不同程度溶血對19項生化指標(biāo)的影響及校正方法的探討

陳洪燕 李遠(yuǎn)淼 張厚毅

（1 滕州市濱湖鎮(zhèn)衛(wèi)生院檢驗科，山東 滕州 277517；2 滕州市龍陽鎮(zhèn)衛(wèi)生院檢驗科，山東 滕州 277532；3 滕州市中心人民醫(yī)院檢驗科，山東 滕州 277599）

溶血是指血液標(biāo)本由于各種因素而引起的紅細(xì)胞破裂，使血紅蛋白及胞內(nèi)物質(zhì)進入血清，使血清呈紅色的現(xiàn)象[1]。實際工作中由于真空采血管負(fù)壓過大，水浴箱溫度過高，抽血速度過快，離心分離血清時轉(zhuǎn)速過高等多種原因，溶血現(xiàn)象時有發(fā)生，對臨床生化檢驗造成嚴(yán)重干擾，影響臨床生化檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。本文主要研究樣本不同程度溶血對生化項目檢測結(jié)果的干擾情況，并根據(jù)Hb濃度對檢驗結(jié)果進行校正，現(xiàn)總結(jié)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：抽取我院門診2016度11份30例健康體檢者血液10 m L，分別注入EDTA-K2抗凝試管、無抗凝劑試管中各5 m L，無肉眼可見的溶血、脂血、黃疸。

1.2 儀器與試劑：迪瑞CS-1200全自動生化分析儀，試劑由迪瑞公司提供的同一批號配套試劑，英國朗道質(zhì)控品；sysmex XS-900i全自動血液分析儀，并使用希森美康原裝配套試劑。檢測時儀器性能良好，質(zhì)控合格。

1.3 方法

1.3.1 將30份血液標(biāo)本以3000 r/m in離心10 m in，分離不抗凝試管血清和血細(xì)胞，并將血清分為H0（500 μL）、H1（490 μL）、H2（480 μL）、H3（460 μL）四管；分離抗凝試管血漿和紅細(xì)胞，留取紅細(xì)胞做實驗用。

1.3.2 紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌5次，棄去上清液，制備壓積紅細(xì)胞。吸取洗滌后的壓積紅細(xì)胞0.5 mL加0.5 m L去離子水，-20 ℃冰箱凍存2 h，然后37 ℃水浴箱內(nèi)完全融化，使標(biāo)本充分溶血，再以3000 r/min離心10 min，留取血紅蛋白上清液備用。

1.3.3 用sysmex XS-900i血液分析儀檢測上清液血紅蛋白濃度，如果紅蛋白濃度＞100 g/L，則加入適量去離子水，調(diào)整血紅蛋白濃度等于100 g/L。

1.3.4 用校正過的移液器準(zhǔn)確吸取濃度100 g/L血紅蛋白液10 μL、20 μL、40 μL、依次加入H1、H2、H3血清管中，混勻各管，H0（Hb=0 g/L）、H1（Hb=2 g/L、）H2（Hb=4 g/L）、H3（Hb=8 g/L）。

1.3.5 四組不同程度溶血標(biāo)本在迪瑞CS-1200全自動生化分析儀上檢測以下項目：ALT（丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶）、AST（天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶）、GGT（γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶）、TP（總蛋白）、ALB（白蛋白）、TB（總膽紅素）、DB（直接膽紅素）、GLU（葡萄糖）、CHO（總膽固醇、）TG（三酰甘油）、HDL-C（高密度脂蛋白膽固醇）、LDL-C（低密度脂蛋白膽固醇）、CR（肌酐）、UA（尿酸）、UREA（尿素）、LDH（乳酸脫氫酶）、 CK（肌酸激酶）、CK-MB（肌酸激酶同工酶）、α-HBDH（α羥丁酸）19項常用生化項目，記錄所有結(jié)果，比對，探討不同程度的溶血標(biāo)本對生化檢驗結(jié)果產(chǎn)生的影響。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法：采用SPSS23.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，數(shù)據(jù)采用±s表示，組間比較采用單因素分析t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 30份樣本未溶血和不同程度溶血19項生化指標(biāo)測定結(jié)果比較，見表1。

