原發(fā)性高血壓血管緊張素轉(zhuǎn)化酶基因I/D多態(tài)性與厄貝沙坦降壓療效及血漿腎素血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)水平的相關(guān)性

黃 紅 李 燕 全勝麟 李宗禹 陳曉云 唐林青 沙艷梅 葉海瓊 周 黎 黃順算

(昆明理工大學(xué)附屬醫(yī)院 云南省第一人民醫(yī)院內(nèi)干科，云南 昆明 650032)

·心、腦血管及代謝性疾病·

原發(fā)性高血壓血管緊張素轉(zhuǎn)化酶基因I/D多態(tài)性與厄貝沙坦降壓療效及血漿腎素血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)水平的相關(guān)性

黃 紅 李 燕 全勝麟 李宗禹1陳曉云2唐林青1沙艷梅2葉海瓊3周 黎 黃順算1

(昆明理工大學(xué)附屬醫(yī)院 云南省第一人民醫(yī)院內(nèi)干科，云南 昆明 650032)

目的分析原發(fā)性高血壓(EH)ACE基因I/D多態(tài)性與厄貝沙坦降壓療效及血漿腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)水平的相關(guān)性。方法納入云南漢族、白族及傣族EH患者450例，檢測ACE基因多態(tài)性，根據(jù)基因型進行分組，所有患者給予厄貝沙坦治療8 w后評估降壓療效，監(jiān)測治療前后血漿RAAS活性的變化。結(jié)果EH患者中ACE基因I/D多態(tài)性分布與種族無明顯關(guān)系(P>0.05)；不同基因型中厄貝沙坦降壓療效、治療前后血漿RAAS活性降低程度具有差異性，表現(xiàn)為DD型>ID型>Ⅱ型；采用Logistic回歸分析治療有效率的影響因素，血管緊張素Ⅱ活性改變與治療有效率呈正相關(guān)(OR值1.038)。結(jié)論ACE I/D多態(tài)性可能是影響EH患者對厄貝沙坦降壓反應(yīng)的重要指標，通過調(diào)節(jié)血管緊張素Ⅱ活性形成。

原發(fā)性高血壓；血管緊張素轉(zhuǎn)化酶；腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)

原發(fā)性高血壓(EH)是最常見的心血管疾病之一，血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑(ARB)厄貝沙坦作為一線抗高血壓藥物，通過選擇性拮抗血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(AT)1受體，抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)而發(fā)揮降壓作用，但往往存在降壓療效的個體差異，影響治療的依從性。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)基因能影響ACE活性，已成為研究RAAS公認的主要基因型，也是EH相關(guān)研究最重要的候選基因〔1〕。目前，對于降壓藥物療效差異形成機制的研究，僅局限于基因多態(tài)性的研究，缺乏血漿RAAS水平的對照研究。本研究探討EH患者ACE基因I/D多態(tài)性與血漿RAAS水平及ARB藥物的降壓療效的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1資料 納入云南省第一人民醫(yī)院門診及住院的漢族、大理白族及德宏傣族初發(fā)EH患者450例，漢族、白族及傣族各150例，男259例，女191例，平均年齡(61.11±11.74)歲，均為1～2級高血壓，排除繼發(fā)性高血壓、糖尿病和肝、腎病史及可能影響本試驗的其他疾病者。所有患者未服用任何降壓藥物。

1.2ACE基因I/D多態(tài)性檢測及分組 ①基因組DNA的提?。簯?yīng)用小劑量血液基因組DNA抽提試劑盒提取外周血白細胞DNA。制備的DNA樣品于紫外分光光度計測定其260 nm、280 nm OD值，檢測DNA的純度和含量，并用瓊脂糖凝膠電泳觀察其完整性。②ACE基因型分析：采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)進行ACE基因I/D多態(tài)性，以外周血提取的DNA為模板，以人工合成的寡核苷酸為引物，PCR儀上進行擴增。上游引物：5'-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3′，下游引物：5′-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3′，擴增產(chǎn)物片段大小為490 bp和190 bp。PCR反應(yīng)體系20 μl，94℃預(yù)變性5 min，94℃變性1 min，58℃退火1 min，72℃延伸1 min，共35個循環(huán)，最后72℃延伸10 min，4℃保溫。產(chǎn)物經(jīng)2%的瓊脂糖凝膠進行電泳分析，隨機選取490 bp擴增片段和190 bp擴增片段進行測序，以確定擴增片段正確。③根據(jù)ACE基因I/D多態(tài)性檢測結(jié)果將患者分為II基因型組、ID基因型組和DD基因型組。

