• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    山核桃干腐病拮抗細(xì)菌的鑒定及其抑菌效果1)

    2018-01-15 05:58:16葛康康姚翰文潘佳亮郝昕馬玲
    關(guān)鍵詞:干腐病山核桃發(fā)酵液

    葛康康 姚翰文 潘佳亮 郝昕 馬玲

    (東北林業(yè)大學(xué),哈爾濱,150001)

    山核桃(Caryacathayensis)是胡桃科(Juglandaceae)山核桃屬(Carya)的一種干果樹種,落葉喬木[1],具有很高的經(jīng)濟(jì)價值和廣闊的發(fā)展前景[2]。山核桃干腐病是近幾年才出現(xiàn)的重要病害,不但影響山核桃的果實產(chǎn)量,而且會削弱樹勢,嚴(yán)重時甚至?xí)?dǎo)致樹木過早死亡,并造成重大經(jīng)濟(jì)損失,該病在浙江臨安、淳安、桐廬一帶發(fā)生比較普遍,植株發(fā)病率達(dá)80%~100%,最嚴(yán)重的造成全株或枝干干枯死亡[3]。2011年首次報道山核桃干腐病病原菌為Botryosphaeriadothidea,屬于子囊菌門葡萄座腔菌科(Botryosphaeriaceae)的葡萄座腔菌屬(Botryosphaeria)[4]。目前對山核桃干腐病的防治主要停留在物理防治和化學(xué)防治階段。章順來的研究表明,山核桃干腐病病部病斑少時,一般采取刮除病部后涂藥;病斑多時,病部劃傷后噴80% 402抗菌劑200倍液的方法進(jìn)行防治[5]。張傳清等報道V(戊唑醇)∶和V(腐霉利)=1∶5復(fù)配后對山核桃干腐病具有協(xié)同增效作用[6]?;瘜W(xué)藥劑的使用不僅會破壞生態(tài)環(huán)境,而且影響果實品質(zhì),甚至可能造成食品安全問題。為了能夠解決以上問題,尋找能夠高效防治山核桃干腐病的低毒或無毒生防制劑勢在必行。

    生物防治具有無毒、無殘留和無污染等特點(diǎn),枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)是一種嗜熱的好氧革蘭氏陽性菌[7-8],能夠抑制多種根部病害、枝干病害、葉花部病害的病原菌[9],是一種理想的生防微生物。范青等用從北京蘋果園土壤中分離的枯草芽孢桿菌B-912防治柑桔青霉病、綠霉病均取得較好的抑制效果[10],何紅等[11]發(fā)現(xiàn)來自辣椒體內(nèi)的枯草芽孢桿菌菌株對香蕉炭疽病菌菌絲生長、分生孢子形成及萌發(fā)等有較強(qiáng)的抑制作用,林東等發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌對水稻白葉枯病菌具有強(qiáng)烈的抑菌作用[12]。本研究在山核桃干腐病病原菌的培養(yǎng)過程中分離到1株具有抑菌活性的生防菌,并對其進(jìn)行了分離純化、抑菌活性測定和鑒定等方面的研究,以期為山核桃干腐病的生物防治提供參考。

    1 材料

    1.1 供試菌株

    山核桃干腐病病原菌來自浙江林業(yè)科技大學(xué)病理組病理實驗室,枯草芽孢桿菌菌株BS111分離自環(huán)境中,二者均保存在東北林業(yè)大學(xué)林學(xué)院。

    1.2 培養(yǎng)基

    馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA):馬鈴薯200 g,葡萄糖20 g,瓊脂20 g,蒸餾水1 000 mL,121 ℃高壓蒸汽滅菌20 min。

    牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基(LB):牛肉膏3 g,蛋白胨10 g,氯化鈉5 g,瓊脂20 g,水1 000 mL,pH=7.4~7.6,121 ℃高壓蒸汽滅菌20 min。

    LB液體培養(yǎng)基:牛肉膏3 g,蛋白胨10 g,氯化鈉5 g,水1 000 mL,pH=7.4~7.6,121 ℃高壓蒸汽滅菌20 min。

    2 研究方法

    2.1 拮抗菌BS111的分離純化

    在培養(yǎng)核桃干腐病菌的過程中,分離到1株對核桃干腐病菌有明顯抑制作用的拮抗細(xì)菌,采用劃線法用接種環(huán)挑取單菌落將其在牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基上進(jìn)行劃線培養(yǎng),28 ℃培養(yǎng)24 h后,對菌落大小、色澤、表面光滑度及邊緣形狀等進(jìn)行觀察,并挑取單菌落進(jìn)行純化[13],命名為BS111,將純化后的菌種在冰箱中4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    2.2 拮抗菌BS111的鑒定

    采用CTAB法提取DNA,PCR擴(kuò)增,經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳后將未純化產(chǎn)物送往北京生物工程科技有限公司進(jìn)行測序。測序引物為27F:5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′;1492R:5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′。根據(jù)16 S rDNA的測序結(jié)果,在NCBI上應(yīng)用BLAST進(jìn)行序列比對,結(jié)合GenBank中芽孢桿菌屬中的15個種的16 S rDNA,利用MEGA5.1軟件和ClustalW軟件繪制系統(tǒng)發(fā)育樹。

