樹突細(xì)胞-細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞聯(lián)合術(shù)后化療治療非小細(xì)胞肺癌的療效

姜海燕 劉達(dá)興 徐 剛 宋永祥 (六盤水市人民醫(yī)院胸心外科,貴州 六盤水 553000)

樹突細(xì)胞-細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞聯(lián)合術(shù)后化療治療非小細(xì)胞肺癌的療效

姜海燕 劉達(dá)興1徐 剛1宋永祥1(六盤水市人民醫(yī)院胸心外科,貴州 六盤水 553000)

目的評價Ⅱa～Ⅲa期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)術(shù)后輔助化療聯(lián)合樹突細(xì)胞(DC)-細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷(CIK)細(xì)胞治療的效果。方法NSCLC手術(shù)病例79例，隨機(jī)分為術(shù)后輔助化療組40例(對照組)和術(shù)后輔助化療聯(lián)合3個療程DC-CIK細(xì)胞治療組39例(治療組)；兩組完成術(shù)后4個療程化療后，對比隨訪1年的復(fù)發(fā)率和生存率、每次化療前血清癌性標(biāo)志物癌胚抗原(CEA)、CYFRA21-1含量；密切觀察細(xì)胞回輸不良反應(yīng)，評價患者生活質(zhì)量評分。結(jié)果術(shù)后1年，治療組腫瘤復(fù)發(fā)率明顯低于對照組(P<0.05)；死亡率兩組無明顯差異(P>0.05)。治療結(jié)束后6個月，兩組功能狀況(KPS)、生活質(zhì)量(QOL)評分無明顯差異(P>0.05)；治療結(jié)束后12個月治療組KPS、QOL評分較對照組明顯增高 (P<0.05)。治療結(jié)束后6個月、12個月治療組體力狀態(tài)(ZPS)評分明顯低于對照組(P<0.05)。兩組患者第2、3、4次化療前比第1次化療前CEA 和CYFRA21-1含量明顯降低(P<0.05)。第4次化療前，治療組CEA水平明顯低于對照組 (P<0.05)。第2、3、4次化療前治療組CYFRA21-1水平均低于對照組(P<0.05)。治療組發(fā)生惡心，嘔吐，納差，失眠的人次均明顯低于對照組(P<0.05)；而發(fā)生乏力人次兩組無明顯差異 (P>0.05)。結(jié)論術(shù)后化療聯(lián)合3個療程DC-CIK細(xì)胞治療可降低NSCLC術(shù)后1年腫瘤復(fù)發(fā)率，降低血清癌性標(biāo)志物CEA和CYFRA21-1的含量，提高患者生活質(zhì)量。

肺癌；手術(shù)；化療；DC-CIK細(xì)胞治療

采用手術(shù)為主，放、化療為輔的綜合治療是目前中晚期肺癌最有效的治療手段，但肺癌患者總體5年生存率仍不足15%，其治療給患者帶來極大的毒副作用，嚴(yán)重影響了肺癌患者的生活質(zhì)量。相關(guān)研究表明樹突細(xì)胞(DC)-細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷(CIK)細(xì)胞治療晚期肺癌可明顯提高晚期肺癌患者機(jī)體免疫功能，減輕放化療引起的不良反應(yīng)等〔1，2〕。本文觀察DC-CIK聯(lián)合術(shù)后化療對非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的療效。

1 資料與方法

1.1病例納入和剔除標(biāo)準(zhǔn) (1) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①手術(shù)病理證實為NSCLC患者；②臨床TNM分期為Ⅱa～Ⅲa期(2011年UICC標(biāo)準(zhǔn))；③均實施根治性手術(shù)+規(guī)范化系統(tǒng)淋巴結(jié)清掃術(shù)；④45歲≤年齡≤70歲；⑤術(shù)后患者一般情況好，臨床判斷能耐受術(shù)后輔助化療≥3 w，體力狀況(ZPS)評分≤ 2分，功能狀況(KPS)評分≥70分；⑥預(yù)計生存期≥3個月，心、肝、腎功能、造血系統(tǒng)正常；白細(xì)胞數(shù)≥3.5×109/L，血小板數(shù)≥90×109/L， 血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶≤40 IU/L；血清總膽紅素≤18 μmol/L，肌酐≤130 μmol/L；⑦醫(yī)護(hù)人員知情告知，患者簽署知情同意書。(2) 剔除標(biāo)準(zhǔn)：①實驗期間病情惡化者；患者出現(xiàn)無法耐受的副作用；要求退出治療者；②器官衰竭者；③患有其他獲得性、先天性自身免疫缺陷疾病，或有器官移植史者；④患有不可控制的嚴(yán)重感染性疾病者；⑤對本細(xì)胞治療中所有生物試劑過敏者；⑥患有或并發(fā)T細(xì)胞淋巴瘤者。

