尿PCA3評(píng)分對(duì)血清總PSA灰區(qū)前列腺癌患者的早期診斷價(jià)值

張振奇，劉桂麗，張旭，毛仕輝，封志強(qiáng)，江冰華，陳月娥，葉慧珍，許志宏

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬南平市第一醫(yī)院，福建南平353000)

尿PCA3評(píng)分對(duì)血清總PSA灰區(qū)前列腺癌患者的早期診斷價(jià)值

張振奇，劉桂麗，張旭，毛仕輝，封志強(qiáng)，江冰華，陳月娥，葉慧珍，許志宏

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬南平市第一醫(yī)院，福建南平353000)

目的探討尿液中前列腺癌基因3(PCA3)評(píng)分在血清總前列腺特異抗原(tPSA)灰區(qū)(4～10 ng/mL)的前列腺癌患者早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法tPSA灰區(qū)患者103例，其中前列腺癌患者29例(前列腺癌組)、前列腺良性增生(BPH)患者74例(BPH組)。采用熒光定量PCR法檢測(cè)患者尿液中PCA3基因表達(dá)，計(jì)算尿PCA3評(píng)分，并繪制ROC曲線分析尿液PCA3評(píng)分對(duì)前列腺癌早期診斷的價(jià)值。結(jié)果前列腺癌組與BPH組比較，尿PCA3評(píng)分高，前列腺體積小(P均<0.05)。尿PCA3評(píng)分的ROC曲線下面積高于血清tPSA(P<0.05)，取截?cái)嘀?1.5，尿PCA3評(píng)分診斷前列腺癌的敏感度及特異度分別為82.8%及81.1%。結(jié)論尿PCA3評(píng)分可提高血清tPSA灰區(qū)前列腺癌患者診斷的準(zhǔn)確度。

前列腺癌;前列腺特異抗原灰區(qū)；前列腺癌基因3;尿前列腺癌基因3評(píng)分

前列腺癌是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一。2017年，美國新增前列腺癌患者達(dá)160 000例，是因癌癥死亡男性患者的第三位致死因素[1,2]。前列腺穿刺活檢仍是確診前列腺癌的金標(biāo)準(zhǔn)。血清前列腺特異抗原(PSA)則是目前應(yīng)用最廣泛的輔助篩查腫瘤標(biāo)志物。但隨著PSA的廣泛臨床應(yīng)用，其診斷特異性不足等弊端導(dǎo)致的不必要的穿刺活檢及過度治療等問題也越來越明顯，特別是當(dāng)患者血清總PSA(tPSA)處于灰區(qū)(4～10 ng/mL)時(shí)，其對(duì)前列腺癌的診斷與良性前列腺增生(BPH)等疾病存在著交叉重疊。因此，探索更加敏感、特異的腫瘤標(biāo)志物是提高前列腺癌早期診斷成功率，改善前列腺癌患者預(yù)后的關(guān)鍵問題之一[3,4]。前列腺癌基因3(PCA3)是近年來發(fā)現(xiàn)的特異性前列腺癌腫瘤標(biāo)志物之一，是具有臨床潛力的前列腺癌標(biāo)志物[5,6]。本研究探討了尿PCA3評(píng)分在前列腺癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年6月～2017年7月在福建醫(yī)科大學(xué)附屬南平市醫(yī)院泌尿外科收治的血清PSA值處于灰區(qū)(4～10 ng/mL)的前列腺疾病患者103例，其中病理診斷前列腺癌 29例(前列腺癌組)，年齡(66.75±7.42)歲，Gleason評(píng)分≥7分16例，≤6分13例；良性前列腺增生(BPH)74例(BPH組)，年齡(63.68±6.44)歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：血清PSA<4.0 ng/mL或 >10.0 ng/mL；既往有前列腺穿刺活檢、前列腺手術(shù)史及口服5α還原酶抑制劑患者；合并尿路感染、3個(gè)月內(nèi)的急性前列腺炎患者；有多次輸血及凝血障礙的患者。本研究得到醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)及患者的知情同意。

1.2 前列腺體積的檢測(cè) 運(yùn)用直腸超聲(Philips iU22 型彩色多普勒超聲診斷儀，探頭頻率 7.5～10 MHz)測(cè)定：前列腺體積=前后徑(cm)×左右徑(cm)×上下徑(cm)×0.52。