1.3血樣采集 分別抽取EH患者治療前、厄貝沙坦治療8 w后清晨空腹平臥位靜脈血，應(yīng)用放射免疫法測定血漿腎素、血管緊張素Ⅰ4℃、血管緊張素Ⅰ37℃、血管緊張素Ⅱ、醛固酮活性，試劑盒由北京北方生物技術(shù)研究所提供。

1.4血壓觀察指標 ①主要指標試驗開始前及治療后2、4、6、8 w分別測量血壓，根據(jù)治療后8 w血壓較治療前下降程度來進行降壓療效判斷。②療效評價指標治療前后血壓值對比，根據(jù)中華人民共和國衛(wèi)生部藥物臨床試驗規(guī)范抗高血壓藥物的療效判斷標準分為顯效、有效及無效，有效率=顯效+有效。顯效：舒張壓(DBP)下降≥10 mmHg并降至正常或DBP未降至正常但下降≥20 mmHg。有效：DBP下降未達10 mmHg但已降至正常或下降10～19 mmHg。無效：未達以上標準。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件進行χ2、秩和及t檢驗，Logistic回歸分析相關(guān)影響因素。

2 結(jié) 果

2.1ACE基因I/D多態(tài)性結(jié)果 PCR產(chǎn)物經(jīng)2%的瓊脂糖凝膠進行電泳分析：只出現(xiàn)490 bp條帶者為插入純合型(II型)；只出現(xiàn)190 bp條帶者為缺失純合型(DD型)；出現(xiàn)490 bp和190 bp兩條帶者，則為插入/缺失雜合型(ID型)，見圖1。云南漢族、傣族及白族ID、II、DD基因構(gòu)成比無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，見表1。

2.2各基因型組間治療有效率比較 不同基因型組間高血壓患者治療效果有統(tǒng)計學(xué)差異(H=40.398，P<0.001)。II組、DD組與ID組間任意兩組間比較有統(tǒng)計學(xué)差異，而且依據(jù)平均秩次值判斷，治療效果：DD組>ID組>II組，見表2。

1：II；2：ID；3：ID；4：II；5：II；6：ID；7：II；8：ID；9：ID；10：ID；11：ID；12：II；13：ID；14：II；15：II；16：ID；17：II；18：DD；19：ID；20：II圖1 ACE基因I/D多態(tài)性

組別IDIIDDχ2值P值漢族55(367)76(507)19(126)02710992白族56(373)69(460)25(167)傣族54(360)72(480)24(160)

2.3各基因型組間治療前后RAAS活性差值比較 方差分析結(jié)果顯示：不同基因型組間接受治療后腎素、血管緊張素Ⅰ 4℃、37℃、血管緊張素Ⅱ和醛固酮的下降值有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。兩兩比較(調(diào)整檢驗水準為α=0.017)后均表現(xiàn)為DD組>ID組>II組。見表3。

表2 不同基因型組間高血壓患者治療效果比較〔n(%)〕

與ID組比較：1)P<0.05

表3 三種基因型組間治療前后RAAS活性差值比較

2.4治療前后血漿RAAS活性改變與厄貝沙坦降壓有效性的關(guān)系 采用Logistic回歸分析，以厄貝沙坦治療后有效率為應(yīng)變量，而以腎素、血管緊張素Ⅰ 4℃、血管緊張素Ⅰ 37℃、血管緊張素Ⅱ、醛固酮降低值為自變量，采用后退法分析，結(jié)果進入方程的自變量僅有血管緊張素Ⅱ下降值，回歸系數(shù)為正值(β=0.038)，表示血管緊張素Ⅱ下降值與治療的有效率呈正相關(guān)(SE=0.009,Waldχ2=17.910,P<0.001)。血管緊張素Ⅱ下降值增加1個單位，治療結(jié)局為有效的可能性增加1.038倍(95%CI1.020～1.057)。