1.2臨床資料 收集2012年3月至2013年3月遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院治療的Ⅱa～Ⅲa期NSCLC手術(shù)患者79例，根據(jù)住院號末尾數(shù)隨機(jī)分組，奇數(shù)設(shè)為治療組，偶數(shù)設(shè)為對照組。對照組僅予術(shù)后輔助化療，共40例，男25例，女15例，腺癌16例，鱗癌24例，年齡45～69〔平均(53.50±8.79)〕歲。治療組予術(shù)后輔助化療聯(lián)合DC-CIK細(xì)胞治療3個療程，共39例，男22例，女17例，腺癌16例，鱗癌23例，年齡45～69〔平均(57.23±9.30)〕歲。對照組與治療組性別、年齡、病理分型、臨床TNM分期比較無明顯差異(P>0.05)。

1.3治療前準(zhǔn)備 使用COM.TEC血細(xì)胞分離機(jī)(Fresenius Kabi)采集患者自體外周血單個核細(xì)胞(PBMNCs)，立即送細(xì)胞制備室。在嚴(yán)格無菌條件下，由實驗室技術(shù)人員對采集送至臨床級GMP實驗室的患者PBMNCs參照文獻(xiàn)〔3〕及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行DC-CIK細(xì)胞制備，化療前1 d通過細(xì)胞分離機(jī)與淋巴細(xì)胞分離液獲取患者本人PBMNCs。DC培養(yǎng)：經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液密度梯度離心獲得PBMNCs，經(jīng) RPMI1640培養(yǎng)液洗滌，置于無血清培養(yǎng)基中混懸，在 37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 4 h 后加入粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)(1 000 U/ml)和白細(xì)胞介素(IL)-4(5 000 U/ml) 繼續(xù)培養(yǎng)，每隔2 d換液1次，第5天加入腫瘤壞死因子(TNF)-α(500 U/ml)誘導(dǎo)成熟DC。CIK 細(xì)胞培養(yǎng)：分離后淋巴細(xì)胞加入重組人干擾素(IFN)-γ(1 000 U/ml)和 10%AB 型人血清RPMI1640培養(yǎng)液，24 h后加入小鼠抗人CD3單抗 (100 ng/ml)、IL-2(1 000 U/ml)，以后隔天半量換液維持培養(yǎng)。DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)：收獲第7天DC及CIK細(xì)胞按1∶5計數(shù)混合培養(yǎng) 3 d，隔天補(bǔ)加IL-2(1 000 U/ml) 培養(yǎng)液。

1.4術(shù)后治療方案 (1)對照組：遵抗癌協(xié)會NSCLC化療指南〔4〕，采用含鉑二聯(lián)方案。具體為：長春瑞濱(上海旭東海普藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號11122534)25 mg/m2靜脈注射，第1、8日；順鉑(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，生產(chǎn)批號：12011023)25 mg/m2靜脈注射，第1～3天，4 w為1個周期，共4個周期。(2)治療組：在對照組治療方案的基礎(chǔ)上，聯(lián)合DC-CIK細(xì)胞治療。在化療周期間隔第 2、4、6、8、10 d，將 DC-CIK細(xì)胞用100 ml 0.9%生理鹽水液回輸體內(nèi)，每次回輸細(xì)胞(4～5)×109個，5 次為1個療程，使用3個療程。治療過程中出現(xiàn)胃腸道反應(yīng)、骨髓抑制、肝腎功損害等對癥處理。

1.5觀察指標(biāo) ①治療結(jié)束后，評價完成化療6個月和12個月的生存情況并評價其生活質(zhì)量，主要包括KPS評分、ZPS評分、生活質(zhì)量(QOL)評分；②每次化療前檢測血清癌性標(biāo)志物：所有研究對象抽取空腹肘靜脈血3.0 ml，3 000 r/min離心10 min，取上清待測。采用化學(xué)發(fā)光法測定血清癌胚抗原(CEA)、CYFRA21-1的含量；③記錄并評估兩組治療過程中發(fā)生不良反應(yīng)的人次數(shù)。

1.6統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行χ2及t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1兩組腫瘤復(fù)發(fā)和死亡情況比較 治療后12個月內(nèi)，治療組腫瘤復(fù)發(fā)率明顯低于對照組〔2.6%(1/39) vs 17.5%(7/40)，χ2=4.840,P=0.028〕；治療組死亡率低于對照組〔7.7%(3/39) vs 15.0%(6/40)〕，但無統(tǒng)計學(xué)差異(χ2=1.045，P=0.307)。其中治療組1例死于化療后6個月內(nèi)，2例死于化療后12個月內(nèi)；對照組4例死于化療后6個月內(nèi)，2例死于化療后12個月內(nèi)。

2.2兩組KPS、ZPS、QOL評分比較 化療后6個月兩組KPS、QOL評分無明顯差異(P>0.05)；化療后12個月治療組KPS、QOL評分明顯高于對照組(P<0.05，P<0.01)?；熀?和12個月ZPS評分治療組均明顯低于對照組(P<0.05)，見表1。

