痛瀉安腸方對(duì)腹瀉型腸易激綜合征模型大鼠NGF/PLC-γ/TRPV1信號(hào)通路表達(dá)的干預(yù)效應(yīng)*

韓亞飛 石 磊 賈博宜 毛堂友 郭 一 王允亮 謝添弘 陳 晨 譚 祥 李軍祥 △

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院，北京 100078）

腹瀉型腸易激綜合征（IBS-D）為功能性胃腸道疾病，以腹痛、腹瀉為主要臨床表現(xiàn)，但缺乏可解釋的病理改變。目前，IBS-D的發(fā)病機(jī)制尚不明確，研究證實(shí)內(nèi)臟敏感性增加是IBS-D發(fā)病的關(guān)鍵因素［1-2］。神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）作為重要的參與痛覺(jué)過(guò)敏的物質(zhì)，介導(dǎo)的NGF/激活磷脂酶C-γ （PLC-γ）/瞬時(shí)受體電位香草酸亞型-1（TRPV1）信號(hào)通路在IBS-D的發(fā)病中發(fā)揮著重要作用。因此，本研究以NGF/PLC-γ/TRPV1信號(hào)通路為切入點(diǎn)，探討痛瀉安腸方治療IBS-D內(nèi)臟高敏感性的作用機(jī)制?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康雄性SD大鼠72只，SPF級(jí)，體質(zhì)量（120±20） g，由斯貝福（北京）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司提供，合格證號(hào)SCXK（京）2016-0002，飼養(yǎng)在北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院動(dòng)物中心，許可證編號(hào)SYXK（京）2014-0008。普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。

1.2 試藥與儀器 痛瀉安腸方水煎劑（炒白術(shù)15 g，炮姜 9 g，炒白芍 12 g，烏梅 9 g，蜘蛛香 6 g，黃連 6 g，蟬蛻 6 g，0.5 g 生藥/mL），匹維溴銨片（得舒特），中藥飲片由北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院中藥房提供，陽(yáng)性藥物匹維溴銨由法國(guó)蘇威特制藥公司生產(chǎn)（批號(hào)H20070059）。乙酸（北京化學(xué)試劑公司，貨號(hào)CAS64-19-7）；液體石蠟 （北京化學(xué)試劑公司）；MEDEX中心靜脈導(dǎo)管 （單腔）（美國(guó)）；BARD-FOLEY雙腔兒科導(dǎo)尿管 （美國(guó)）；TRNzol總RNA提取試劑（天根生化科技有限公司，貨號(hào)DP405-02）；消除gDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒 （寶生物公司，貨號(hào)RR047B）、Perfect Real time染料法實(shí)時(shí)熒光定量試劑盒（寶生物公司，貨號(hào)RR82LR）、DL2000 DNA Marker（寶生物公司，貨號(hào) 3427Q）；RIPA 總蛋白提取試劑盒（Sigma公司，貨號(hào)Cat No.R0278）、苯甲基磺酰氟（Sigma公司，貨號(hào) Cat No.PMSF-RO）、BCA 蛋白定量試劑盒（Sigma公司，貨號(hào)Cat.No.BCA1）；蛋白酶抑制劑 （Roche公司，貨號(hào)Cat No.11697498001）；GAPDH鼠單抗（天津銳爾康生物科技有限公司，貨號(hào)Cat No.REK0005）；山羊抗兔 IgG（H+L，）/HRP（Jackson公司，貨號(hào) Cat No.111 035003）、山羊抗鼠 IgG（H+L）/HRP（Jackson 公司，貨號(hào) Cat No.115035003）。實(shí)驗(yàn)儀器：BT224S電子天平（德國(guó)Sartouris公司）；QL-902渦旋振蕩儀（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）；NANODROP 2000分光光度計(jì) （Therno scientific公司）；ABI7500熒光定量PCR儀 （美國(guó)Applied Biosystems公司）；NuPAGE蛋白電泳系統(tǒng) （美國(guó)Thermo公司）；Centrifuge 5415D 離心機(jī)（Eppendorf公司）；MultiSkan3酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo公司）；Mini Ge Tank電泳儀（Therno scientific公司）。

