蒙藥阿那日-4散對實驗性胃潰瘍大鼠血清超氧化歧化酶活力及一氧化氮、丙二醛含量的影響△

敖 奇 王玉山 美 青

(1.內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020； 2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)2014屆碩士研究生，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020； 3.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)2012屆碩士研究生，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

蒙藥阿那日-4散對實驗性胃潰瘍大鼠血清超氧化歧化酶活力及一氧化氮、丙二醛含量的影響△

敖 奇1王玉山2美 青3

(1.內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020； 2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)2014屆碩士研究生，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020； 3.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)2012屆碩士研究生，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

目的：觀察蒙藥阿那日-4散對實驗性胃潰瘍大鼠血清超氧化歧化酶活力及一氧化氮、丙二醛含量的影響，探討其治療胃潰瘍的可能作用和機制。方法利用10%醋酸制備實驗性胃潰瘍大鼠模型，予蒙藥阿那日-4散及枸櫞酸鉍鉀治療15d后觀察胃黏膜大體標(biāo)本，計算潰瘍面積，測量血清超氧化歧化酶活力及一氧化氮、丙二醛含量。結(jié)果胃黏膜大體標(biāo)本觀察發(fā)現(xiàn)，治療組和對照組均潰瘍愈合良好；與模型組相比，高劑量的蒙藥阿那日-4散可明顯促進(jìn)潰瘍愈合，減少潰瘍面積(P<0.01)，提高血清超氧化歧化酶活力(P<0.05)，降低血清一氧化氮和丙二醛含量(P<0.01)。結(jié)論蒙藥阿那日-4散對大鼠實驗性潰瘍具有良好的治療作用，其治療作用和機制可能與清除氧自由基，提高血清超氧化歧化酶活力，降血清一氧化氮，丙二醛含量有關(guān)。

蒙藥阿那日-4散；胃潰瘍；超氧化歧化酶；一氧化氮；丙二醛

蒙藥阿那日-4散是收載于《內(nèi)蒙古藥材標(biāo)準(zhǔn)》和《中國醫(yī)學(xué)百科全書(蒙醫(yī)學(xué))》，是由石榴、肉桂皮、白豆蔻、蓽茇4味藥組成，蒙藥阿那日-4散為基礎(chǔ)的復(fù)方有阿那日-5、通拉嘎-5、阿那日-8等。在蒙醫(yī)治療胃潰瘍、慢性胃炎等基礎(chǔ)方和經(jīng)驗方，臨床上有確切療效。氧自由基是導(dǎo)致胃黏膜損傷的重要致病因子，超氧化歧化酶(Superoxide Dismutase，SOD)，一氧化氮(Nitric Oxide,No )和丙二醛(Maleic Dialdyde，MDA)是反應(yīng)體內(nèi)氧自由基代謝的重要指標(biāo)。

本研究通過觀察蒙藥阿那日-4散不同劑量對實驗性胃潰瘍大鼠血清SOD活力及NO、MDA含量的影響，探討其治療胃潰瘍的可能作用和機制，為進(jìn)一步蒙藥開發(fā)和臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 動物：健wistar大鼠48只，雌雄各半，體重180 ～ 240g，是由內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心提供。

1.2 藥物制備：蒙藥阿那日-4散由內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院(國家蒙藥制劑中心)提供。上述藥物按一定比例461mg/Kg、327mg/Kg、245mg/Kg成為高、中、低3個劑量，高壓滅菌后放入4℃冰箱保存?zhèn)溆谩ｈ蹤此徙G鉀顆粒 按17mg/Kg濃度配枸櫞酸鉍鉀混懸液，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 試劑： 枸櫞酸鉍鉀，用時加蒸餾水配制成混懸液；超氧化歧化酶(SOD) 檢測試劑盒；一氧化氮(NO)；檢測試劑盒及丙二醛(MDA)檢測試劑盒，均由南京建成生物工程研究提供，嚴(yán)格按照說明書操作；以及戊巴比妥鈉、醋酸、碘酒、究竟等。

2 方法

2.1 分組：將48只大鼠隨機分為空白組、模型組、對照組，蒙藥阿那日-4散高、中、低劑量組，每組8只?？瞻捉M自由飲食進(jìn)水，15d后處死取材；除空白組外，其余各組大鼠均于適應(yīng)性飼養(yǎng)3d后行造模術(shù)，模型組于術(shù)后第4d處死取材；各治療組均于術(shù)后低4d開始灌胃，連續(xù)灌胃15d；15d后各治療組一起處死取材。