2.3兩組化療前血清CEA、CYFRA21-1水平比較 兩組第2、3、4次化療前血清CEA 和CYFRA21-1水平均明顯低于第1次化療前(P<0.05)。第4次化療前，治療組血清CEA水平明顯低于對照組(P<0.05)；第2、3、4次化療前治療組血清CYFRA21-1水平均明顯低于對照組(P<0.05，P<0.01)，見表2。

2.4兩組不良反應(yīng)比較 治療組發(fā)生惡心、嘔吐(34人次)、納差(45人次)、失眠(45人次)人次均明顯低于對照組(67、60、67人次；χ2=7.82,P=0.00;χ2=6.17,P=0.00;χ2=5.03,P=0.02)；而乏力人次數(shù)治療組與對照組比較無明顯差異 (33人次vs 29人次，χ2=2.11,P=0.19)。

表1 兩組KPS、QOL、ZPS評分比較分)

與對照組比較:1)P<0.05，2)P<0.01

表2 兩組不同時點化療前血清CEA及CYFRA21-1水平比較

與本組第1次化療前比較:1)P<0.05；與對照組同一時點比較:2)P<0.05,3)P<0.01

3 討 論

DC-CIK細(xì)胞在臨床應(yīng)用中特別是對于手術(shù)后的癌癥患者，清除殘留極微轉(zhuǎn)移病灶，防止癌細(xì)胞的擴(kuò)散和復(fù)發(fā)，提高患者的自身免疫能力等具有重要作用〔5〕，廣泛應(yīng)用于肝癌、食管癌、直腸癌、乳腺癌、腎癌、宮頸癌、卵巢癌、白血病等惡性腫瘤的術(shù)后治療中〔6～9〕。研究表明〔10〕，化療聯(lián)合DC-CIK治療NSCLC的有效率高達(dá) 41.6%～42.9%。本研究結(jié)果顯示，DC-CIK聯(lián)合化療治療NSCLC的復(fù)發(fā)率明顯低于對照組與既往相關(guān)研究報道一致〔11〕，其可能的機(jī)制是：CIK 細(xì)胞是人PBMNCs在體外經(jīng)多種細(xì)胞因子刺激后獲得一群異質(zhì)性細(xì)胞，該細(xì)胞表面可以表達(dá) CD3和CD56 這2種膜蛋白分子，兼有T淋巴細(xì)胞溶瘤活性和NK細(xì)胞非主要組織相溶性復(fù)合物限制性殺瘤特點。CIK細(xì)胞體外培養(yǎng)細(xì)胞表型發(fā)生變化，其細(xì)胞毒活性與增殖能力大為增強(qiáng)，且對人體骨髓干細(xì)胞和造血祖細(xì)胞幾乎沒有毒性，因而在腫瘤生物治療上表現(xiàn)出強(qiáng)大優(yōu)勢。CIK細(xì)胞進(jìn)入體內(nèi)活化后可以分泌 IL-2、IL-6、TNF-α等多種細(xì)胞因子，此類因子可直接發(fā)揮細(xì)胞毒作用，并可誘導(dǎo)癌細(xì)胞表達(dá) Fas 和 FasL 細(xì)胞表面分子，加速細(xì)胞凋亡。體外實驗表明 CIK 細(xì)胞能誘導(dǎo)并加速人肺癌細(xì)胞株A549早期凋亡〔12〕。CIK 細(xì)胞在體內(nèi)受到其他因子刺激后，可以將胞質(zhì)顆粒釋放到胞外，而促進(jìn)癌細(xì)胞裂解。DC是目前功能最強(qiáng)專職抗原提呈細(xì)胞，成熟DC可通過Ⅱ型組織相容性抗原等途徑呈遞腫瘤抗原，誘導(dǎo)特異性免疫反應(yīng)，抵制腫瘤細(xì)胞免疫逃逸。它既可有效誘導(dǎo)靜止T細(xì)胞增殖，也可促進(jìn)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞和輔助性T淋巴細(xì)胞生成〔13〕。將具有腫瘤抗原提呈能力 DC與細(xì)胞毒效應(yīng)CIK細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)，理論上可明顯提高CIK細(xì)胞毒活性。肺癌患者外周血清CEA、CYFRA21-1水平的連續(xù)動態(tài)監(jiān)測對肺癌的轉(zhuǎn)移和預(yù)后判斷有一定臨床意義，其化療前、后血清中含量變化與治療效果密切相關(guān)〔14〕。腫瘤患者生活質(zhì)量的評價已成為評價腫瘤患者治療療效的重要標(biāo)準(zhǔn)〔15〕。本研究顯示Ⅱa～Ⅲa期NSCLC患者術(shù)后化療聯(lián)合3個療程DC-CIK細(xì)胞治療，可提高肺癌患者綜合治療效果。

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R73

A

1005-9202(2017)24-6118-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.24.049

貴州省省長資金臨床應(yīng)用課題(黔省專合字號2012107號)

1 遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院胸心血管外科

劉達(dá)興(1970-)，男，碩士，主要從事心臟血管外科研究。

姜海燕(1986-)，女，碩士，主要從事肺癌的診斷與治療研究。

〔2016-07-19修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢園)