1.3 分組與造模 制備模型前運(yùn)用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為空白組、模型組、痛瀉安腸方高劑量組（按正常人用標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量2倍換算）、痛瀉安腸方中劑量組（按正常人用標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量換算）、痛瀉安腸方低劑量組（按正常人用標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量1/2倍換算）和匹維溴銨組，每組12只。空白組和模型組給予等體積0.9%氯化鈉注射液灌胃，中藥組給予痛瀉安腸方水煎劑13.20 g/（kg·d）、6.60 g/（kg·d）、3.30 g/（kg·d）灌胃治療，匹維溴銨組給予20mg/（kg·d）的水溶液等體積灌胃治療。模型制備方法如下。 1）冰醋酸灌腸：參照 AL-Chaer ED［3］的造模方法，將大鼠倒置，用石蠟將中心靜脈導(dǎo)管潤(rùn)滑，將0.5%的冰醋酸經(jīng)肛門插入距肛緣3～5 cm處，為防止冰醋酸漏出，用手按住肛門約1min，灌注量從0.2mL開(kāi)始，逐漸增加至0.7 mL，持續(xù)2周。2）球囊直腸刺激：用石蠟將雙腔導(dǎo)尿管球囊端潤(rùn)滑，經(jīng)肛門插入距肛緣 2～3 cm 處，向球囊中充氣 1.5～2.0 mL/次，以大鼠出現(xiàn)腹部收縮為度，共擴(kuò)張3次，同時(shí)給予夾尾刺激，持續(xù)時(shí)間3～5min，持續(xù)2周。在冰醋酸灌腸、球囊直腸刺激聯(lián)合夾尾刺激的同時(shí)予番瀉葉濃縮劑［0.5 g/mL）灌胃，給藥體積為 20mL/（kg·d）］，持續(xù) 4 周。

1.4 標(biāo)本采集與檢測(cè) 末次給藥后，將大鼠禁食禁水24 h，用10%水合氯醛（3 mL/kg）腹腔注射麻醉，取距離大鼠肛門約8 cm處的結(jié)腸組織，放入凍存管內(nèi)，經(jīng)生理鹽水沖洗干凈后置于液氮內(nèi)凍存，之后放入-80℃冰箱保存待測(cè)。1）一般情況：分別觀察大鼠的精神狀態(tài)、進(jìn)食、體質(zhì)量、活動(dòng)情況、毛發(fā)及大便性狀等情況。2）內(nèi)臟敏感性評(píng)價(jià)：腹壁撤退反射（AWR）評(píng)分檢測(cè)大鼠內(nèi)臟敏感性。本實(shí)驗(yàn)共42 d，分別于第28、42日對(duì)各組大鼠進(jìn)行AWR評(píng)分，評(píng)分前將大鼠24 h禁食不禁水。具體操作：在10%水合氯醛（3mL/kg）腹腔注射麻醉狀態(tài)下，將石蠟油浸潤(rùn)后的雙腔導(dǎo)尿管球囊端插入距肛緣約1.0 cm的位置，用膠帶將導(dǎo)管固定在大鼠尾巴根部，將其放入特制的透明觀察箱內(nèi)，大鼠在該箱內(nèi)不能轉(zhuǎn)身只能前后活動(dòng)，待其適應(yīng)30min后開(kāi)始向球囊內(nèi)充氣擴(kuò)張腸道，容量分別為1.0、1.5、2.0 mL，每次間隔10 min。每只大鼠重復(fù)上述步驟3次，取3次的平均值。AWR評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)［4］：0分，結(jié)直腸擴(kuò)張刺激時(shí)大鼠情緒基本穩(wěn)定；1分，給予刺激時(shí)變得開(kāi)始不穩(wěn)定，偶爾扭動(dòng)頭部；2分，給予刺激時(shí)腹背部肌肉輕微收縮但腹部未抬離地面；3分，刺激時(shí)腹背部肌肉較強(qiáng)烈收縮并出現(xiàn)腹部抬離地面的情況；4分，腹部肌肉強(qiáng)烈收縮，腹部呈弓形，并把腹部、會(huì)陰部抬離地面。3）腹瀉評(píng)價(jià)：糞便Bristol分級(jí)評(píng)分和糞便含水量檢測(cè)大鼠的腹瀉情況。分別于第28、42日對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行糞便Bristol分級(jí)評(píng)分，同期采集大鼠 4 h（8∶00～12∶00am）糞便并稱重（濕重），干燥后再稱重（干重），計(jì)算出各組大鼠在治療前后其糞便含水量的變化，正常組同期觀察。 糞便含水量（%）＝（濕重-干重）/濕重×100%。 糞便Bristol分級(jí)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)［5］：1 型分散的硬塊，如堅(jiān)果；2 型臘腸狀，成塊的；3型臘腸狀，表面有裂縫；4型臘腸狀或蛇狀，光滑而柔軟；5型柔軟團(tuán)塊，邊緣清楚；6型絨狀便，邊緣不清，或糊狀糞；7型水樣糞，無(wú)固狀物。4）結(jié)腸NGF、PLC-γ和TRPV1的檢測(cè)：采用Western blot檢測(cè)NGF、PLC-γ和TRPV1的表達(dá)。先進(jìn)行蛋白提取，加入0.1 M PMSF母液，預(yù)冷RIPA蛋白抽提試劑，腸組織以100mg加入200μL裂解液為基準(zhǔn)，充分勻漿，在冰上孵育30min，4℃離心，離心完成后取上清液；加入BSA標(biāo)準(zhǔn)液，檢測(cè)樣品蛋白含量；以RIPA調(diào)整蛋白濃度，根據(jù)目的蛋白的分子量，配制濃度為5%的濃縮膠，分離電泳，濕轉(zhuǎn)法進(jìn)行轉(zhuǎn)膜，封閉，用3%BSA-TBST 稀釋一抗，NGF （1∶500），PLC-γ （1∶1000），TRPV1（1∶1000），用 5%脫脂奶粉-TBST 稀釋一抗種屬對(duì)應(yīng)二抗，山羊抗兔IgG（H+L）HRP和山羊抗小鼠IgG（H+L）-HRP，（1∶20000），TBST 洗膜，定影；加 GAPDH鼠單抗，加入二抗，洗膜后進(jìn)行凝膠圖像分析，最終得出數(shù)值。 5）結(jié)腸 NGF、PLC-γ、TRPV1mRNA 的檢測(cè)：采用 Real-Time PCR 檢測(cè) NGF、PLC-γ、TRPV1 mRNA的表達(dá)。進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，用超純RNA提取試劑盒進(jìn)行組織樣本RNA提取，使用NanoDrop ND-2000測(cè)定RNA濃度和純度，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA后再進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以2-△△ct作為目地基因?qū)?shù)據(jù)進(jìn)行相對(duì)定量分析。NGF、PLC-γ、TRPV1、GAPDH 引物序列見(jiàn)表 1。