    根據(jù)《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》[15]《微生物學(xué)實驗手冊》[15]進(jìn)行鑒定,分別進(jìn)行接觸酶、V-P測定、厭氧生長、糖發(fā)酵產(chǎn)酸、醇發(fā)酵產(chǎn)酸、水解淀粉、檸檬酸鹽利用、苯丙氨酸脫氫酶、硝酸鹽還原、吲哚實驗、酪素水解、7% NaCl耐受度、pH=5.7耐受度、高溫65 ℃耐受度等生理生化鑒定。將生防菌在LB固體培養(yǎng)基上進(jìn)行劃線培養(yǎng),觀察菌落形態(tài),并進(jìn)行芽孢染色和鞭毛染色。

    2.3 拮抗菌BS111的抑菌活性測定

    采用平板對峙法進(jìn)行拮抗菌的抑菌活性測定[16]。用打孔器(Φ=4 mm)在培養(yǎng)3 d的山核桃干腐病病原菌菌落邊緣打取菌餅,接于PDA平板中央,在其四周距培養(yǎng)皿邊緣25 mm處接種拮抗菌,以不接拮抗菌為對照,于恒溫箱中25 ℃培養(yǎng),每個處理3個重復(fù)。測量抑菌圈直徑。

    2.4 不同發(fā)酵時間拮抗菌BS111發(fā)酵液抑菌活性的測定

    挑取拮抗菌BS111單菌落,接種到LB液體培養(yǎng)基中,150 r/min,25 ℃搖床振蕩培養(yǎng);每隔2 h取一次樣,測生長曲線(OD600)。取發(fā)酵液4 ℃、8 000 r/min、離心30 min,取上清液過0.22 μm濾膜,制成無菌濾液,每隔12 h取一次樣,測無菌濾液對山核桃干腐病病原菌抑菌活性;比較生長曲線和抑菌活性隨時間變化的關(guān)系,以及抑菌活性物質(zhì)積累的最佳培養(yǎng)時間,以未接菌的培養(yǎng)液為對照。

    抑菌率=(對照組菌絲直徑-試驗組菌絲直徑)/(對照組菌絲直徑-0.4)×100%。

    2.5 不同體積分?jǐn)?shù)拮抗菌BS111發(fā)酵液抑菌活性的測定

    取搖床培養(yǎng)72 h的無菌濾液溶于50 ℃ PDA,制成體積分?jǐn)?shù)為15.00%、10.00%、7.50%、5.00%、2.50%、1.25%的帶藥平板,用打孔器(Φ=4 mm)在培養(yǎng)3 d的山核桃干腐病病原菌菌落邊緣打取菌餅,接于帶藥平板中央,3 d后測菌絲直徑,并計算抑菌率,每組3次重復(fù)。

    2.6 拮抗菌BS111發(fā)酵液抑菌活性穩(wěn)定性的測定

    熱處理對發(fā)酵液抑菌活性的影響:取相同體積的6份發(fā)酵上清液通過0、10、20、30、40、50 ℃水浴鍋處理30 min,以未處理的無菌濾液為對照,過0.22 μm濾膜,測抑菌活性。

    酸堿處理對發(fā)酵液抑菌活性的影響:取相同體積的7份發(fā)酵上清液,分別用1 mol/L HCl和1 mol/L NaOH調(diào)節(jié)發(fā)酵上清液,pH值為3.0、4.5、5.5、6.5、7.5、8.0、9.0,靜置2 h后,再用1 mol/L HCl和1 mol/L NaOH調(diào)到pH為7.0,以未處理的無菌濾液為對照,過0.22 μm濾膜,測抑菌活性。

    紫外線處理對發(fā)酵液抑菌活性的影響:取相同體積的4份發(fā)酵上清液分別放在紫外光下照射15、30、60、120 min,以未處理的無菌濾液為對照,過0.22 μm濾膜,測抑菌活性。

    2.7 拮抗菌無菌濾液對山核桃干腐病病原菌菌絲生長的影響

    在培養(yǎng)3 d的山核桃干腐病病原菌菌落邊緣打取菌餅,接于帶有無菌濾液的PDA帶藥平板中央,以未接菌的培養(yǎng)液為對照,3 d后挑取菌絲在光學(xué)顯微鏡下觀察其形態(tài)變化。

    3 結(jié)果與分析

    3.1 拮抗菌BS111培養(yǎng)性狀

    在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上培養(yǎng)24 h的菌株(圖1),菌落為白色橢圓形,邊緣整齊,中間凹陷有褶皺,表面比較粗糙,不透明,在液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)2 d有菌膜產(chǎn)生,革蘭氏染色為陽性。

    圖1 拮抗細(xì)菌BS111的培養(yǎng)性狀

    3.2 拮抗菌BS111 16 S rDNA分子鑒定

    菌株BS111的16 S rDNA經(jīng)PCR擴(kuò)增得到1條約為1.5 kb的特征帶(圖2),將PCR后的片段送交北京生物工程進(jìn)行測序,測序結(jié)果表明,該菌株16 S rDNA序列全長為1 129 bp,該序列通過NCBI(http:

    www.ncbi.nlin.nili.gov)進(jìn)行BLAST比對,其中,BS111與JQ308575Bacillussubtilis的同源性最高,達(dá)到99%。