3 討 論

RAAS的激活是EH發(fā)病的主要機制。藥物治療是EH主要治療手段，ARB作為一線抗高血壓藥物往往存在著降壓療效的個體差異。厄貝沙坦作為ARB代表性藥物，是血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑，抑制血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化為血管緊張素Ⅱ，能特異性地拮抗AT1受體，選擇性地阻斷血管緊張素Ⅱ與AT1受體的結(jié)合，抑制血管收縮和醛固酮的釋放，產(chǎn)生降壓作用。ACE是RAAS的重要組成部分，在高血壓發(fā)病中起著至關(guān)重要的作用〔2〕。目前大多數(shù)研究支持ACE基因I/D多態(tài)性是研究EH遺傳基礎(chǔ)的最有吸引力的候選基因，與EH發(fā)病具有相關(guān)性〔3～5〕。隨著人類基因組計劃的實施及藥物基因組學(xué)研究的進展，ACE I/D多態(tài)性不僅與EH發(fā)病有關(guān)，還與EH降壓藥物治療差異有關(guān)〔6,7〕，是導(dǎo)致藥物療效差異的重要原因?；蚨鄳B(tài)性是如何導(dǎo)致降壓療效的差異，與血漿RAAS活性變化有關(guān)嗎？本研究發(fā)現(xiàn)EH患者中ACE基因I/D多態(tài)性分布與種族無明顯關(guān)系；厄貝沙坦降壓療效在不同基因型中具有差異性，降壓療效DD型>ID型>II型，這與以往研究結(jié)果相符〔8～10〕。本研究顯示EH患者不同基因型對ARB藥物治療反應(yīng)性有差異，可能是通過調(diào)節(jié)血管緊張素Ⅱ活性形成?；蚨鄳B(tài)性是影響個體對藥物治療反應(yīng)的重要因素，尤其是藥物作用靶點的遺傳多態(tài)性是藥物在人體內(nèi)處置過程和產(chǎn)生效應(yīng)的決定因素，是藥物代謝和效應(yīng)個體差異的重要因素。個體遺傳背景不同所致的降壓藥物療效的差異，一直是困擾臨床醫(yī)師合理選擇降壓藥物的難點之一，檢測高血壓患者ACE基因多態(tài)性，篩選出ARB治療最合適的基因型，指導(dǎo)合理選擇最佳降壓治療方案，進行個體化治療，已成為一個新的挑戰(zhàn)，也是個性化醫(yī)療的要求。

1黨愛民，陳炳偉.腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓〔J〕.中國循環(huán)雜志，2012；27(2)：83-4.

2張金生，徐 娜，王俊英，等.血清中血管緊張素轉(zhuǎn)化酶測定的臨床應(yīng)用〔J〕.國外醫(yī)學(xué)·臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊，2005;26(10)：730-2.

3Destro M，Preti P，Dospina A，etal.Olmesaraman medoxomil：recent clinical and experimental acquistiom〔J〕.Exper Opin Drug Metab Toxicol，2009;5(9)：1149-57.

4Ramachandran V，Ismail P，Stanslas J，etal.Association of insertion/deletion polymerphism of angiotensin-converting enzyme gene with essential hypertension and type 2 diabetes mellitus in Malaysian subjects〔J〕.J Renin-Angiotensin-Aldosterone System，2008;9(4)：208-14.

5Ji LD，Zhang LN，Shen P，etal.Association of angiotensiongen gene M235T and angiotensin-converting enzyme gene I/D polymorphisms with essential hypertension in Han Chinese population：a meta-analysis〔J〕.J Hypertens，2010;28(3)：419-28.

6唐曉鴻，袁 洪，李麗軍,等.高血壓病患者ACE基因I/D多態(tài)性與卡托普利咳嗽副反應(yīng)、ACE水平的關(guān)系〔J〕.實用醫(yī)學(xué)雜志，2009;16(2)：327-9.

7Klungel OH，Schelleman H，van Duijn CM，etal.Drug-gene interaction the insertion/deletion polymorphism 0f the angiotensin-converting enzyme gene and antihypertensive therapy〔J〕.Ann Pharmacother，2006;40(2)：212-8.

8胡學(xué)俊，柯永勝.血管緊張素轉(zhuǎn)化酶基因I/D多態(tài)性與奧美沙坦酯降壓療效的臨床研究〔J〕.國際老年醫(yī)學(xué)雜志，2011;32(1)：5-10.

9Ortlepp JR，Hanrath P，Mevissen V，etal.Variants of the CYP11B2 gene predict response to therapy with cadesartan〔J〕.Eur J Pharmacol，2002;445(1-2)：151-2.

10Nakamura Y，Tamaki S，Uchida Y，etal.Angiotensin converting enzyme genotype influences the response to the angiotensinⅡ receptor antagonist losartan in patients with hypertension〔J〕.Hypertens Res，2004;27(3)：137-40.

R544.1

A

1005-9202(2017)24-6057-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.24.022

2013年度云南省教育廳科學(xué)研究基金項目(2013C211)；云南省科技廳-昆明醫(yī)科大學(xué)應(yīng)用基礎(chǔ)研究聯(lián)合專項資助(2013FB202)；云南省衛(wèi)生和計劃生育委員會內(nèi)設(shè)研究機構(gòu)老年病防治研究中心科研項目(2016NS201)

1 德宏州第二人民醫(yī)院內(nèi)一科 2 大理州人民醫(yī)院干療科

3 云南省第一人民醫(yī)院內(nèi)分泌科

李 燕(1961-)，女，碩士，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，主要從事老年病學(xué)及神經(jīng)病學(xué)研究。

黃 紅(1974-)，女，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事老年心血管及消化系統(tǒng)疾病研究。

〔2016-10-13修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢園)