禽腺病毒感染的診斷與防控

陳建勇

（東平縣獸醫(yī)衛(wèi)生監(jiān)督檢驗所，山東 東平 271500）

禽腺病毒（avianadenoviruses，AAV）感染引起臨床疾病的最早報道見于1950年。當(dāng)時從出現(xiàn)呼吸系統(tǒng)癥狀的鵪鶉中分離了AAV。自從那時起，各種家禽以及野生禽類陸續(xù)出現(xiàn)了關(guān)于AAV感染的各種報道。AAV感染可以引起多種疾病，其中比較常見的有兩種，分別是包涵體肝炎(Inclusion bodyhepatitis，IBH)和產(chǎn)蛋減少綜合征 (Eggdrop syndrome，EDS)。

包涵體肝炎和產(chǎn)蛋減少綜合癥是禽腺病毒感染引起的兩種重要疾病。本文對這兩種疾病的病原學(xué)、流行病學(xué)、臨床癥狀、病理變化、診斷以及防控進行了綜述。

1 病原學(xué)

禽腺病毒是一種無囊膜的DNA病毒。腺病毒對多種消毒劑、高溫以及pH變化有一定的耐受性。碘伏和醛類消毒劑如果接觸病毒時間較長，對病毒有一定消毒作用。

過去，根據(jù)宿主范圍以及抗體反應(yīng)性的不同，腺病毒科（Adenoviridae）可以分為兩個屬，其中從哺乳動物分離到的病毒為哺乳動物腺病毒屬（Mastadenovirus），從禽類分離到的病毒為禽腺病毒屬（Aviadenovirus）。最近根據(jù)國際病毒分類委員會（ICTV）的最新分類，病毒被歸為四個不同的屬。其中哺乳動物腺病毒屬的病毒是來源于人、猴、牛、豬、馬、鼠、綿羊和山羊的腺病毒。禽腺病毒屬起初被稱為禽腺病毒-1型，包括了歐洲地區(qū)已確認(rèn)的12種禽腺病毒（Fowladenovirus，F(xiàn)AV)血清型中的11種。唾液腺病毒屬（Siadenovirus）起初被稱為禽腺病毒-2型，主要包括火雞出血性腸炎病毒(Haemorrhagicenteritisvirusofturkeys，HEV)、 雉雞大理石脾病(Marblespleendisease，MSDV)、雞脾腫大病毒 (AvianadenovirussplenomegalyVirus，AASV)等。胸腺病毒屬（Atadenovirus）原來稱禽腺病毒-3型，包括產(chǎn)蛋減少綜合征病毒 (Eggdrop syndromevirus，EDSV)等。

2 包涵體肝炎/心包積液綜合征（IBH/HPS）

包涵體肝炎于1963年在美國首次報道[1]。之后，世界各地很多國家都報道了此病。IBH/HPS在肉雞以及蛋雞中均可發(fā)生。IBH可以通過水平和垂直兩種方式傳播[2]。垂直傳播被認(rèn)為是FAV從母代傳給子代的重要特征。感染病毒的種雞向子代排毒的時間可達3～6周，直到子代雞產(chǎn)生免疫力為止[3]。病毒還可以長期潛伏在SPF雞群中。雞與雞之間的水平傳播主要通過污染病毒的糞便進行糞口傳播。

1日齡的SPF雞人工感染分別從巴基斯坦和厄瓜多爾分離到的FAV-4毒株后，在第6～11天期間出現(xiàn)了精神沉郁、活動減少等癥狀，但在第11天之后沒有其他新的癥狀出現(xiàn)。死亡現(xiàn)象從攻毒后的第7天開始出現(xiàn)，共持續(xù)了5d。病毒感染3d以上，從小雞肝臟中很難分離到病毒。

日常生產(chǎn)實踐中，包涵體肝炎（IBH）的主要特征是4日齡至6周齡的雞突然出現(xiàn)死亡率增加。死亡率一般在2%～40%之間[4]。但是因病毒的致病力、雞群的免疫狀況以及繼發(fā)感染的不同，有時會出現(xiàn)高達80%的死亡率報道。死亡率通常在3～4d內(nèi)達到最高峰，在9～14d后結(jié)束。臨床癥狀主要有嗜睡、羽毛豎起、食欲不正、出現(xiàn)黃色粘性糞便等。病毒感染也會引起飼料轉(zhuǎn)化率降低、增重減少。