2.2 動物模型制作與給藥：參照陳奇的文獻(xiàn)方法。空白組8只除外，其余40只大鼠均用文獻(xiàn)方法。注射0.05ml醋酸建立消化性潰瘍大鼠模型。造模前大鼠禁食不禁水24h，1%戊巴比妥鈉3ml/Kg(30mg/Kg)腹腔注射麻醉，約10min后，大鼠麻醉，將其仰臥固定于手術(shù)臺上，剪掉腹壁毛，用碘酒、酒精常規(guī)消毒。劍突下腹部正中切口2 ～ 3cm，用彎止血鉗在右側(cè)肝臟下方將十二指腸輕輕勾出，然后將胃部輕輕拉出腹外，在胃的腹側(cè)面，胃體部與幽門交界處，將微量注射器平刺入漿膜下0.4 ～ 0.5mm，注入10%醋酸0.05ml，形成丘疹。將胃輕輕送回，縫合腹壁基層，然后縫合皮膚。用碘酒酒精消毒，外涂大棉膠。麻醉大鼠在均在2 ～ 3h內(nèi)逐漸蘇醒，造模周期為3d，常規(guī)飼養(yǎng)。從手術(shù)次日起，治療組按分別灌胃阿那日-4散混懸液6ml/Kg，陽性對照組灌胃枸櫞酸鉍鉀17mg/kg，2次/d，對照組給予等容量的生理鹽水，連續(xù)治療15d。

2.3 標(biāo)本采集與測定

2.3.1 標(biāo)本采集：大鼠連續(xù)灌胃給藥15d，于末次給藥后禁食24h，自由飲水，第16d將大鼠頸椎脫臼處死，迅速打開腹腔，腹主動脈取血約5ml，3000r/min離心10min，分離血漿，-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3.2 血清SOD活力及NO、MDA含量檢測：各項檢測指標(biāo)均嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行，UV-2000型紫外可見分光光度計比色。血清中，SOD活力及NO、MDA含量分別黃嘌呤氧化酶法、硝酸還原酶法和硫代巴比妥酸法測定。

2.3.3 胃黏膜大體標(biāo)本觀察及潰瘍面積測定：處死大鼠取血結(jié)束后，開腹，結(jié)扎幽門和賁門，取胃浸于0.01ml/ml甲醛溶液中，固定10分鐘。沿胃大彎切開，將胃外翻，倒掉內(nèi)容物，再用乳頭吸管輕輕洗掉食物殘渣，于手術(shù)彎盤中展平，放大鏡下肉眼觀察。用潰瘍的最長徑和最短徑的均值表示潰瘍指數(shù)，進(jìn)行統(tǒng)計處理，計算潰瘍愈合百分率，評定藥物對潰瘍愈合的促進(jìn)作用。

2.4 實驗統(tǒng)計方法：本實驗所有數(shù)據(jù)均用均屬±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，并使用SPSS10.0軟件倉促進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，組間差異比較采用兩樣均數(shù)比較的t檢驗，P<0.05為差異顯著性。

3 結(jié)果

3.1 胃黏膜大體標(biāo)本觀察：空白組：胃黏膜光整完好、呈淡紅色、無充血、水腫，潰瘍及瘢痕組織增生等異常變化。模型組：胃竇區(qū)漿膜表面充血水腫和肝臟和周圍組織有少許粘連，胃竇黏膜可見一個或多個潰瘍點，潰瘍中心被黃白色膿性分泌物覆蓋。枸櫞酸鉍鉀組：漿膜面少許粘連，胃竇區(qū)黏膜表面粗糙，周圍偶見充血糜爛點。蒙藥阿那日-4散高劑量組愈合較佳，胃黏膜僅見小范圍瘢痕增生，胃竇區(qū)粘膜表面粗糙。蒙藥阿那日-4散中劑量和低劑量組：漿膜面少量充血，胃竇區(qū)黏膜可見不規(guī)則潰瘍點或瘢痕組織增生。

3.2 潰瘍面積比較：與模型組相比，枸櫞酸鉍鉀組和蒙藥阿那日-4散高、中、低劑量大鼠潰瘍面積顯著縮小(P<0.01)，結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠潰瘍面積比較