    M.2 kb Mark;B.BS111菌株。

    將得到的菌株BS111序列與Genbank中的枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌(B.cereus)、解淀粉芽孢桿菌(B.amyloliquefaciens)、甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌(B.methylotrophicus)、死谷芽孢桿菌(B.vallismortis)、貝萊斯芽孢桿菌(B.velezensis)等菌株的16 S rDNA序列進(jìn)行比對。從圖3的系統(tǒng)發(fā)育樹可看出,不同的芽孢桿菌種間自然地形成不同的分支,BS111位于枯草芽孢桿菌的分支中,且與登錄號為JQ308575的枯草芽孢桿菌的序列相似性高達(dá)100%。

    圖3 拮抗菌株BS111的16S rDNA序列系統(tǒng)發(fā)育樹

    3.3 拮抗菌BS111生理生化鑒定

    對菌株BS111各項生理生化指標(biāo)的測定結(jié)果表明,接觸酶反應(yīng)為陽性,V-P測定呈陽性,能夠利用葡萄糖和甘露醇,并且產(chǎn)酸,但不產(chǎn)氣,厭氧條件下不能生長,能夠利用檸檬酸鹽,不能形成吲哚,苯丙氨酸脫氫酶反應(yīng)為陰性,能夠水解淀粉,在7% NaCl培養(yǎng)基上能夠生長,在65 ℃高溫條件下不能生長,在pH=5.7的酸性條件下不能生長。通過與枯草芽孢桿菌進(jìn)行對比,發(fā)現(xiàn)BS111除不能在pH=5.7的酸性條件下生長外,其余都與枯草芽孢桿菌的生理生化指標(biāo)相同,故可以鑒定BS111為枯草芽孢桿菌。

    3.4 拮抗菌株BS111對山核桃干腐病病原菌的抑制作用

    通過平板對峙法可以看出,枯草芽孢桿菌BS111菌體能夠抑制山核桃干腐病病原菌的生長(圖4)。抑菌圈平均直徑為18 mm。

    圖4 拮抗菌BS111對山核桃干腐病病原菌的抑制作用

    3.5 拮抗菌BS111生長曲線及抑菌活性隨時間變化情況

    對拮抗菌BS111生長曲線進(jìn)行測定,以檢測菌體生長狀況。結(jié)果如圖5所示,枯草芽孢桿菌BS111在12~24 h為對數(shù)期,24 h后菌體數(shù)量進(jìn)入穩(wěn)定期,36 h后菌體進(jìn)入衰亡期。對不同時間點(diǎn)的無菌濾液進(jìn)行抑菌能力測定,無菌濾液在前12 h抑菌率幾乎為0,此時無菌濾液對山核桃干腐病病原菌幾乎無抑制效果,在24 h時抑菌率迅速增長至70.65%,在24~60 h,抑菌率變化在70.65%~77.85%,變化差異不明顯,在60~72 h,抑菌效果有明顯提高,最高抑菌率為83.26%。此結(jié)果表明,無菌濾液在不同時間段內(nèi)抑菌差異顯著(P<0.05)。

    圖5 拮抗菌株BS111生長曲線與無菌濾液抑菌率

    3.6 拮抗株BS111發(fā)酵液抑菌活性及其穩(wěn)定性

    對不同體積分?jǐn)?shù)發(fā)酵液抑菌活性的測定結(jié)果見圖6。隨著發(fā)酵液體積分?jǐn)?shù)的降低,抑菌率明顯降低,其中15%的抑菌效果最好,抑菌率為86.82%(表1),該拮抗菌的EC50為4.16%,回歸方程為y=1.942x-1.203,相關(guān)系數(shù)為0.969。

    表1 不同體積分?jǐn)?shù)拮抗菌株BS111發(fā)酵液的抑菌活性

    注:表中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差,同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

    0、10、20、30、40、50 ℃水浴分別處理30 min后的BS111無菌濾液對山核桃干腐病的抑菌活性見表2。從表2可以看出,用不同溫度處理過的無菌濾液抑菌效果有明顯區(qū)別。0 ℃處理后發(fā)酵上清液對山核桃干腐病病原菌的抑菌效果最好,抑菌率為(62.29±0.13)%,遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于對照組抑菌率(42.94±0.11)%,在0~20 ℃,抑菌率雖然有下降趨勢,但是都高于對照組,在30~50 ℃時,抑菌率和對照組差異不顯著。由此可以看出,該無菌濾液在0~20 ℃低溫條件下的抑菌效果比高溫條件下好,在30~50 ℃高溫條件下抑菌效果差異不明顯。

    a.15%的發(fā)酵液;b.10%的發(fā)酵液;c.7.5%的發(fā)酵液;d.5%的發(fā)酵液;e.2.5%的發(fā)酵液;f.1.25%的發(fā)酵液;CK.對照組。

