細胞周期蛋白E在白血病中的表達與臨床檢驗學研究

馬吉芳 赫俊雅 王鐿達 楊曉樨

（遼寧省遼陽市中心醫(yī)院檢驗科，遼寧 遼陽 111000）

由于腫瘤的發(fā)生與細胞周期的調控異常密切相關，因此目前對它的研究正成為腫瘤生物學研究的一個重要課題。細胞各個周期中以G1期最為重要，許多細胞外及細胞內增殖的調控物質主要作用于此。細胞周期蛋白E（CyclinE）為G1期的周期蛋白，也是周期過程的基本的和廣泛的調節(jié)因子。有關CyclinE在白血病中的作用，目前國內外研究的不多，國內僅有個別報道，而慢性粒細胞白血?。–ML）CyclinE表達國內外均未見研究報道。本院應用免疫組化方法檢測了152例急、慢性白血患者CyclinE表達，并探討其臨床檢驗學意義[1-2]。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：①本組白血病患者152例，男72例，女性80例，年齡4～75歲，平均年齡41.6歲。急性淋巴細胞白血?。ˋLL）48例，初治32例，復發(fā)4例，治療后緩解12例。急性非淋巴細胞白血?。ˋNLL）30例，M 2型4例，M 3型4例，M 4型8例，M 5型12例，M 6型2例，初治20例，治療后緩解10例。非霍奇金淋巴瘤/慢淋白血病（NHL/CLL）3例。慢性粒細胞白血病（CML）68例，慢性期28例，緩解期20例，急變/加速期20例。②正常對照組40例，男、女各20例，年齡20～45歲，平均年齡36.2歲。

1.2 檢測方法：①標本制備：取患者新鮮骨髓直接涂于防脫膠玻片上，干燥后，丙酮固定10 m in，置-20 ℃保存?zhèn)錂z，對照組用相同方法。②試劑：抗CyclinE單克隆抗體，DAB顯色劑，檸檬酸型抗原修復緩沖液均購于福建邁新生物技術公司。③CyclinE基因蛋白免疫組化檢測方法：采用免疫組化SP法，涂片經高溫高壓進行抗原修復后，用3% H2O2阻斷內源性過氧化物酶，10%非免疫羊血清阻斷非特異性抗原，一抗孵育2 h，二抗，三抗分別孵育20 min，DAB顯色，蘇木素復染，中性樹膠封片。以上操作均在室溫15～20 ℃下進行。

1.3 圖象分析：免疫組化圖象利用OIYNIPS BX51高清晰度彩色圖文分析系統(tǒng)，在光鏡下分析和采集數據圖象。

1.4 免疫組化結果判斷：CyclinE陽性反應均為胞核中出現(xiàn)棕色顆粒，在普通的生物顯微鏡下，每片計數200個細胞，計算陽性細胞百分率。“一”（0分）即陰性反應，“+”l分）為胞核1/2以下區(qū)域出現(xiàn)棕黃色顆粒，“＋+”（2分）為胞核1/2-2/3區(qū)域出現(xiàn)棕黃色顆粒，“＋+＋”（3分）為胞核中全部出現(xiàn)棕黃色顆粒，可呈片狀分布。

1.5 統(tǒng)計學處理：采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進行χ2檢驗，P＜0.05具有統(tǒng)計學差異。

2 結 果

2.1 本組152例白血病患者CyclinE表達結果見表1，結果顯示各組CyclinE陽性表達與對照組比較，均有顯著差異（P＜0.001），以ANLL表達最高，NHL/CLL6例全部強表達，因例數少，未行統(tǒng)計學處理。

表1 白血病患者CyclinE表達

2.2 CML不同病期CyclinE表達結果見表2，結果顯示慢性期、急變/加速期CyclinE陽性表達與正常對照組有顯著差異（P＜0.001），慢性期、急變/加速期CyclinE陽性表達明顯高于緩解期（P＜0.05）。

表2 CML不同病期CyclinE表達

表3 急性白血病治療前后CyclinE表達

2.3 急性白血病治療前后CyclinE表達結果見表3，結果顯示，初治（包括4例復發(fā)）患者CyclinE陽性表達與治療后緩解患者CyclinE表達有顯著差異（P＜0.05）。