表1 NGF、PLC-γ、TRPV1、GAPDH 引物序列

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用IBM SPSSStatistics 22.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，對(duì)符合正態(tài)分布且方差齊的數(shù)據(jù)，其組間差異采用單因素方差分析，繼以LSD-t檢驗(yàn)方法進(jìn)行兩兩比較，不服從正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)采用非參數(shù)檢驗(yàn)，繼以Games-Howell檢驗(yàn)方法進(jìn)行兩兩比較。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 一般情況 實(shí)驗(yàn)期間，各組無(wú)大鼠死亡?？瞻捉M大鼠精神狀態(tài)良好，反應(yīng)靈敏，體質(zhì)量增加，飲食正常，活潑好動(dòng)，毛發(fā)光澤整齊，大便呈顆粒狀。造模開(kāi)始第3日起，除空白組外，大鼠精神略顯萎靡，體質(zhì)量增長(zhǎng)緩慢或略下降，食量減少，活動(dòng)減弱，毛發(fā)凌亂少光澤（個(gè)別大鼠伴見(jiàn)不同程度的脫毛情況），大便稀爛，肛門周圍被稀便沾染。經(jīng)灌胃治療后，與模型組相比，各治療組大鼠精神狀況、毛發(fā)光澤、進(jìn)食、活動(dòng)情況及體質(zhì)量等均有不同程度的好轉(zhuǎn)，糞便性狀由糊狀便最終轉(zhuǎn)為顆粒狀。