    經(jīng)不同酸堿處理后的無菌濾液的抑菌活性有顯著變化。pH=3.0~5.5處理2 h后,抑菌率為(33.38±0.24)%~(36.59±0.28)%,明顯小于對照組抑菌率(40.49±0.35)%,經(jīng)pH=6.5~8.0處理2 h后抑菌率為40%~43%,與對照組差異不明顯,經(jīng)pH=9.0處理2 h后,抑菌率為(46.62±0.23)%,明顯大于對照組。由此可以看出,無菌濾液的抑菌活性隨著pH的升高,抑菌活性上升,且在pH=9.0時抑菌效果最好,無菌濾液在pH=6.5~8.0時抑菌活性穩(wěn)定。無菌濾液經(jīng)紫外處理后,抑菌率高于或接近對照組,并且隨著紫外處理時間的延長,抑菌效果有明顯提高,120 min時抑菌效果最好,抑菌率為(57.55±0.18)%。

    表2 拮抗菌株BS111發(fā)酵液抑菌活性穩(wěn)定性

    注:表中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差,同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

    3.7 拮抗處理后山核桃干腐病病原菌菌絲生長的顯微觀察

    對照組和處理組菌絲的顯微形態(tài)觀察結(jié)果表明,山核桃干腐病病原菌菌絲經(jīng)拮抗菌BS111無菌濾液處理后菌絲形態(tài)出現(xiàn)異常。對照組菌絲在生長過程中,菌絲細(xì)長,處理組菌絲表現(xiàn)出菌絲變粗,彎曲,有褶皺,部分原生質(zhì)體消失,菌絲頂端膨大變粗等特點(diǎn)(圖7)。

    a、b.為正常生長的菌絲;c、d.為發(fā)酵液處理過的菌絲。

    4 結(jié)論與討論

    目前,對山核桃干腐病的防治主要采用化學(xué)藥劑,但化學(xué)藥劑在防治病害的同時也對當(dāng)?shù)厣鷳B(tài)產(chǎn)生嚴(yán)重的影響,因此高效低毒的生防制劑產(chǎn)品成為山核桃生產(chǎn)發(fā)展的迫切需要[17]??莶菅挎邨U菌是一種非常廣譜的拮抗細(xì)菌,侯琿等發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌對番茄莖基腐爛病菌和葡萄灰霉病菌具有抑制作用[18],吳麗媛從土壤中分離出能夠抑制甜瓜細(xì)菌性果斑病的拮抗細(xì)菌枯草芽孢桿菌[19],吳輝等從土壤中分離到1株具有高效拮抗辣椒疫霉菌(Phytophthoracapsici)的生防菌Bs04[20],本研究分離到的拮抗菌BS111對山核桃干腐病病原菌具有較好的抑菌效果,經(jīng)鑒定拮抗菌BS111為枯草芽孢桿菌。關(guān)于枯草芽孢桿菌防治山核桃干腐病病的研究在國內(nèi)尚鮮見相關(guān)報道,這為山核桃干腐病生防制劑開發(fā)提供了材料。

    本研究通過對拮抗菌無菌濾液的抑制作用測定表明,拮抗菌無菌濾液能夠顯著抑制山核桃干腐病病原菌菌絲生長,且在發(fā)酵72 h時抑菌效果最好,這說明拮抗菌在培養(yǎng)過程中產(chǎn)生能夠抑制山核桃干腐病病原菌菌絲生長的次生代謝產(chǎn)物,由此表明拮抗菌BS111在大量發(fā)酵后對山核桃干腐病的防治具有很好的應(yīng)用價值。本研究對拮抗菌BS111進(jìn)行了鑒定,并對其拮抗作用和抑菌活性進(jìn)行了研究,而對其發(fā)酵條件的優(yōu)化、抗菌活性物質(zhì)的提取鑒定及田間防效還有待于進(jìn)一步深入研究。

    拮抗細(xì)菌在植物病害防治中起到非常重要的作用。林業(yè)上施用的生物抗生素或其他拮抗蛋白等和常規(guī)有機(jī)合成農(nóng)藥一樣,都要受到環(huán)境的影響[21]。在生物農(nóng)藥的活性成分分離、提純、濃縮等所有的生產(chǎn)加工過程中也都需要獲得其對光、熱等各種條件的穩(wěn)定性。本研究研究了其發(fā)酵產(chǎn)物在經(jīng)過紫外線、熱、酸堿等條件的處理后抗菌活性的變化,表明該拮抗菌具有很好的生防潛力。

    吳輝等[20]通過光學(xué)顯微鏡觀察Bs04對辣椒疫霉菌絲形態(tài)的影響,發(fā)現(xiàn)菌絲分支增多、頂端畸形、原生質(zhì)濃縮及生長緩慢等現(xiàn)象。本試驗顯微觀察抑菌作用的結(jié)果為菌絲變粗、彎曲、有褶皺、部分原生質(zhì)體消失、菌絲頂端膨大變粗等特點(diǎn),對于具體抑菌機(jī)理有待進(jìn)一步的研究。

    [1] 薛波.大別山山核桃品種類型及其品質(zhì)的研究[D].合肥:安徽農(nóng)業(yè)大學(xué),2013.

    [2] 張傳清,徐志宏,孫品雷,等.新病害:山核桃果實黑斑病病原菌的鑒定[J].植物保護(hù),2010,36(4):160-162.

    [3] 王璇.山核桃干腐病病原菌的鑒定及其系統(tǒng)發(fā)育分析[D].杭州:浙江農(nóng)林大學(xué),2013.