表1 19項生化指標(biāo)不同程度溶血標(biāo)本測定結(jié)果比較表（±s）

表1 19項生化指標(biāo)不同程度溶血標(biāo)本測定結(jié)果比較表（±s）

注：*表示與未溶組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05

項 目 H0 H1 H2 H3 ALT(U/L) 17.42±6.76 14.75±6.32 13.93±6.85 13.98±7.75 AST(U/L) 20.61±5.21 27.13±6.23 *32.10±6.87 *40.37±8.06 *GGT(U/L) 20.08±5.57 16.83±5.58 13.5±5.99 * 9.33±5.17 *TP(g/L) 70.88±4.22 73.09±4.25 75.72±4.31 *79.81±5.02 *ALB(g/L) 39.78±2.55 40.53±2.54 41.22±2.66 42.21±2.72 *TB(μmol/L) 15.87±5.74 14.06±5.73 12.14±5.42 *9.87±4.75 *DB(μmol/L) 5.85±1.83 5.29±1.85 4.49±1.69 * 3.31±1.54 *GLU(mmol/L)6.01±0.84 5.95±0.85 5.97±0.85 5.98±0.90 CHO(mmol/L)5.39±0.76 5.33±0.79 5.35±0.73 5.35±0.70 TG(mmol/L) 1.60±0.84 1.56±0.86 1.54±0.86 1.53±0.85 HDL-C(mmol/L)1.58±0.19 1.55±0.19 1.52±0.18 1.53±0.19 LDL-C(mmol/L)2.91±0.55 2.88±0.56 2.87±0.55 2.90±0.56 CR(μmol/L) 72.3±26.0 72.4±26.4 72.1±24.9 71.9±23.6 UA(μmol/L)288.6±63.9 273.3±63.7 264.8±62.4 254.8±61.7 UREA(mmol/L)4.32±1.08 4.30±1.07 4.29±1.00 4.33±1.01 LDH(U/L) 155.0±32.6 329.1±53.3 *512.3±61.8 *719.9±98.2 *CK(U/L) 71.0±30.5 88.9±31.3 *106.7±32.5 *127.4±36.5 *CK-MB(U/L)14.50±4.15 47.16±5.99 *82.83±13.11 *135.08±32.00 *α-HBDH(U/L)168.0±34.4 336.8±51.4 *493.0±81.8 *683.0±118.7 *

2.2 Hb濃度與各個生化指標(biāo)的相關(guān)性分析，見表2。

表2 Hb濃度與各個生化指標(biāo)的相關(guān)性分析表

2.3 通過spass軟件對Hb濃度與各個生化指標(biāo)的相關(guān)性分析，在α=0.05的檢驗水準(zhǔn)上，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義，對與Hb濃度有顯著相關(guān)的10項生化指標(biāo)進行回歸分析。以Hb濃度X為自變量，以各個生化指標(biāo)Y為因變量計算各個生化指標(biāo)的回歸方程，并對回歸方程進行驗證，結(jié)果見表3。

表3 10項生化指標(biāo)的回歸方程

3 討 論

臨床工作中，樣本溶血是生化檢驗過程中常見的干擾因素，檢測標(biāo)本的質(zhì)量直接影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。目前隨著全自動生化分析儀的廣泛應(yīng)用和方法特異性的不斷提高，采用雙波長和雙試劑以及設(shè)立樣本品空白等措施盡可能的減少溶血對測定指標(biāo)的影響和干擾，但還是難以避免溶血造成的假陽性和假陰性結(jié)果，檢驗人員應(yīng)詳細(xì)了解標(biāo)本溶血對各項檢驗結(jié)果的影響并采取適當(dāng)?shù)募m正措施[2]。

溶血對生化檢驗的干擾機制主要包括以下幾個方面：①血細(xì)胞內(nèi)高濃度物質(zhì)逸出，使測定結(jié)果增高，如AST、LDH、CK-MB、α-HBDH紅細(xì)胞內(nèi)濃度比血清中高出很多倍，輕微溶血即可使檢驗結(jié)果升高，并且隨著溶血程度的加深而逐漸增高。而GGT血細(xì)胞內(nèi)濃度則低于血清中，溶血相當(dāng)于血清被稀釋，使測定結(jié)果降低[3]。②血細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)進入血清后參與化學(xué)反應(yīng)引起其他物質(zhì)的濃度改變。在血清CK動力學(xué)測定中，因紅細(xì)胞來源的腺甘酸激酶（AK）參與指示反應(yīng)，使結(jié)果假性升高[4]，偶氮反應(yīng)測定膽紅素時，HB可競爭性抑制膽紅素與偶氮試劑的偶氮反應(yīng)，使測定值低于真實值[5]。③有色物質(zhì)對吸收光譜的干擾，血紅蛋白的顏色影響原實驗最佳波長的選擇，造成吸光度和散光度產(chǎn)生較大誤差，尤其是終點法影響更大[6]。在血清TP、ALB測定中，血紅蛋白可對檢驗產(chǎn)生正干擾，使結(jié)果升高。

本研究結(jié)果表明溶血可對AST、TP、ALB、LDH、CK、CKMB、α-HBDH檢測結(jié)果產(chǎn)生正干擾，使結(jié)果升高，對GGT、TB、DB產(chǎn)生負(fù)干擾，對結(jié)果的影響隨著溶血程度的加深而增大，與未溶血組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。溶血對生化指標(biāo)ALT、GLU、CHO、TC、HDL-C、LDL-C、CR、UA、UREA的檢測結(jié)果與未溶血組相比較無顯著差別，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。根據(jù)本文的實驗結(jié)果，我們對與Hb有線性相關(guān)的生化指標(biāo)計算出了二元回歸方程，并進行了驗證，可根據(jù)溶血樣本中Hb含量對結(jié)果進行校正。

校正后的結(jié)果顯示溶血程度較輕的樣本，相對接近真實值的結(jié)果。檢驗人員發(fā)現(xiàn)標(biāo)本有溶血時，可在儀器上檢測血紅蛋白濃度，判斷溶血對檢驗結(jié)果的影響；及時與臨床醫(yī)師溝通，對于采血困難的急救患者是有一定的參考意義[7]。

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