2.2 各組大鼠治療前后AWR評(píng)分比較 見(jiàn)表2。造模結(jié)束后，球囊充氣量為1.0mL時(shí)，低劑量、中劑量和得舒特組與空白組大鼠相比，AWR評(píng)分均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；充氣量為1.5 mL時(shí)，與空白組大鼠相比，中劑量、高劑量組AWR評(píng)分存在差異（P＜0.05），模型組、低劑量和得舒特組AWR評(píng)分有顯著性差異（P＜0.01）；充氣量為2.0mL時(shí)，低劑量組與空白組大鼠相比，AWR評(píng)分升高（P＜0.05）。治療結(jié)束后，與空白組大鼠相比，模型組大鼠AWR評(píng)分均升高（P＜0.05或P＜0.01）。與模型組大鼠相比，球囊充氣量為1.0mL時(shí)，低劑量和高劑量組大鼠AWR評(píng)分均降低（P＜0.05）；充氣量為 1.5 mL 時(shí)，低、中、高劑量組和得舒特組大鼠AWR評(píng)分均明顯降低（P＜0.01）；充氣量為2.0mL時(shí)，低劑量和中劑量組大鼠AWR評(píng)分均降低（P＜0.05）。

表2 各組大鼠治療前后AWR評(píng)分比較（分，±s）

表2 各組大鼠治療前后AWR評(píng)分比較（分，±s）

與空白組同容量比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組同容量比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

組 別 時(shí)間 2.0mL空白組 治療前 2.95±0.60（n＝12） 治療后 2.92±0.34模型組 治療前 3.48±0.50 1.0mL 1.5mL 0.75±0.27 1.72±0.68 0.80±0.19△ 1.83±0.19 1.38±0.61 2.88±0.58**（n＝12） 治療后 3.45±0.45*1.33±0.43* 2.92±0.24**低劑量組 治療前 1.47±0.50* 2.92±0.80** 3.62±0.45*（n＝12） 治療后 0.85±0.36△ 2.05±0.39△△ 2.98±0.34△中劑量組 治療前 1.50±0.70* 2.55±0.61* 3.38±0.53（n＝12） 治療后 1.00±0.34 1.88±0.27△△ 2.95±0.36△高劑量組 治療前 1.28±0.51 2.67±0.55* 3.42±0.61（n＝12） 治療后 0.90±0.36△ 2.00±0.34△△ 3.08±0.27得舒特組 治療前 1.45±0.70* 2.87±0.47** 3.50±0.58（n＝12） 治療后 0.93±0.33 2.12±0.55△△ 3.05±0.36

2.3 各組大鼠糞便Bristol分級(jí)評(píng)分比較 見(jiàn)表3。造模結(jié)束后，模型組和各治療組的大鼠糞便Bristol分級(jí)評(píng)分升高，且結(jié)果近似，與空白組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。治療結(jié)束后，與模型組比較，各治療組大鼠糞便Bristol分級(jí)評(píng)分均降低（P＜0.01），同時(shí)，其糞便Bristol分級(jí)評(píng)分與空白組接近。

2.4 各組大鼠糞便含水量比較 見(jiàn)表4。治療之前，模型組和各治療組大鼠糞便含水量的結(jié)果接近，與空白組相比，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差義（P＜0.01）。治療結(jié)束后，各治療組大鼠糞便含水量均低于模型組（P＜0.01），同時(shí)，其糞便含水量與空白組接近。

表3 各組大鼠糞便Bristol分級(jí)評(píng)分比較（分，±s）

表3 各組大鼠糞便Bristol分級(jí)評(píng)分比較（分，±s）

與空白組同期比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組同期比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。 下同。

組 別 n 第28日 第42日空白組 12 4.58±0.38 4.42±0.38模型組 12 6.25±0.27** 6.34±0.41**低劑量組 12 6.33±0.41** 4.50±0.45△△中劑量組 12 6.17±0.26** 4.75±0.27△△高劑量組 12 6.17±0.52** 4.58±0.58△△得舒特組 12 6.42±0.38** 4.67±0.75△△

表4 各組大鼠糞便含水量比較（%，±s）

表4 各組大鼠糞便含水量比較（%，±s）

組 別 n 第28日 第42日空白組 12 49.36±0.99 48.78±0.86模型組 12 62.24±1.31** 61.66±0.78**低劑量組 12 61.22±0.91** 50.11±3.16△中劑量組 12 60.08±1.15** 49.55±2.41△高劑量組 12 59.90±1.82** 50.24±1.43△得舒特組 12 60.67±2.08** 51.22±3.26△