    [4] 王璇,馬良進(jìn),呂全,等.山核桃干腐病病原菌的鑒定[J].浙江農(nóng)林大學(xué)學(xué)報,2014,31(2):238-245.

    [5] 章順來.山核桃干腐病的防治[J].新農(nóng)村,2007(9):15.

    [6] 張傳清,徐志宏,孫品雷,等.基于侵染特性的山核桃干腐病防治技術(shù)[J].中國森林病蟲,2011,30(3):43-45,35.

    [7] OBAGWU J, KORSTEN L. Integrated control of citrus green and blue molds usingBacillussubtilisin combination with sodium bicarbonate or hot water[J]. Postharvest Biology and Technology,2003,28(1):187-194.

    [8] EMMERT EA, HANDELSMAN J. Biocontrol of plant disease: a (gram-) positive perspective[J]. FEMS Microbiol Lett,1999,171(1):1-9.

    [9] 楊佐忠.枯草桿菌拮抗體在植物病害生物防治中的應(yīng)用[J].四川林業(yè)科技,2001,22(3):41-44.

    [10] 范青,田世平,李永興,等.枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)B-912對采后柑桔果實青、綠霉病的抑制效果[J].植物病理學(xué)報,2000,30(4):343-101.

    [11] 何紅,蔡學(xué)清,關(guān)雄,等.辣椒內(nèi)生枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)BS-2和BS-1防治辣椒炭疽病研究[J].植物病理學(xué)報,2003,33(2):170-173.

    [12] 林東,徐慶,劉憶舟,等.枯草芽孢桿菌SO113分泌蛋白的抑菌作用及抗菌蛋白的分離純化[J].農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報,2001,9(1):77-80.

    [13] 鄧剛,屈星,陳秀蓉,等.甘肅番茄細(xì)菌性斑點(diǎn)病病原菌鑒定[J].植物保護(hù),2008,34(5):47-51.

    [14] 東秀珠,蔡妙英.常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊[M].北京:科學(xué)出版社,2001.

    [15] 周德慶.微生物學(xué)實驗手冊[M].上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,1986.

    [16] 賈鳳安,陳亮,陳立,等.大棚甜瓜三種主要真菌病害拮抗細(xì)菌的篩選與鑒定[J].植物保護(hù)學(xué)報,2010,37(6):505-510.

    [17] 翟慧者,胡同樂,陳曲,等.10種化學(xué)殺菌劑對蘋果樹腐爛病的防效評價[J].植物保護(hù),2012,38(3):151-154,171.

    [18] 侯琿,朱建蘭.枯草芽孢桿菌對番茄莖基腐病菌和葡萄灰霉病菌的抑制作用研究[J].甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2003,38(1):51-56.

    [19] 吳麗媛.甜瓜細(xì)菌性果斑病生防菌的篩選及其抑菌機(jī)理的初步研究[D].呼和浩特:內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué),2013.

    [20] 吳輝,潘夢武,高易宏,等.辣椒疫病生防菌的篩選、鑒定及其抑菌機(jī)理初探[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2015(7):1596-1599.

    [21] 朱昌雄,白新盛,張木.生物農(nóng)藥的發(fā)展現(xiàn)狀及前景展望[J].上海環(huán)境科學(xué),2002,21(11):654-657,661.