1.3 血清PSA的檢測(cè) 收集外周靜脈血5 mL，分離血清，-80 ℃保存?zhèn)溆?。采用化學(xué)發(fā)光免疫染色法(Architect CI8200，美國雅培公司)對(duì)血清PSA進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 尿PCA3評(píng)分的測(cè)算 前列腺按摩后收集初始尿液50 mL，尿沉渣，-80 ℃保存?zhèn)溆谩２捎胵RT-PCR法檢測(cè)尿液PCA3 mRNA及PSA mRNA。RNA提取及鑒定：按TRIzol法抽提RNA，加適量DEPC水溶解，紫外分光光度儀測(cè)定RNA濃度和純度。逆轉(zhuǎn)錄cDNA：嚴(yán)格按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(PrimeScriptTMRT reagent Kit，日本TaKaRa公司)說明書進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，總反應(yīng)體積20 μL。qRT-PCR反應(yīng)：反應(yīng)體系如下：反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 2 μL，上下游引物各0.5 μL，SYBR PremixEx Tap(2×)10 μL，ddH2O 7 μL。采用美國ABI7000 ABI StepOne PCR儀進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。引物序列如下：PSA：上游引物 5′-GTCTGCGGCGGTGTTCTG-3′；下游引物5′-TGCCGACCCAGCAAGATC-3′；PCA3：上游引物5′-TGGTGGGAAGGACCTGATGATACAG-3′；下游引物5′-TCTCCCAGGGATCTCTGTGCTTCC- 3′。2-ΔΔCt法計(jì)算 mRNA相對(duì)表達(dá)水平， ΔΔCt=ΔCt目的基因-ΔCt內(nèi)參基因，目的基因相對(duì)表達(dá)量=2-ΔΔCt×103，尿PCA3評(píng)分=PCA3/PSA mRNA×103。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清tPSA、前列腺體積、尿PCA3評(píng)分比較 前列腺癌組、BPH組血清tPSA分別為 (6.07±1.73)、(5.56±1.70)ng/mL ，前列腺體積分別為(36.60±2.25)、(38.85±3.44) cm3，尿PCA3評(píng)分分別為129.14±92.63、54.18±44.27。與BPH組比較，前列腺癌組前列腺體積小，尿PCA3評(píng)分高(P均<0.05)。

2.2 尿PCA3評(píng)分及血清tPSA對(duì)前列腺癌的診斷價(jià)值比較 尿PCA3評(píng)分曲線下面積(AUC)為0.845(95%CI：0.768～0.922)，本實(shí)驗(yàn)以71.5截?cái)嘀禐樵\斷前列腺癌的臨界值，截?cái)嘀狄陨锨傲邢侔┗颊?4例，敏感度為82.8%，截?cái)嘀狄韵翨PH組患者60例，特異度為81.1%，陽性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為63.2%及92.3%。血清tPSA AUC為0.586(95%CI：0.464～0.707)。尿PCA3評(píng)分AUC高于血清tPSA(P<0.05)。

圖1 尿PCA3評(píng)分與血清tPSA值診斷血清tPSA灰區(qū)前列腺癌的ROC曲線

3 討論

血清PSA的檢測(cè)是目前臨床上應(yīng)用最廣泛的預(yù)測(cè)前列腺癌的腫瘤標(biāo)志物，它的發(fā)現(xiàn)及普及應(yīng)用顯著提高前列腺癌的早期發(fā)現(xiàn)率及診治效果[7]。但隨著PSA的廣泛應(yīng)用，其弊端也逐漸顯現(xiàn)出來：①PSA具有良好的前列腺組織特異性，但缺乏足夠的前列腺癌特異性，BPH、前列腺炎、急性尿潴留以及相關(guān)前列腺檢查(直腸指檢、經(jīng)直腸超聲檢查、尿道膀胱鏡檢查等)均可引起血清PSA升高；②PSA的高低與前列腺癌分化的惡性程度無關(guān)，且部分前列腺癌患者血清PSA值很低，很難給PSA值設(shè)定下限；③在血清PSA值處于4～10 ng/mL灰區(qū)的前列腺癌患者中，PSA缺乏足夠的靈敏度和特異度，活檢陽性率僅為20.4%左右，導(dǎo)致大量不必要的前列腺重復(fù)穿刺活檢，增加了患者的痛苦和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)；④PSA不能較準(zhǔn)確地判斷靜止期與進(jìn)展期前列腺癌，血清PSA水平在隨訪前列腺癌內(nèi)分泌治療效果時(shí)也有不足之處。內(nèi)分泌治療可以通過抑制PSA基因轉(zhuǎn)錄等多種方式影響血清PSA水平。因此，PSA下降不能完全反映腫瘤的消退。即使使用PSA的一系列衍生物如PSAD、fPSA、PSAV等，其診斷特異度仍無明顯提高[8]。因此，發(fā)現(xiàn)和研究對(duì)前列腺癌敏感度和特異度更高的腫瘤標(biāo)志物，是提高前列腺癌的早期診斷成功率、改善前列腺癌患者預(yù)后的關(guān)鍵問題之一。