與模型組比較*P<0.05

3.3 血清SOD活力比較：模型組大鼠血清SOD活力明顯低于空白組(P<0.05)，與模型組相比，蒙藥阿那日-4散中劑量組大鼠血清SOD活力明顯升高(P<0.05)，與對照組相比，蒙藥阿那日-4散中劑量大鼠血清SOD活力明顯升高(P<0.05)，結(jié)果見表2。

3.4 血清NO含量比較：與模型組相比，蒙藥阿那日-4散各劑量組大鼠血清NO含量明顯降低(P<0.01)；與枸櫞酸鉍鉀組相比，蒙藥阿那日-4散高、中、低劑量組大鼠血清NO含量明顯降低(P<0.01)，結(jié)果見表2。

3.5 血清MDA含量比較：與模型組相比，蒙藥阿那日-4散各劑量大鼠血清MDA含量明顯降低(P<0.01)；結(jié)果見表2。

表2 各組大鼠血清SOD活力及NO、MDA含量比較

與模型組比較*P<0.05 **P<0.01，與枸櫞酸鉍鉀比較P<0.05

4 討論

胃潰瘍是消化系統(tǒng)常見病，多發(fā)病，屬于蒙醫(yī)學(xué)“胃寶日病”的范疇，是因“寶日”熱邪滯留于胃，蘊積不消而產(chǎn)生的胃復(fù)合性慢性病[1]。胃潰瘍中脾胃虛寒者居多，治療則以溫中助陽，祛腐生肌促進(jìn)潰瘍修復(fù)的藥物。西醫(yī)學(xué)認(rèn)為胃潰瘍的發(fā)病機制是由于多種原因?qū)е鹿粜砸蜃釉鰪姾?或)黏膜防御功能減弱所致。

近年研究結(jié)果表明，由于胃腸特殊的生理學(xué)特點，很容易產(chǎn)生大量的氧自由基，當(dāng)氧自由基大量產(chǎn)生，超過機體清除能力時，就會溢出細(xì)胞外，對周圍組織造成損害，導(dǎo)致胃潰瘍的發(fā)生。

蒙藥阿那日-4散有石榴、肉桂皮、白豆蔻、蓽茇4味藥組成，研究發(fā)現(xiàn)[2]，許多蒙藥都有抗氧作用，其抗氧化活性成分主要有：黃酮類化合物、酚類化合物、皂苷類、多糖類等。方中石榴可調(diào)理胃火，祛巴達(dá)干寒癥、消食、開胃、止瀉，其主要成分單寧(鞣質(zhì))能明顯抑制大鼠幽門結(jié)扎型胃潰瘍的形成[3]，單寧具有提高SOD活力、抑制MDA劑NO含量的升高作用[4]。

肉桂皮功能具有祛寒赫依、調(diào)理胃火、止瀉、斂膿。對肉桂皮的現(xiàn)代藥學(xué)表明，肉桂提取物具有良好抗氧化作用，清除自由基的能力[5]。肉桂提取物對應(yīng)激性潰瘍、幽門結(jié)扎潰瘍等潰瘍模型均有明顯的或較強的抗?jié)冏饔肹6]。白豆蔻有祛胃寒、抗赫依、調(diào)胃火、消食、開胃、止吐。白豆蔻提取物具改善胃腸蠕動和胃潰瘍[7]。蓽茇有調(diào)理胃火、祛巴達(dá)干赫依、調(diào)節(jié)體素、止痛。蓽茇主要成分胡椒堿除了抗心律失常、抗心肌缺血、抗缺氧、抑菌、抗?jié)冏饔猛?，消除DPPH自由基[8]。

本實驗采用醋酸性潰瘍，只要把醋酸準(zhǔn)確注射于胃黏膜下，潰瘍發(fā)生率100%，與人的慢性胃潰瘍極相似，此種法造模成率高，重復(fù)性好，潰瘍深淺可控，自愈時間長達(dá)60d左右。是一種規(guī)范且較常用的造模方法[9]。

本實驗結(jié)果顯示，蒙藥阿那日-4散高中低劑量組和枸櫞酸鉍鉀組與模型組相比較，均具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，說明蒙藥阿那日-4散和枸櫞酸鉍鉀對胃潰瘍的愈合均有明顯的促進(jìn)作用。