3 討 論

白血病發(fā)生是由于正常骨髓造血細胞染色體多重損傷引起的復雜過程，其最終表現(xiàn)為細胞周期調控機制紊亂，造血細胞增殖分化異常。CyclinE屬G1期細胞周期的正調節(jié)因子，是CDK2調節(jié)亞基，參與G1/S轉換點功能調控，CyclinE高表達可促使細胞通過G1期，過度增殖形成腫瘤。CyclinE作為一種細胞周期調控因子參與白血病細胞周期調控，在腫瘤細胞的形成和發(fā)展中起了重要作用。CyclinE在多種腫瘤中有基因擴增和過表達，被證實是一種癌基因[3-4]。目前認為CyclinE在白血病中也可能為癌基因[5]。

臨床檢驗研究表明：檢測152例白血病患者，包括急性白血?。ˋLL、ANLL）、慢性白血?。–ML，NHL/CLL），各組CyclinE陽性表達與對照組比較均有顯著差異（P＜0.001），以ANLL表達最高，分析可能這組病例中M 4（8/30）、M 5（12/30）所占比例大有關，與Lida[6]報道結果一致。他的研究還報道CyclinE表達陽性的AML患者緩解率（CR）為67%，M 4，M 5的CR為50%，但CyclinE表達陰性的AML患者CR率為83%，M 4，M 5的CR率為88%，提示CyclinE蛋白水平對判斷預后有一定的意義。本院初步研究病例數較少，但臨床上ANLL中M 4，M 5型的療效差是否與CyclinE高表達有關，有待進一步探討。Wolow iec[7]用Westen blot方法分析25例CLL患者外周血淋巴細胞發(fā)現(xiàn)15/25CyclinE表達陽性，且表達模式與健康人不同，本院檢測了6例NHL/CLL患者骨髓CyclinE表達為100%強陽性，因例數少需進一步觀察[8]。

此外，本院觀察了急性白血病初治與緩解后CyclinE的表達，提示經治療緩解后CyclinE陽性表達下降。觀察了CML不同病期CyclinE表達，結果顯示慢性期、急變/加速期CyclinE表達增高，緩解期表達下降。提示CyclinE表達對白血病在監(jiān)測病情進展、指導預后方面有重要的臨床意義。造血細胞的周期調控異常是白血病發(fā)生過程中的關鍵事件，CyclinE在白血病的發(fā)生、發(fā)展中起了重要作用。但細胞周期調控極其復雜，全面揭示白血病細胞周期調控機制，需進一步深入研究。

[1]龍洋,邊彤,師帥.細胞周期蛋白E在白血病中的表達與前瞻性研究[J].中華醫(yī)學檢驗雜志,2015,38(3):163-166.

[2]周新.檢驗醫(yī)學考核指南[M].武漢:湖北科學技術出版社,2008:301-309.

[3]江山,陽光,蘇寧.細胞周期蛋白E與白血病的關系與臨床檢驗學研究[J].中國實驗診斷學,2015,38(3):168-169.

[4]Haas K.Malignant transformation by cyclinE and Ha-Ras corrdates with lower sensitivity towards induction of ce11 death but requires functional Myc and CDK4[J].Oncogene,2013,15(21):2615-2623.

[5]王穎,徐世榮.細胞周期E與白血病[J].中華血液學雜志,2015,36(4):219-221.

[6]Lida H.Overexpression of cyclin E in acute myelogenous leukemia[J].Blood,2013,106(9): 3707-3713.

[7]Wolowiec D.ExPresslon of cell cycle regulatory proteins in chronic lymphocytic leukemias,comparison with non-Hodgkin's lympomas and non-neoplastic lympboid tissue[J].Leukemia,2015,29(9):1382 -1388.

[8]白繼文,王長印.檢驗醫(yī)學問答[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2008:201-209.