2.5 結(jié)腸組織NGF、PLC-γ、TRPV1蛋白表達(dá)水平比較 見(jiàn)圖1，表5。治療結(jié)束后，與空白組相比，模型組大鼠結(jié)腸TRPV1蛋白表達(dá)升高（P＜0.05）；各治療組大鼠結(jié)腸組織中NGF、PLC-γ、TRPV1蛋白表達(dá)均低于模型組，其中，低劑量組大鼠結(jié)腸組織中NGF蛋白表達(dá)明顯低于模型組（P＜0.05）；與模型組相比，中劑量和高劑量組大鼠結(jié)腸組織PLC-γ蛋白表達(dá)明顯降低（P＜0.05）；低劑量和中劑量組TRPV1蛋白表達(dá)明顯低于模型組（P＜0.05或P＜0.01）；其余各組大鼠結(jié)腸組織蛋白表達(dá)與模型組無(wú)差異。

圖1 各組大鼠結(jié)腸蛋白表達(dá)

表5 各組大鼠結(jié)腸組織NGF、PLC-γ、TRPV1蛋白表達(dá)灰度值比較（目的蛋白/內(nèi)參蛋白，±s）

表5 各組大鼠結(jié)腸組織NGF、PLC-γ、TRPV1蛋白表達(dá)灰度值比較（目的蛋白/內(nèi)參蛋白，±s）

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2.6 結(jié)腸 NGF、PLC-γ、TRPV1mRNA的表達(dá)水平比較 見(jiàn)表6。治療結(jié)束后，與空白組相比，模型組大鼠結(jié)腸組織中 PLC-γ、TRPV1 mRNA表達(dá)明顯升高（P＜0.01）；與模型組相比，低劑量、高劑量、得舒特組大鼠結(jié)腸組織PLC-γmRNA表達(dá)明顯降低（P＜0.01）；與模型組相比，各治療組大鼠結(jié)腸組織TRPV1 mRNA表達(dá)明顯降低（P＜0.01）。

表6 各組大鼠結(jié)腸組織NGF、PLC-γ、TRPV1mRNA的表達(dá)比較（目的基因/內(nèi)參基因，±s）

表6 各組大鼠結(jié)腸組織NGF、PLC-γ、TRPV1mRNA的表達(dá)比較（目的基因/內(nèi)參基因，±s）

組 別 n TRPV1/2-△△ct空白組 6 1.26±0.26模型組 6 2.17±0.60**低劑量組 6 1.33±0.15△△NGF/2-△△ct PLC-γ/2-△△ct 1.11±0.58 0.93±0.17 1.09±0.12 5.38±1.29**1.75±0.41 1.63±0.29△△中劑量組 6 1.20±0.37△△1.27±0.44 2.15±0.84*高劑量組 6 1.38±0.52 1.30±0.28△△ 0.90±0.13△△得舒特組 6 0.96±0.20 0.86±0.14△△ 1.35±0.15△△

3 討 論

NGF是一種具有營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)元和促進(jìn)神經(jīng)突起生長(zhǎng)雙重生物學(xué)功能的神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子，對(duì)中樞及周圍神經(jīng)元的發(fā)育、分化、生長(zhǎng)、再生和功能特性的表達(dá)均具有重要的調(diào)控作用。近幾年研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)生長(zhǎng)因子在疼痛的產(chǎn)生及維持過(guò)程中也扮演著重要角色。NGF可以由多種細(xì)胞合成釋放，蛋白酪氨酸激酶受體A（TrkA）是NGF的高親和力受體，通過(guò)激活PLC-γ通路，降低TRPV1開(kāi)放閾值，參與介導(dǎo)過(guò)度敏感現(xiàn)象［6］，是IBS-D內(nèi)臟敏感性增加的關(guān)鍵通路。研究表明，IBS-D患者與健康人相比，血清和腸黏膜的NGF及其受體TrkA含量均顯著升高；而靶向性抑制NGF能降低NGF和TrkA的水平，能有效改善IBS-D的內(nèi)臟高敏感癥狀［7］。亦有研究顯示，NGF能誘導(dǎo)結(jié)腸過(guò)敏，阻斷NGF則能夠緩解其高敏感性［8］。

