巨噬細(xì)胞移動抑制因子在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)與意義

孫連桃 肖偉利 (包頭醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院，內(nèi)蒙古 包頭 04040)

巨噬細(xì)胞移動抑制因子在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)與意義

孫連桃 肖偉利1(包頭醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院，內(nèi)蒙古 包頭 014040)

目的探討巨噬細(xì)胞移動抑制因子(MIF)在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)與意義。方法采用免疫組化法檢測52例腎透明細(xì)胞癌組織及相應(yīng)癌旁正常組織中MIF的表達(dá)，并分析其表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果腎透明細(xì)胞癌組織中MIF的陽性率(40/52)顯著高于癌旁正常組織(8/52)(P<0.05)。MIF陽性表達(dá)率與分化程度無關(guān)(P>0.05)。Ⅲ～Ⅳ期腎透明細(xì)胞癌組織中MIF陽性率高于Ⅰ～Ⅱ期。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的MIF陽性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。MIF表達(dá)與腫瘤直徑密切相關(guān)(P<0.05)，與患者性別及年齡均無關(guān)(P>0.5)。結(jié)論MIF在腎透明細(xì)胞癌組織中高表達(dá)，并促進(jìn)腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展，可成為腎癌診斷的判斷指標(biāo)。

腎透明細(xì)胞癌；巨噬細(xì)胞移動抑制因子

腎癌是泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，僅次于膀胱癌。其中腎透明細(xì)胞癌約占腎癌的85%，且發(fā)病率近年來呈上升趨勢〔1〕。雖然隨著醫(yī)學(xué)影像技術(shù)不斷發(fā)展，腎癌的早期診斷率有所提高，但仍有部分患者在診斷初期就發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移病灶，使得5年生存率不足10%，而且患者行根除術(shù)后仍會復(fù)發(fā)，成為泌尿外科醫(yī)師甚為棘手的問題〔1〕。近年研究發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞移動抑制因子(MIF)在眾多腫瘤組織中高表達(dá)，如乳腺癌、膀胱癌、肝癌、胃癌等，而且MIF與上述腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)〔2～6〕，但有關(guān)其在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)情況尚未見報道。本文旨在探討MIF在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來源 收集內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院和包頭市腫瘤醫(yī)院泌尿外科2014年3月至2017年3月病理科確診為腎癌的癌組織石蠟標(biāo)本52例，所有標(biāo)本均為腎透明細(xì)胞癌。其中男34例，女18例，<60歲者24例，≥60歲者28例，年齡42～76歲，中位年齡62歲。腫瘤直徑<3 mm的患者25例，腫瘤直徑≥3 mm的患者27例。根據(jù)WHO(2016)推薦WHO/ISUP分級系統(tǒng)分級：Ⅰ～Ⅱ級合并為高分化，26例，Ⅲ級為中分化，15例，Ⅳ級為低分化，11例。根據(jù)美國癌癥聯(lián)合委員會〔AJCC(2002)〕腎癌臨床分期標(biāo)準(zhǔn)分期：Ⅰ～Ⅱ期29例，Ⅲ+Ⅳ23例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者10例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者42例。另取腎癌旁正常組織52例作為對照。所有患者術(shù)前均未接受任何化療、放療、靶向治療及免疫治療。

1.2免疫組化 標(biāo)本先于二甲苯中脫蠟，再依次于95%、85%、75%無水乙醇中繼續(xù)脫蠟。3%過氧化氫消除內(nèi)源性過氧化物，并于檸檬酸鹽抗原修復(fù)盒中修復(fù)。10%山羊血清室溫下封閉30 min。一抗溶液，4℃過夜孵育，第2天二抗溶液室溫下孵育，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色后沖洗。蘇木精復(fù)染、1%鹽酸分化，氨水反藍(lán)。梯度乙醇中脫水，二甲苯中透明，中性樹脂封片，并于顯微鏡下觀察。以磷酸鹽緩沖液(PBS)液代替一抗作為陰性對照。

1.3結(jié)果判斷 MIF蛋白以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色及棕褐色顆粒為陽性表達(dá)，由工作經(jīng)驗豐富的病理科醫(yī)師采用雙盲法閱片。在高倍鏡的條件下隨機(jī)的選擇5個視野，觀察細(xì)胞的染色情況。按細(xì)胞的染色程度評分：未染色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。按陽性細(xì)胞所占百分率評分：無陽性細(xì)胞為0分，陽性細(xì)胞數(shù)<25%為1分，25%～50%為2分，≥50%為3分。每個視野陽性細(xì)胞所占百分率評分乘以染色評分即是該切片的總得分：0～1分表示陰性(-)，2～3分表示弱陽性(+)，4～6分表示陽性()，6分以上表示()。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，計數(shù)資料采用和比率進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)描述，并采用卡方檢驗或Fisher確切概率法比較組間MIF陽性表達(dá)率的差異，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1MIF在腎透明細(xì)胞癌組織及癌旁正常組織中的表達(dá)MIF定位細(xì)胞質(zhì)中，以棕黃色或棕褐色為陽性表達(dá)，腎透明細(xì)胞癌組織(40/52)中MIF的陽性率顯著高于癌旁正常組織(8/52)(P<0.05)。見圖1，表1。

2.2MIF與腎透明細(xì)胞癌病理分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系 MIF陽性表達(dá)率與分化程度無關(guān)(P>0.05)。Ⅲ～Ⅳ期中MIF陽性表達(dá)率高于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的MIF陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P<0.05)。見表2。