近年，隨著對(duì)癌基因和前列腺癌分子生物學(xué)方面研究的進(jìn)展以及腫瘤分子學(xué)新技術(shù)的應(yīng)用，一些來源于血液、尿液和組織等的前列腺腫瘤標(biāo)志物被不斷的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用[9]。PCA3基因是一種非編碼mRNA，由4個(gè)外顯子及3個(gè)內(nèi)含子組成，全長約25 kD，定位于人9號(hào)染色體q21-22，由Bussemakers等于1999年最先發(fā)現(xiàn)。PCA3具有前列腺組織特異性，PCA3 mRNA在前列腺癌細(xì)胞和轉(zhuǎn)移灶中均呈特異性高表達(dá)，在正常前列腺、BPH組織中不表達(dá)或低表達(dá)，而在心、肺、肝、腎等10多種人體組織及外周血淋巴細(xì)胞均未檢測(cè)到PCA3 mRNA表達(dá)，為目前已知的特異性診斷前列腺癌腫瘤標(biāo)志物[10,11]。歐美等國家既往研究已證實(shí)，尿液中PCA3和PCA3評(píng)分診斷前列腺癌具有比血清PSA更高的特異度和敏感度；此外，在PSA值為2.5～10 ng/mL直腸指診為陰性的人群中，利用PSA篩查前列腺癌的價(jià)值遭到廣泛質(zhì)疑[12]。2011年，歐洲一項(xiàng)單中心前瞻性臨床研究發(fā)現(xiàn)：在血清PSA值處于4～10 ng/mL灰區(qū)的前列腺疾病患者中，tPSA診斷前列腺癌的AUC值僅為0.55，不能作為診斷PSA灰區(qū)前列腺癌患者的腫瘤標(biāo)志物，而PCA3及p2PSA測(cè)定可提高PSA灰區(qū)的前列腺癌患者篩查時(shí)診斷敏感度和準(zhǔn)確度，減少不必要的前列腺穿刺活檢[13]。

本研究共納入103例血清tPSA處于4.0～10.0 ng/mL的患者，研究結(jié)果顯示：尿PCA3評(píng)分對(duì)前列腺癌的診斷效能優(yōu)于tPSA；經(jīng)ROC曲線分析，尿PCA3評(píng)分的AUC明顯高于tPSA的AUC。根據(jù)敏感度與(1-特異度)之差的最大值時(shí)的截?cái)嘀底鳛樽罴言\斷截?cái)嘀?，本?shí)驗(yàn)取71.5截?cái)嘀底鳛槟騊CA3評(píng)分診斷前列腺癌的最佳臨界值，其敏感度和特異度分別為82.8%及81.1%，診斷價(jià)值明顯高于血清tPSA，可顯著提高血清tPSA灰區(qū)患者的前列腺癌檢出能力。

綜上所述，在血清tPSA灰區(qū)患者進(jìn)行前列腺癌篩查時(shí)，尿PCA3評(píng)分的敏感度及特異度高于血清tPSA，可作為診斷前列腺癌的特異性指標(biāo)。鑒于本研究的樣本量偏少，上述結(jié)論尚需大樣本、多中心的臨床研究進(jìn)一步證實(shí)。

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10.3969/j.issn.1002-266X.2017.45.017

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福建省衛(wèi)生計(jì)生委青年科研課題(2015-1-109)。

許志宏(E-mail:xmurye@163.com)

2017-08-27)