TRPV1是一種配體門控非選擇性的陽(yáng)離子通道蛋白，對(duì)Ca2+具有高度通透性，能對(duì)細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外的機(jī)械性、溫度性和化學(xué)性刺激激活，產(chǎn)生痛覺(jué)過(guò)敏和病理性疼痛。作為痛覺(jué)感知傳導(dǎo)所必需的一個(gè)傷害性感受分子，在IBS內(nèi)臟高敏感性發(fā)生中具有關(guān)鍵作用。臨床研究［9］顯示，TRPV1在 IBS患者乙狀結(jié)腸的表達(dá)較正常人更高，并與患者的腹痛嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。實(shí)驗(yàn)研究也發(fā)現(xiàn)感覺(jué)神經(jīng)元TRPV1表達(dá)上調(diào)與內(nèi)臟高敏感性疼痛的發(fā)生密切相關(guān)，是啟動(dòng)并保持胃腸道高敏感性的重要分子［10-11］。TRPV1基因敲除可以降低胃腸道傳入神經(jīng)在擴(kuò)張刺激下的機(jī)械敏感性［12］。

反復(fù)的腹痛、腹瀉是IBS-D患者的主要臨床表現(xiàn)，而情緒的異常改變往往是其癥狀出現(xiàn)或加重的重要因素［13-14］。 根據(jù)患者“痛”“瀉”等的臨床表現(xiàn)，以及與情緒之間的密切聯(lián)系，中醫(yī)學(xué)將其歸屬于 “泄瀉”“腹痛”“郁證”等范疇，其病機(jī)關(guān)鍵在于脾虛肝旺，脾虛濕盛［15］，正如《醫(yī)方考》所記載“瀉則之脾，痛則之肝；肝則之實(shí)，脾則之虛，脾虛肝實(shí)，故令痛瀉”。痛瀉安腸方是導(dǎo)師李軍祥教授經(jīng)過(guò)多年臨床總結(jié)的臨床經(jīng)驗(yàn)方，在IBS-D的治療中取得了顯著的療效，主要由炒白術(shù)15 g，炮姜 9 g，炒白芍 12 g，烏梅 9 g，蜘蛛香 6 g，黃連6 g，蟬蛻6 g組成。方中白術(shù)苦甘而溫，補(bǔ)脾燥濕以治土虛，為君藥；炮姜性溫，善暖脾胃，能溫中止痛止瀉，與白術(shù)共為君藥。白芍酸寒，柔肝緩急止痛，與白術(shù)相配，于土中瀉木；烏梅酸澀性平，能澀腸止瀉，與白術(shù)相配以收健脾止瀉之功；味酸入肝，與白芍相配則加強(qiáng)柔肝止痛之力，與白芍共為臣藥。蜘蛛香辛苦而溫，理氣止痛，除濕止瀉；黃連清熱燥濕，厚腸止瀉；蟬衣氣味甘寒，乃清虛之品，能祛風(fēng)而勝濕，與黃連相配，防止?jié)裥叭肜锘療幔c蜘蛛香、黃連共為佐藥。諸藥相伍，乃仿痛瀉要方之義，使脾健肝舒，氣機(jī)調(diào)暢，痛瀉自止。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，IBS-D大鼠內(nèi)臟敏感性閾值下降，糞便含水量和糞便Bristol分級(jí)評(píng)分均明顯升高，結(jié)腸組織 NGF、PLC-γ、TRPV1蛋白表達(dá)升高，結(jié)腸PLC-γ、TRPV1mRNA表達(dá)升高；痛瀉安腸方治療后內(nèi)臟敏感性閾值升高，大鼠糞便含水量和糞便Bristol分級(jí)評(píng)分降低，且接近空白組，結(jié)腸組織NGF、PLC-γ、TRPV1蛋白表達(dá)下降，PLC-γ、TRPV1 mRNA 表達(dá)降低，說(shuō)明痛瀉安腸方能上調(diào)內(nèi)臟敏感性閾值，下調(diào)結(jié)腸組織NGF、PLC-γ、TRPV1蛋白表達(dá)，降低結(jié)腸PLC-γ、TRPV1mRNA的表達(dá)，達(dá)到治療IBS-D的目的。

但是實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，大鼠結(jié)腸組織中NGFmRNA的表達(dá)在治療前后并未發(fā)生改變，腸道功能的變化是否主要體現(xiàn)在蛋白的表達(dá)上以及基因是否參與腸道功能的變化仍需進(jìn)一步驗(yàn)證，NGFmRNA的表達(dá)是否與NGF的表達(dá)同步尚需進(jìn)一步研究。

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