圖1 MIF在腎透明細(xì)胞癌組織及癌旁正常組織中的表達(dá)(×200)

分組nMIF-+陽性率(%)χ2值P值癌旁正常組織52448153839619<0001癌組織5212407692

表2 MIF與腎透明細(xì)胞癌病理分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系(n)

2.3MIF與腎透明細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系 MIF的陽性表達(dá)率與腫瘤直徑密切相關(guān)(P<0.05)，MIF的陽性表達(dá)率與性別、年齡無關(guān)(P>0.05)。見表3。

表3 MIF與腎透明細(xì)胞癌其他臨床病理特征的關(guān)系(n)

3 討 論

MIF是1970年Bloom等在研究遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)中發(fā)現(xiàn)的一種能夠抑制巨噬細(xì)胞移動的多功能因子，MIF基因定位于人第22號染色體上，由于此基因片段中含有內(nèi)分泌激素調(diào)控的序列，所以以往對于MIF的研究主要集中于免疫系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)相關(guān)疾病中。MIF主要來源于活化的T細(xì)胞，能夠表達(dá)于包括腎小管上皮細(xì)胞、肝細(xì)胞、表皮細(xì)胞等，通過內(nèi)分泌或者旁分泌促進(jìn)IL-6、IL-8等炎癥因子的分泌，進(jìn)而引起各種炎癥反應(yīng)〔7〕。近些年研究還證實MIF與胰腺癌，肝癌，膀胱癌，胃癌等腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)〔2～6〕。而且采用ELISA法證實了腎透明細(xì)胞癌患者血清中MIF表達(dá)量顯著高于健康對照組，并且發(fā)現(xiàn)RNA干擾腎癌細(xì)胞中MIF表達(dá)，能顯著的降低細(xì)胞活力，細(xì)胞克隆形成能力及成瘤能力。進(jìn)一步說明MIF在腎癌的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。本研究結(jié)果表明腎癌組織(40/52)中MIF的陽性率顯著高于癌旁正常組織(8/52)，與MIF在其他腫瘤中的表達(dá)趨勢一致〔2-6〕。同時本實驗還分析了MIF與腎癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)MIF與腫瘤臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤大小呈正相關(guān)，與患者性別及年齡、組織分化程度無關(guān)。另外馬寧等〔3〕研究不僅證實胃癌組織中MIF陽性表達(dá)高于瘤旁組織，還證實MIF與TNM分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。陶斌勝等〔5〕研究亦證實肝癌組織中MIF表達(dá)顯著高于癌旁正常組織。同時MIF還與腫瘤大小，有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。從而說明隨著腎癌增殖程度越強(qiáng)，腫瘤組織塊越大，腫瘤惡性程度越高，MIF陽性率越高，提示高表達(dá)的MIF對腎透明細(xì)胞癌的增殖、惡性程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移起著促進(jìn)作用，MIF可能能夠成為腎透明細(xì)胞癌診斷的有效指標(biāo)。

另外有研究證實：(1)MIF通過與其受體CD74相互作用，激活細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK)，蛋白激酶(AKT)及絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號通路進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞的增殖〔8〕。將MIF/CD74信號軸抑制劑4-IPP作用于結(jié)腸癌細(xì)胞，能顯著的抑制AMPK及AKT信號通路活性，并使癌細(xì)胞線粒體損傷并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡〔9〕。(2)通過提高胃癌細(xì)胞(BGC-823)及(MKN-28)中MIF的表達(dá)，能顯著的激活MAPK信號通路，并下調(diào)CyclinD1及p53表達(dá)，上調(diào)Mcm2及增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)表達(dá)，進(jìn)而促使癌細(xì)胞細(xì)胞周期G1期向S快速轉(zhuǎn)換〔10〕。siRNA干擾乳腺癌細(xì)胞MCF-7中MIF表達(dá)，能顯著的降低MAPK，p44/42MAPK磷酸化水平，進(jìn)而下調(diào)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF-C)表達(dá)，最終抑制腫瘤細(xì)胞的增殖與血管生成〔11〕。(3)RNA干擾口腔鱗狀細(xì)胞Tca8113，HN5及SCC25中MIF表達(dá)，能顯著的下調(diào)MMP9表達(dá)，繼而抑制癌細(xì)胞侵襲〔12〕。由此推測出MIF可能是通過與其受體CD74相互作用進(jìn)而激活A(yù)KT、ERK及MAPK信號通路繼而促使腎癌細(xì)胞的惡性增殖；也可能是MIF直接激活MAPK信號通路繼而調(diào)控下游靶基因表達(dá)，促使腎癌細(xì)胞快速增殖或并發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移；又或者是MIF能直接上調(diào)MMPs表達(dá)進(jìn)而促使腎癌細(xì)胞發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移。

綜上所述，MIF的表達(dá)與腎透明細(xì)胞癌組織的TNM分期，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，腫瘤直徑密切相關(guān)，與患者性別、年齡、腎透明細(xì)胞癌組織的分化程度無關(guān)。因此，MIF在腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展中可能起促進(jìn)作用，但其具體作用機(jī)制仍需深入探討。

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R737.11

A

1005-9202(2017)24-6113-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.24.047

內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)基金(No.2014MS0807)

1 內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院

孫連桃(1972-)，女，碩士，副教授，主要從事醫(yī)學(xué)檢驗研究。

〔2017-09-03修回〕

(編輯 袁左鳴)