    猜你喜歡
    干腐病山核桃發(fā)酵液
    剝白菜幫或敲山核桃(詩學(xué)隨筆)
    紅豆(2022年9期)2022-11-04 03:14:10
    石榴干腐病及其防治技術(shù)研究進(jìn)展
    山核桃
    連翹內(nèi)生真菌的分離鑒定及其發(fā)酵液抑菌活性和HPLC測定
    桑黃纖孔菌發(fā)酵液化學(xué)成分的研究
    中成藥(2018年1期)2018-02-02 07:20:03
    蘋果干腐病咋防治
    云南省石榴干腐病病菌生物學(xué)特性研究及其防治藥劑篩選
    石榴干腐病的發(fā)生與防治
    山核桃
    HPLC與LC-MS/MS測定蛹蟲草發(fā)酵液中蟲草素的方法比較
    婷婷色麻豆天堂久久| 能在线免费看毛片的网站| 少妇的逼好多水| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产黄色视频一区二区在线观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 国产又色又爽无遮挡免| 亚洲国产高清在线一区二区三| 成人亚洲精品一区在线观看 | 欧美成人a在线观看| 亚洲国产最新在线播放| 在现免费观看毛片| 亚洲国产精品成人久久小说| 最近的中文字幕免费完整| 国产美女午夜福利| 国产片特级美女逼逼视频| 99热全是精品| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 如何舔出高潮| 国产精品伦人一区二区| 欧美潮喷喷水| av天堂中文字幕网| 最近中文字幕2019免费版| av在线观看视频网站免费| 视频区图区小说| 各种免费的搞黄视频| 久久久国产一区二区| 嫩草影院精品99| 麻豆国产97在线/欧美| 亚洲国产色片| 亚洲精品乱久久久久久| 七月丁香在线播放| 国产成年人精品一区二区| 久久久成人免费电影| 边亲边吃奶的免费视频| 九九在线视频观看精品| 久久鲁丝午夜福利片| 熟女av电影| 午夜免费男女啪啪视频观看| 久久久a久久爽久久v久久| 在线观看人妻少妇| 成人亚洲精品av一区二区| 国产亚洲一区二区精品| 在线免费十八禁| 亚洲最大成人手机在线| 校园人妻丝袜中文字幕| 听说在线观看完整版免费高清| 777米奇影视久久| 国产真实伦视频高清在线观看| tube8黄色片| 嫩草影院入口| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产伦理片在线播放av一区| 久久久久国产精品人妻一区二区| 久久久久久国产a免费观看| 国产乱人视频| 99久久精品一区二区三区| 国产老妇伦熟女老妇高清| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 中文天堂在线官网| 99视频精品全部免费 在线| www.av在线官网国产| 人妻一区二区av| 亚洲在久久综合| 18+在线观看网站| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 久热这里只有精品99| 男人添女人高潮全过程视频| 国产综合懂色| 亚洲人成网站高清观看| 日本三级黄在线观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 久久精品国产a三级三级三级| 中文字幕免费在线视频6| 极品教师在线视频| 久久精品久久久久久久性| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 一个人观看的视频www高清免费观看| 激情五月婷婷亚洲| 麻豆国产97在线/欧美| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 性色avwww在线观看| 亚洲,一卡二卡三卡| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲精品国产成人久久av| 国产成年人精品一区二区| 亚洲精品色激情综合| 国产成年人精品一区二区| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 美女国产视频在线观看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 99热网站在线观看| 亚洲综合色惰| 一本色道久久久久久精品综合| 亚州av有码| 精品午夜福利在线看| 亚洲精品乱久久久久久| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| av一本久久久久| 久久ye,这里只有精品| 亚洲国产欧美人成| 色哟哟·www| 久久ye,这里只有精品| 国产亚洲最大av| 99九九线精品视频在线观看视频| 成人特级av手机在线观看| 超碰av人人做人人爽久久| 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲内射少妇av| 国产男女内射视频| 欧美精品国产亚洲| 亚洲精品色激情综合| 亚洲怡红院男人天堂| 成人国产麻豆网| 日韩制服骚丝袜av| 我的女老师完整版在线观看| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲精品,欧美精品| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 亚洲精品aⅴ在线观看| 天美传媒精品一区二区| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 国产男人的电影天堂91| 久久久国产一区二区| 成人漫画全彩无遮挡| 婷婷色综合www| 秋霞在线观看毛片| 亚洲成人一二三区av| 亚洲精品一区蜜桃| 99久久人妻综合| 成年女人在线观看亚洲视频 | 永久免费av网站大全| 久久久久久九九精品二区国产| 蜜臀久久99精品久久宅男| 午夜福利高清视频| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 搡女人真爽免费视频火全软件| 国内揄拍国产精品人妻在线| 欧美bdsm另类| 看非洲黑人一级黄片| 亚洲自偷自拍三级| 一级片'在线观看视频| 精品久久国产蜜桃| 91久久精品国产一区二区三区| 天美传媒精品一区二区| 舔av片在线| 一区二区三区四区激情视频| 国产成人a∨麻豆精品| 国产精品久久久久久av不卡| 天天躁日日操中文字幕| 美女cb高潮喷水在线观看| 日韩亚洲欧美综合| 最近的中文字幕免费完整| 国产精品蜜桃在线观看| 新久久久久国产一级毛片| 成年女人在线观看亚洲视频 | 国产伦精品一区二区三区视频9| 精华霜和精华液先用哪个| 国产精品久久久久久精品电影| 中国三级夫妇交换| 精品一区在线观看国产| 丝袜美腿在线中文| 亚洲高清免费不卡视频| 美女cb高潮喷水在线观看| 在线 av 中文字幕| 成人鲁丝片一二三区免费| 伊人久久国产一区二区| 国产免费又黄又爽又色| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 一个人看视频在线观看www免费| 老司机影院毛片| 两个人的视频大全免费| 99热国产这里只有精品6| 大码成人一级视频| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲av免费高清在线观看| 麻豆成人午夜福利视频| 日本黄色片子视频| 夜夜爽夜夜爽视频| 国产精品不卡视频一区二区| 五月开心婷婷网| 精品国产露脸久久av麻豆| 日韩人妻高清精品专区| 99久久精品热视频| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 久久国产乱子免费精品| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产成年人精品一区二区| 亚洲av一区综合| 好男人在线观看高清免费视频| 一级av片app| 99热这里只有是精品50| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 