAT、ELISA檢測對弓形蟲IgG抗體的檢測效能進行比較分析:ELISA檢測弓形蟲IgG抗體的敏感性和特異性較高,適合于大規(guī)模的弓形蟲IgG抗體篩查。在建立方法方面,白昀等[8]初步建立的間接ELISA檢測對豬球蟲、豬肺炎支原體等7種重要病原的陽性血清呈陰性反應(yīng),抗原批間、批內(nèi)試驗變異系數(shù)均小于8%,與商品化試劑盒的符合率達(dá)到95%左右,可用于豬弓形蟲特異性抗體的檢測。近年來,不少學(xué)者對重組抗原進行了研究,丁邦勝等研究3種重組抗原(rSAG1+rHXGPRT+rAK)混合的間接ELISA檢測弓形蟲IgM和IgG,與進口ELISA檢測總符合率高,敏感性、特異性較高,更經(jīng)濟實惠。Bartromiej等使用5組弓形蟲重組嵌合抗原建立酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測3個不同群體家畜動物(馬、豬、羊)血清中的IgG,結(jié)果得到所有嵌合抗原具有高特異性(100%),其中最有效的弓形蟲病的診斷重組抗原是SAG2-GRA1-ROP1L,可以檢測特定的抗體[9]。
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)是靠體外擴增病原核酸DNA序列而進行病原診斷的技術(shù)。任科研等[10]研制的弓形蟲PCR檢測試劑盒能擴增出弓形蟲特異性基因MIC3片段,最低能夠檢測到10個弓形蟲速殖子的DNA,臨床應(yīng)用效果顯著。李輝等建立PCR檢測弓形蟲抗原最低濃度為0.1 ng/mL,PCR檢測弓形蟲抗原靈敏度高于傳統(tǒng)ELISA檢測6 000倍,高于ABC-ELISA方法750倍。周永華等[11]建立的弓形蟲熒光定量PCR檢測弓形蟲Yz-1株和Yz-2株均為陽性,且其他常見寄生原蟲、寄生蟲呈陰性;檢測組織樣品中,熒光定量PCR方法的檢出率明顯高于常規(guī)PCR方法。
LAMP是一種新型的核酸擴增方法。王玉嬌等用建立的豬弓形蟲病LAMP法檢測豬弓形蟲病血液樣本,在樣本DNA稀釋3×105倍后仍可檢出豬弓形蟲DNA,且該方法擴增不出新孢子蟲、瑟氏泰勒蟲及豬附紅細(xì)胞體等病原DNA,適合于豬弓形蟲病的檢測。鄒杰等建立的弓形蟲LAMP法能夠檢測出10個拷貝的目的基因,與新孢子蟲等近源原蟲DNA無交叉反應(yīng),且極大地縮短了時間[12]。
楊樹森等[13]從120種中草藥中篩選出30種具有不同程度干擾弓形蟲侵入能力的中藥發(fā)現(xiàn),水浸煎劑1∶20稀釋時,能使弓形蟲侵襲力下降60%以上的藥物有:甘草、柏子仁、牛膝、雞冠花、女貞子、續(xù)斷、淫羊藿,其中甘草的抑制率達(dá)到了100%。其他中藥提取物如青蒿素、扁桃酸、蒿甲醚、青蒿琥酯、大蒜素等均可對試驗動物有保護作用。還有一些復(fù)方制劑對弓形蟲病有較好療效,如扶正去原湯(基礎(chǔ)藥方:黃芪、青蒿、厚樸、苦參、生山楂)、清酒沖劑(基礎(chǔ)藥方:紅藤、丹參、白花蛇舌草、王不留行、車前子、黃柏、知母、柴胡、制大黃、丹皮)等[14]。
目前在眾多抗生素藥物中,僅阿奇霉素對弓形蟲包囊有較好療效,主要表現(xiàn)在劑量小、吸收好、高濃度集中于有核細(xì)胞中、緩慢釋放和靶向效應(yīng)等,通過白細(xì)胞和吞噬細(xì)胞轉(zhuǎn)運到炎癥部位,組織中藥物濃度比血清中高10倍之多。Degerli等應(yīng)用小鼠模型研究阿奇霉素抗弓形蟲效果,結(jié)果顯示200 mg/kg的阿奇霉素具有預(yù)防作用,250 mg/kg的阿奇霉素具有治療作用。此外,大環(huán)內(nèi)酯類抗生素中的螺旋霉素和羅紅霉素對弓形蟲也有一定的治療效果,其中螺旋霉素主要用于治療妊娠期獲得性急性弓形蟲病。在其他類型抗生素中,Araujo應(yīng)用小鼠急性和慢性弓形蟲病模型發(fā)現(xiàn),林可霉素對弓形蟲病有治療作用,而且對先天性弓形蟲感染具有預(yù)防作用。一般臨床中,豬弓形蟲病的經(jīng)典傳統(tǒng)治療藥物以乙胺嘧啶和磺胺類藥物聯(lián)合應(yīng)用為主。控制癥狀效果明顯,但復(fù)發(fā)率高,有一定的毒副作用,如乙胺嘧啶的血液毒性及磺胺類藥物的骨髓抑制、白細(xì)胞減少癥、血小板減少癥、皮疹等,免疫系統(tǒng)損傷時磺胺類藥物會產(chǎn)生更高的毒性[15]。