肉眼可見的大體病變包括肝擴張、發(fā)白、易碎，肝有時也會出現(xiàn)壞死灶。腿以及胸部肌肉會出現(xiàn)帶有瘀斑的出血。心臟因為有心包積液而顯得很松弛。發(fā)生心包積水綜合征（HPS）時，心包會有稻草色的積液滲出。此外，有時也能夠觀察到腎炎、脾腫大以及胸腺萎縮等病變。顯微病變包括有壞死灶、有些肝臟有嗜堿性的核包涵體。心臟可以觀察到多灶性壞死以及出血。脾臟、胸腺以及法氏囊的淋巴衰竭現(xiàn)象也能夠觀察到肝的病變主要有出現(xiàn)小灶性凝固性壞死，單核細(xì)胞浸潤，肝細(xì)胞中出現(xiàn)嗜堿性包涵體。

3 產(chǎn)蛋減少綜合征

產(chǎn)蛋減少綜合征(EDS)的主要特征是看似健康的雞或鵪鶉出現(xiàn)產(chǎn)蛋急劇下降或者產(chǎn)畸形蛋。該病在1976年由荷蘭學(xué)者VanEck首先報道[5]。之后，世界各地其他國家和地區(qū)也相繼報道了該病的發(fā)生。

雞群中最初爆發(fā)的疫情可能是跟鴨胚成纖維細(xì)胞制備的疫苗受到污染有關(guān)[6]。此外，同感染病毒的雞生活在一起的鵪鶉也可以發(fā)生EDS，導(dǎo)致產(chǎn)蛋下降、蛋殼變薄。盡管該病主要在蛋雞或者鵪鶉中發(fā)生，鴨子、鵝、環(huán)頸雉、珍珠雞、鴿子以及野鳥中也能檢測到病毒或抗體。2001年，EDSV對匈牙利的小鵝造成了嚴(yán)重的急性呼吸疾病。受影響的雛鵝在4～20等日齡之間，主要癥狀包括厭食、精神沉郁、打噴嚏、咳嗽、呼吸困難、啰音等[7]?？肆_地亞報道一個農(nóng)場的種火雞群中發(fā)生了EDS，癥狀是蛋的產(chǎn)量和質(zhì)量明顯下降[8]。

EDSV可以通過母雞垂直傳播給小雞，也可以在雞與雞之間水平傳播。污染的雞蛋、蛋托或糞便是病毒傳播的主要來源。不過，有些疫情的暴發(fā)被認(rèn)為同接觸野鳥或者含有野鳥糞便的污水有關(guān)。

人工感染試驗顯示，母雞感染病毒2～6d后可以從鼻腔表面上皮檢測到核內(nèi)包涵體。感染后的第2～5天期間，全身淋巴組織中可以檢測到較低水平的病毒抗原。感染后的第3～5天期間可以觀察到炎癥病變，卵巢漏斗部可以檢測到病毒抗原。感染后的第8天，囊殼腺首次檢測到病毒復(fù)制，但病毒從未在消化道上皮細(xì)胞中被檢測到。肉雞種雞和褐殼蛋雞發(fā)病最為嚴(yán)重，白殼蛋雞發(fā)病較輕，死亡率一般很低。

垂直感染病毒的雞直到性成熟仍能保持無臨床癥狀的感染。發(fā)病時，最早出現(xiàn)的現(xiàn)象是蛋殼與正常的相比更白、更薄，接著出現(xiàn)產(chǎn)軟殼蛋和少殼蛋的現(xiàn)象。雞蛋形狀不規(guī)則，蛋殼表面粗糙。同正常雞蛋相比，少殼蛋蛋白較少，軟殼蛋呈水樣粘稠狀。通常，過一段時間后，雞群會恢復(fù)到正常的產(chǎn)蛋量水平。疫情一般持續(xù)3～8周。盡管EDS的癥狀很明顯，但診斷不能僅基于臨床表現(xiàn)，需要實驗室確診。因為有多種傳染性或非傳染性的病原也可以導(dǎo)致產(chǎn)蛋下降，降低雞蛋質(zhì)量。

盡管EDS的癥狀很明顯，但診斷不能僅基于臨床表現(xiàn)，需要實驗室確診。因為有多種傳染性或非傳染性的病原也可以導(dǎo)致產(chǎn)蛋下降，降低雞蛋質(zhì)量。此外，一些非傳染性的因素如飼養(yǎng)密度過高、飼料和飲水質(zhì)量差等因素也可以引起產(chǎn)蛋下降[9]。