最近中文字幕2019免费版| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 成人国产av品久久久| 99热国产这里只有精品6| 亚洲自偷自拍三级| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 日韩成人av中文字幕在线观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 秋霞在线观看毛片| 97在线人人人人妻| 国产午夜精品一二区理论片| 国产成人精品福利久久| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲av国产av综合av卡| 在线观看一区二区三区| 有码 亚洲区| 性插视频无遮挡在线免费观看| 最近2019中文字幕mv第一页| 别揉我奶头 嗯啊视频| 欧美高清成人免费视频www| 身体一侧抽搐| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 69av精品久久久久久| 内地一区二区视频在线| 国产av码专区亚洲av| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 在线免费十八禁| 国产高清三级在线| 人妻 亚洲 视频| 男女无遮挡免费网站观看| 亚洲,欧美,日韩| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲成人av在线免费| 欧美日韩综合久久久久久| av国产免费在线观看| 在线观看三级黄色| av卡一久久| 熟妇人妻不卡中文字幕| 在线精品无人区一区二区三 | 亚洲性久久影院| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 99热国产这里只有精品6| 亚洲欧洲日产国产| 国产精品久久久久久av不卡| 国产中年淑女户外野战色| av在线老鸭窝| 人妻夜夜爽99麻豆av| 一级毛片 在线播放| 我的女老师完整版在线观看| 观看美女的网站| 男人爽女人下面视频在线观看| 久久久久久久国产电影| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 欧美 日韩 精品 国产| 免费人成在线观看视频色| 九草在线视频观看| 神马国产精品三级电影在线观看| 国产精品av视频在线免费观看| 深爱激情五月婷婷| 一本一本综合久久| 又爽又黄无遮挡网站| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲最大成人中文| 三级国产精品欧美在线观看| 欧美日韩精品成人综合77777| 国国产精品蜜臀av免费| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 成年版毛片免费区| 国产爱豆传媒在线观看| 成人国产麻豆网| 成人特级av手机在线观看| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲精品第二区| 直男gayav资源| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 少妇高潮的动态图| 日韩一本色道免费dvd| 精品久久久久久电影网| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 欧美zozozo另类| 韩国av在线不卡| 亚洲人成网站高清观看| 黄色配什么色好看| 边亲边吃奶的免费视频| 国产精品久久久久久精品电影| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 在现免费观看毛片| 日本一本二区三区精品| 身体一侧抽搐| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 一二三四中文在线观看免费高清| 最近的中文字幕免费完整| 乱码一卡2卡4卡精品| 内射极品少妇av片p| 精品国产乱码久久久久久小说| 久久97久久精品| 直男gayav资源| 人妻夜夜爽99麻豆av| 亚洲av一区综合| 男女下面进入的视频免费午夜| 亚洲国产精品成人综合色| 一级爰片在线观看| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产成人精品一,二区| 国产高潮美女av| 亚洲,一卡二卡三卡| 99久久精品一区二区三区| 99久久精品热视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 欧美性感艳星| 成人亚洲精品av一区二区| 日韩欧美 国产精品| 中国国产av一级| 韩国高清视频一区二区三区| 欧美最新免费一区二区三区| 高清av免费在线| 91精品国产九色| 久久精品人妻少妇| 99久久精品国产国产毛片| 国产伦在线观看视频一区| 七月丁香在线播放| 国产v大片淫在线免费观看| 制服丝袜香蕉在线| 国产成人a∨麻豆精品| 免费av观看视频| 亚洲av.av天堂| 日韩一区二区三区影片| 寂寞人妻少妇视频99o| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 精品视频人人做人人爽| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 国产美女午夜福利| 在线天堂最新版资源| 校园人妻丝袜中文字幕| 一级毛片aaaaaa免费看小| 亚洲av成人精品一二三区| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | tube8黄色片| 欧美日韩精品成人综合77777| 午夜爱爱视频在线播放| 成人免费观看视频高清| 一级毛片电影观看| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲精品aⅴ在线观看| 国精品久久久久久国模美| 特大巨黑吊av在线直播| 天天躁日日操中文字幕| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产精品国产三级国产专区5o| 午夜视频国产福利| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 我要看日韩黄色一级片| 韩国高清视频一区二区三区| 国产精品人妻久久久久久| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 一边亲一边摸免费视频| 2021少妇久久久久久久久久久| 精品人妻一区二区三区麻豆| 99视频精品全部免费 在线| av免费在线看不卡| 婷婷色综合www| 亚洲av成人精品一区久久| 免费观看在线日韩| 亚洲精品色激情综合| 亚洲最大成人手机在线| 成人美女网站在线观看视频| 精品国产露脸久久av麻豆| 日韩大片免费观看网站| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 精品酒店卫生间| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 免费观看无遮挡的男女| 高清毛片免费看| av福利片在线观看| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 99久久人妻综合| 国产成人午夜福利电影在线观看| 成年版毛片免费区| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| av黄色大香蕉| 欧美xxⅹ黑人| 麻豆国产97在线/欧美| 国产成人aa在线观看| 午夜视频国产福利| 神马国产精品三级电影在线观看| 国产高清国产精品国产三级 | 久久久久久国产a免费观看| 人妻少妇偷人精品九色| 美女被艹到高潮喷水动态| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 夫妻午夜视频| 久久人人爽人人片av| 尾随美女入室| 欧美日韩精品成人综合77777| 亚洲av一区综合| 如何舔出高潮| av福利片在线观看| 国产一区亚洲一区在线观看| 午夜爱爱视频在线播放| 午夜免费观看性视频| 