其他應(yīng)用于治療豬弓形蟲病的藥物主要有免疫抑制藥、安定藥、氯喹等。免疫抑制藥主要有甾醇類免疫抑制藥硫唑嘌呤(AZA),為二氫葉酸還原酶的抑制劑。對于真菌和原蟲,能抑制甲基固醇轉(zhuǎn)移酶,可能具有抗弓形蟲活性。Jones等研究12種常用安定藥和情緒穩(wěn)定藥阻止弓形蟲繁殖效力,試驗證實了安定藥可能成為治療弓形蟲病的新候選藥物。氯喹為氨基喹啉類抗瘧藥,是一種非常有效的治療弓形蟲病藥物。其治療機理是破壞弓形蟲細(xì)胞膜及核膜,降低其攻擊有核細(xì)胞的能力,阻斷其在細(xì)胞內(nèi)的增殖,且造成代謝紊亂。
6.4.1 蟲體特異組分疫苗 這種疫苗是用免疫化學(xué)方法從蟲體裂解物或排泄物和分泌抗原(Excretedsecreted antigen,ESA)中提取特定組分制備而成。Darcy等用無細(xì)胞基制備的弓形蟲ESA免疫接種大鼠,可產(chǎn)生高滴度抗體血清,將該血清注入對弓形蟲高度敏感的幼齡大鼠,可獲得抗RH株的抵抗力,存活期明顯延長。隨著單克隆抗體技術(shù)的發(fā)展,該類型疫苗將有更大的發(fā)展。
6.4.2 利用弱毒或減毒株作為疫苗 這兩類疫苗屬于全蟲疫苗,其中滅活疫苗對動物進行免疫接種顯示,抗感染能力較弱。臨床上常用以下3種毒株。Ts-4溫度敏感株是1976年由Prefekom等分離出的RH株突變體,在37℃正常生長,高于40℃無法存活,其毒力明顯低于RH株且接種后不在體內(nèi)持續(xù)存在。迄今,包括小鼠在內(nèi)的多種動物都已成功地用無毒、非持續(xù)性的弓形蟲Ts-4溫度敏感變異體活速殖子作為疫苗接種而獲得抗致死性攻擊的保護。Ts-4疫苗的安全性也在動物試驗中得到證實。T-263毒株具有抑制貓體內(nèi)排出弓形蟲卵囊的能力,在切斷傳播途徑方面起重要作用。正常貓接種該疫苗后,既未出現(xiàn)癥狀,也未排出卵囊,因此比較安全。但該活疫苗具有一定危險性,當(dāng)機體抵抗力下降時,貓可成為傳染源。S48速殖子疫苗接種孕羊后,對照組只有18%羔羊存活,而試驗組的羔羊存活率達(dá)75%。目前,該疫苗已在一些國家推廣應(yīng)用。
6.4.3 基因工程苗 包括亞單位疫苗和復(fù)合多價疫苗。Saaved等以人的T淋巴細(xì)胞(TCC32)對弓形蟲ROP2蛋白抗原的表位進行識別發(fā)現(xiàn),序列197-216ROP2抗原含有TCC32識別的表位,認(rèn)為其有可能作為候選疫苗??构蜗x全抗原、P30抗原的McAb均對弓形蟲具有明顯的殺傷作用,能準(zhǔn)確識別P30抗原,可應(yīng)用于弓形蟲病亞單位疫苗的研制,是極有前途的候選疫苗分子。盡管基因工程疫苗具有很大的應(yīng)用潛力和眾多的優(yōu)點,但是此類疫苗生產(chǎn)過程復(fù)雜,技術(shù)難度大,生產(chǎn)成本高,免疫活性還不理想,從而限制了此類疫苗推廣,目前尚無此類疫苗應(yīng)用人體的報道。
6.4.4 核酸疫苗 核酸疫苗是20世紀(jì)90年代發(fā)展起來的第3代疫苗。它將編碼抗原的基因插入載體質(zhì)粒中構(gòu)成重組質(zhì)粒,直接接種機體,達(dá)到抗感染目的。目前弓形蟲核酸疫苗的候選分子主要集中在以下幾個方面:弓形蟲表面膜抗原(SAG)基因、蟲體棒狀蛋白(ROP)基因以及致密顆?;虻?。弓形蟲核酸疫苗的研制尚處于起步階段,但其將是今后的研究方向[16]。