病理剖檢沒有特別的病變，可以觀察到卵巢和輸卵管輕微萎縮。輸卵管和子宮（蛋殼腺）可以觀察到病理組織學(xué)變化，如上皮細(xì)胞嚴(yán)重變性、脫落。子宮腺體萎縮，異嗜性細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤。子宮、輸卵管峽部、陰道等部位的上皮細(xì)胞可觀察到細(xì)胞核內(nèi)包涵體。

4 腺病毒感染的診斷

對于家禽疾病的診斷一般首先基于病史、臨床癥狀和病理剖檢。這是對疾病診斷的重要步驟，但并不是最終的步驟。很多疾病在臨床癥狀和病變方面比較相似，需要實驗室診斷最終確診。實驗室診斷的方法可以是采用分離病毒的方法直接檢測病毒，也可以采用間接地檢測抗體法。以往，對于家禽腺病毒感染，大多數(shù)情況下，采用病理組織學(xué)觀察核內(nèi)包涵體，免疫熒光檢測抗原或者電鏡鑒定抗原的方法。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，PCR、Real-timePCR以及 REA等方法已被運用于檢測病毒DNA以及進一步對病毒鑒定和分型[10]。

采用雞胚肝細(xì)胞（CEL）以及雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)的方法分離病毒用于進一步鑒定以及判定病毒的致病性相當(dāng)重要，因為同一血清型病毒的不同分離株，其致病性差異很大。交叉中和實驗以及分子生物學(xué)方法對分離到的病毒進行分型或者確定新的血清型十分重要。

EDSV可以使用鴨胚、鵝胚或者細(xì)胞分離。易感細(xì)胞系包括鴨和雞胚肝細(xì)胞，鴨腎細(xì)胞核成纖維細(xì)胞。病毒可以直接從染病母雞的生殖道中分離到。

最常見的血清學(xué)檢測方法是用免疫擴散試驗檢測特定的抗原，但這種方法不夠敏感。特異性的ELISA以及IF（免疫熒光）實驗更為敏感。血清中和試驗可以用于檢測血清特異性的抗體，但耗時耗力，花費也較多。對血清學(xué)實驗結(jié)果的解釋比較困難，因為健康和患病的禽類都會存在針對AAV的抗體。

此外，采用雞紅細(xì)胞的血凝抑制實驗也可以用于檢測EDSV抗體。免疫膠體金技術(shù)檢測EDSV抗體的方法也已經(jīng)有報道[11]。

5 禽腺病毒感染的防控

5.1 防控IBH/HPS 良好的生物安全措施是防控感染首要也是最基本的措施。精心管理，加強禽舍環(huán)境及其設(shè)備的清理和消毒、限制來訪人員，做好疫苗的免疫接種工作在防控中也起著重要作用。

在具有高度感染壓力的國家，該病已經(jīng)通過疫苗得到較好地控制。疫苗通常采用病禽的肝臟，用福爾馬林滅活后制備，也有采用滅活的染毒細(xì)胞制備的[12]。有研究比較了兩種采用病禽肝臟組織制備的滅活疫苗。一種疫苗不使用佐劑，另一種疫苗經(jīng)氯仿提取福爾馬林滅活后，以石蠟作為佐劑。油乳劑疫苗對10日齡的雞進行皮下免疫，所提供的保護力達到了100%，一直到7周齡。不用佐劑的滅活疫苗的效果則相對較差。事實上，疫苗的實際效果，不同的研究報道差異很大。影響疫苗效果的因素也有很多，養(yǎng)禽場需要根據(jù)實際情況進行。用于防控雞包涵體肝炎（IBH）/心包積水綜合征（HPS）的疫苗也已有很多報道。多數(shù)情況下，雞包涵體肝炎（IBH）是通過垂直傳播引起的，疫苗在防控垂直感染方面有較好的效果。因為疫苗可以誘導(dǎo)母源抗體的產(chǎn)生[13]。有報道稱，對種禽先后免疫針對FAV-4和CAV的疫苗，可以有效地防控子代發(fā)生IBH/HPS。30～50周齡肉雞種雞免疫針對FAV-8和FAV-11感染的疫苗也能夠有效地保護子代。

5.2 防控EDS 除了良好的生物安全措施外，在蛋雞產(chǎn)蛋前使用滅活疫苗免疫對防止產(chǎn)蛋數(shù)量以及質(zhì)量下降十分重要。疫苗接種應(yīng)該在14～16周齡時開始，不過疫苗并不能完全抑制病毒通過糞便排毒，只能減少排毒量。