国产黄色免费在线视频| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 晚上一个人看的免费电影| 看免费成人av毛片| 成人国产麻豆网| 高清欧美精品videossex| 青春草视频在线免费观看| 午夜日本视频在线| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 午夜激情福利司机影院| 特级一级黄色大片| 亚洲国产av新网站| 男人和女人高潮做爰伦理| 波多野结衣巨乳人妻| 国产极品天堂在线| 最近中文字幕高清免费大全6| 99久久人妻综合| 国产精品一区二区性色av| 最近中文字幕高清免费大全6| 免费黄频网站在线观看国产| 国产亚洲5aaaaa淫片| 老司机影院成人| 白带黄色成豆腐渣| 免费电影在线观看免费观看| 免费观看的影片在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 黄片wwwwww| 毛片女人毛片| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 久久国产乱子免费精品| 精品久久久精品久久久| a级一级毛片免费在线观看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 嫩草影院新地址| 亚洲天堂国产精品一区在线| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产亚洲最大av| 中文字幕制服av| 大陆偷拍与自拍| 国产精品三级大全| 少妇 在线观看| 免费大片黄手机在线观看| 日日撸夜夜添| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 网址你懂的国产日韩在线| 在线观看三级黄色| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲经典国产精华液单| 久久久国产一区二区| 干丝袜人妻中文字幕| 欧美日韩综合久久久久久| 一级片'在线观看视频| 干丝袜人妻中文字幕| 国产有黄有色有爽视频| 青春草亚洲视频在线观看| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产老妇女一区| 激情五月婷婷亚洲| 欧美高清性xxxxhd video| 国产精品一区二区性色av| 久久久久久久精品精品| 国产一区有黄有色的免费视频| 黄片无遮挡物在线观看| 精品久久久精品久久久| 欧美高清成人免费视频www| 搡女人真爽免费视频火全软件| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产探花极品一区二区| 黑人高潮一二区| 久热久热在线精品观看| av.在线天堂| 欧美一区二区亚洲| 日本一本二区三区精品| www.色视频.com| 在线免费观看不下载黄p国产| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 黑人高潮一二区| 国产精品久久久久久久久免| 欧美区成人在线视频| 听说在线观看完整版免费高清| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产精品偷伦视频观看了| 男插女下体视频免费在线播放| 日韩在线高清观看一区二区三区| 美女国产视频在线观看| 成年免费大片在线观看| 欧美三级亚洲精品| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产色婷婷99| 精华霜和精华液先用哪个| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产精品一区二区在线观看99| 欧美国产精品一级二级三级 | 亚洲精品日韩在线中文字幕| 精品久久久精品久久久| 欧美人与善性xxx| 国产亚洲91精品色在线| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 22中文网久久字幕| 97热精品久久久久久| 国产毛片在线视频| 啦啦啦在线观看免费高清www| 中文字幕制服av| 免费观看av网站的网址| 日韩三级伦理在线观看| 成人二区视频| av网站免费在线观看视频| 丝袜美腿在线中文| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲av欧美aⅴ国产| 综合色丁香网| 久久久a久久爽久久v久久| 永久网站在线| 嫩草影院新地址| 另类亚洲欧美激情| 黑人高潮一二区| 内地一区二区视频在线| 免费看a级黄色片| 亚洲国产色片| 亚洲成人av在线免费| 久久久久久久精品精品| 久久久欧美国产精品| 黑人高潮一二区| 高清在线视频一区二区三区| 亚洲精品日韩av片在线观看| 免费黄色在线免费观看| av.在线天堂| 一区二区三区免费毛片| 岛国毛片在线播放| 国产精品精品国产色婷婷| 青春草视频在线免费观看| av免费在线看不卡| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 欧美日韩在线观看h| 免费黄色在线免费观看| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产在视频线精品| 亚洲色图av天堂| 嫩草影院新地址| 波多野结衣巨乳人妻| 在线观看三级黄色| 中文在线观看免费www的网站| 少妇丰满av| 成人二区视频| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 麻豆成人午夜福利视频| 18+在线观看网站| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 久久国产乱子免费精品| 国产中年淑女户外野战色| 永久免费av网站大全| 日韩欧美精品免费久久| 女人久久www免费人成看片| 校园人妻丝袜中文字幕| 91精品一卡2卡3卡4卡| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 成人美女网站在线观看视频| 亚洲伊人久久精品综合| 国产精品久久久久久久久免| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产 精品1| 成人毛片60女人毛片免费| 美女cb高潮喷水在线观看| 日本黄大片高清| 国产美女午夜福利| 蜜臀久久99精品久久宅男| 超碰97精品在线观看| 草草在线视频免费看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲内射少妇av| 成年女人在线观看亚洲视频 | 亚洲人成网站在线播| 久久精品国产自在天天线| 欧美日韩亚洲高清精品| 看非洲黑人一级黄片| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 日本与韩国留学比较| 色视频www国产| 精品人妻视频免费看| 欧美丝袜亚洲另类| 亚洲精品自拍成人| 人妻系列 视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 99热6这里只有精品| 国产极品天堂在线| 国产精品一二三区在线看| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 国产视频内射| 亚洲自拍偷在线| 国产精品蜜桃在线观看| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 亚洲人成网站在线播| 亚洲国产av新网站| 免费黄频网站在线观看国产| 97超视频在线观看视频| 免费少妇av软件| 五月玫瑰六月丁香| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产男女内射视频| 波多野结衣巨乳人妻| 中国国产av一级| 国产欧美亚洲国产| 六月丁香七月| 色网站视频免费| 午夜福利视频1000在线观看| av在线蜜桃| 国产精品一区www在线观看| 中文字幕av成人在线电影| 久久人人爽人人片av| 黄片无遮挡物在线观看| 极品教师在线视频| 精品久久久久久电影网|