SOD是存在于生物內(nèi)機制和防御自由基損傷的主要酶類之一。其功能是催化氧自由基的歧化反應(yīng)，即將超氧陰離子自由基歧化為過氧化氫和氧氣，消除超氧陰離子自由基的作用，從而消減過量的超氧陰離子對人體的損傷作用。NO在正常情況下，NO的正常分泌可以調(diào)節(jié)胃腸黏膜血流量，維持黏膜完整性和防御功能，而NO異常大量合成時與HP的感染有相關(guān)性。MDA是長鏈脂肪酸發(fā)生氧化作用后的終末產(chǎn)物，可作為氧化作用后的標(biāo)志，它的含量變化可間接反映組織受自由基損傷的成程度。

本實驗發(fā)現(xiàn)，蒙藥阿那日-4散中劑量組大鼠血清SOD活動明顯高于模型組(P<0.05)，可見中劑量的蒙藥阿那日-4散可明顯提高實驗性胃潰瘍大鼠血清中SOD 的活力、減少脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、保護胃黏膜、促進(jìn)潰瘍愈合。蒙藥阿那日-4散高、中、低劑量組大鼠血清NO 含量顯著低于模型組(P<0.01)。蒙藥阿那日-4散高劑量組大鼠血清NO含量顯著低于枸櫞酸鉍鉀組(P<0.01)。說明蒙藥阿那日-4散減少NO生成，減輕NO對胃黏膜損傷；減少黏膜攻擊和增強胃黏膜保護。蒙藥阿那日-4散高、中、低劑量組大鼠血清MDA含量顯著低于模型組(P<0.01)，說明蒙藥阿那日-4 散能清楚實驗性胃潰瘍大鼠體內(nèi)氧自由基的含量，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，降低體內(nèi)MDA含量，保護組織免受氧自由基損傷。

本實驗通過大體標(biāo)本，潰瘍面積、血清SOD活力及NO、MDA含量進(jìn)一步研究對比發(fā)現(xiàn)，蒙藥阿那日-4散對大鼠實驗性胃潰瘍具有良好的治療作用，推測其治療機制可能與清除體內(nèi)氧自由基含量，提高血清SOD活力，降低NO，MDA含量有關(guān)，NO異常大量合成時，可以加重細(xì)胞毒性作用，促進(jìn)潰瘍的發(fā)生，并提高NO 的異常合成與幽門螺旋桿菌的感染有相關(guān)性[11]。它給研究消化性潰瘍的防治以諸多啟迪。

[1]麻春杰，包·納日斯，敖其爾.消化性潰瘍的蒙醫(yī)藥研究概況[J].中國民族醫(yī)藥雜志，2007(9)：61

[2]先宏，吳可，孫存普.中藥抗氧化活性的主要成分及其自由基清除作用[J].國外醫(yī)學(xué)，中醫(yī)中藥分冊，2003.25(3)：150

[3]李定格，張增敏.石榴皮水浸劑對大鼠胃酸分泌物和實驗性胃潰瘍作用的研究[J].中藥藥理與臨床2003.19(6)：23-25

[4]馬俊紅，李圣愛.一氧化氮與胃潰瘍[J].生理科學(xué)進(jìn)展，1998.29(3)：260-262

[5]王歡，王秀蘭，吳龍?zhí)?蒙藥阿那日-4散研究進(jìn)展[J].中國中醫(yī)學(xué)信息雜志，2009 ，16：86-87

[6]李榮，路冠茹，姜子濤.肉桂精油抗氧化性能及消除自由基能力的研究[J].食石科技，2010，35(2)：166-171

[7]張小超，陳鵬，何波，等.八位肉桂膠囊抗消化性潰瘍作用實驗研究[J].中成藥，2013，35(10)：2259-2262

[8]王秀蘭，崔平，等.白豆蔻的傳統(tǒng)應(yīng)用，化學(xué)成分及藥理作用的研究概況[J].中國蒙醫(yī)藥，2014，12:50-54

[9]鐘運聲，李熙燦，謝學(xué)明，等.蓽撥消除DPPH自由基能力的研究[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2007 . 9(1)：144-145

[10]陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].第二版.人民衛(wèi)生出版社，2006.

[11]林潔，王清麗.一氧化氮在消化性潰瘍中的研究進(jìn)展[J].華中醫(yī)學(xué)雜志，2002(6)：324-326

△內(nèi)蒙古自然基金項目2013MS1146

R291.2

A

1006-6810(2017)08-0051-03

2017年6月9日收稿