蘋果無病毒苗木的繁育技術(shù)

李曉瓊

【摘要】：蘋果病毒主要通過嫁接途徑傳染，隨接穗等無性繁殖材料擴(kuò)散。因此，培育無病毒母本樹，栽培無病毒苗木，是防治蘋果病毒病的根本對策。而且無病毒苗木抗逆性強(qiáng)，能適應(yīng)山地、灘地栽培，且具有良好的園藝性狀和生產(chǎn)性能，可減少化肥施用量，降低生產(chǎn)成本，減少環(huán)境污染，有利于生產(chǎn)無公害優(yōu)質(zhì)果品。

【關(guān)鍵詞】：蘋果樹；無病毒樹苗；培育技術(shù)

果樹病毒病及其類病毒病害均經(jīng)嫁接傳染，隨繁殖材料遠(yuǎn)距離傳播。而一旦感染病毒，終身則不得免除，加之目前沒有能夠有效防止病毒病的化學(xué)藥劑和生物制品。因此，果樹無病毒種苗的生產(chǎn)在病毒病防治上具有重要地位。

1、原種培育和保存

1.1待脫毒材料

凡準(zhǔn)備進(jìn)行脫毒處理的品種和砧木均應(yīng)是通過國家或省農(nóng)作物品種審定委員會審定的品種和砧木。選取經(jīng)3年以上觀察未發(fā)現(xiàn)過銹果病、綠皺果病和花葉病癥狀的結(jié)果樹作為待脫毒材料母本樹，從其上采集接穗作為待脫毒材料。

1.2脫毒處理

1.2.1熱處理脫毒法

于每年4月中旬，從待脫毒品種植株上剪取接穗，采用切接法嫁接在盆栽實(shí)生砧苗上，每品種10-15盆。嫁接成活后，按常規(guī)苗在室外進(jìn)行管理。翌年2月上中旬將待脫毒盆栽苗移入溫室，從地面以上20cm剪截留3-5個(gè)飽滿芽。同時(shí)將盆栽砧木移入溫室，使其萌動(dòng)生長。待脫毒苗萌動(dòng)長出幼葉后，移入恒溫?zé)崽幚硐洌瑢囟瓤刂圃?8-30℃。3-5d后待盆栽苗長出3-5片新葉時(shí)，將溫度調(diào)至（38±1）℃，進(jìn)行熱處理并開始計(jì)時(shí)。熱處理28d后，從抽發(fā)的新梢頂端，切取1.0-1.5cm的嫩梢，采用劈接或皮下嫁接法嫁接在預(yù)先準(zhǔn)備好的盆栽實(shí)生砧木上，用塑料薄膜包扎，并套上白色透明塑料袋保溫，放陰涼處，2周后取下塑料袋，約10d后再移入溫室內(nèi)有陽光處，待長出3-5片新葉后移到室外鍛煉10-15d，即可移入苗圃，按正常苗進(jìn)行管理。

1.2.2莖尖培養(yǎng)脫毒法

（1）脫毒材料準(zhǔn)備。從田間大樹上切取2-3cm長的新梢頂尖，用70%酒精浸漬30s，用0.1%升汞滅菌5min，無菌水沖洗3-5遍，在解剖鏡下剝離幼葉和葉原基，切取0.1-0.2mm的莖尖，接種到分化培養(yǎng)基上，在（25±2）℃、光照度1500-2000lx、光照10h/d的條件下培養(yǎng)。每個(gè)月?lián)Q1次培養(yǎng)基，3-4個(gè)月后可分化出新芽。

（2）增殖培養(yǎng)。培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件與初代培養(yǎng)相同，每隔30-40d轉(zhuǎn)接1次。增殖試管苗可采用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行病毒初檢，帶毒樣品剔除或進(jìn)行熱處理脫毒。

（3）誘導(dǎo)生根。從初檢不帶毒樣品上切取長1.5cm的嫩梢插入生根培養(yǎng)基中，在25℃下經(jīng)15-20d即可長出新根。對生根率較低的品種可適當(dāng)調(diào)整生長調(diào)節(jié)劑的濃度或加入間苯三酚或增加培養(yǎng)代數(shù)。

（4）移栽。栽前將組培生根苗置于強(qiáng)光下，閉瓶鍛煉2d（加少量水）。以腐殖土、砂或蛭石為基質(zhì)，洗凈根部粘附的培養(yǎng)基后栽到基質(zhì)中，澆透水，蓋上塑料薄膜和報(bào)紙保溫遮陰，10d后逐漸通風(fēng)透光，每周澆1次1/4-1/8MS營養(yǎng)液促進(jìn)生長。初春為移栽適期，溫度保持在15-25℃。（5）移入苗圃。將移栽成活的組培苗移到室外煉苗1-2周。圃地開溝打垅，施入基肥，將苗帶土移栽，灌足水。

（6）病毒檢測。8月份從移栽成活苗上剪取帶12-15個(gè)飽滿芽的枝條，按芽系編號，采用指示植物進(jìn)行鑒定。檢測后保存無病毒的芽系，將帶病毒的芽系剔除或再次熱處理。

1.3脫毒材料的病毒檢測

經(jīng)脫毒處理獲得的材料先通過血清學(xué)方法進(jìn)行檢測，顯陽性反應(yīng)的剔除，顯陰性反應(yīng)的再采用木本指示植物法進(jìn)行檢測。

1.4無病毒原種的保存

1.4.1保存方式

蘋果品種和砧木，經(jīng)過脫毒處理和病毒檢測后，確認(rèn)無病毒后即可作為無病毒原種，保存在培育原種的單位，保存的方式有田間原種保存圃保存和室內(nèi)組培保存，有條件的建立基因庫保存。

（1）田間原種保存圃保存。無病毒原種樹最好盆栽于有防蟲保護(hù)網(wǎng)設(shè)備的網(wǎng)室內(nèi)或?qū)ｉT的溫室里，并遠(yuǎn)離有病毒潛伏來源的果園2km以上。（2）組培保存。由組織培養(yǎng)方法獲得的無病毒原種可以保留在瓶內(nèi)繼代培養(yǎng)。如果需用接穗，可以擴(kuò)繁幾代，移至田間。

1.4.2病毒檢測

無病毒原種樹每5年應(yīng)進(jìn)行1次病毒檢測，發(fā)現(xiàn)問題即剔除。檢測機(jī)構(gòu)要將病毒檢測結(jié)果報(bào)告主管部門。

2、苗木繁育

2.1苗圃的建立

選擇的苗圃地應(yīng)地勢平坦，有灌溉條件，土壤肥沃，有機(jī)質(zhì)含量豐富，酸堿度適中，距一般蘋果、梨園或一般生產(chǎn)性苗圃50m以上，5年沒有種植過蘋果樹、梨樹或繁育過蘋果苗、梨苗，交通方便的地方。

2.2苗圃規(guī)劃和建設(shè)

苗圃規(guī)劃應(yīng)從便于管理的角度出發(fā)，劃分為若干小區(qū)。規(guī)劃出實(shí)生苗播種區(qū)、無性系砧木繁殖區(qū)、成苗培養(yǎng)區(qū)以及休閑區(qū)等。并按規(guī)劃設(shè)計(jì)出各級道路、排灌系統(tǒng)，并統(tǒng)籌安排，平整土地，改良土壤，以及增施有機(jī)肥。

2.3實(shí)生砧木培育

砧木種子必須采自無病毒砧木采種園或經(jīng)病毒檢測確認(rèn)無病毒的種子。秋季或早春播種。播前每667m2施有機(jī)肥2500-3000kg、磷肥100kg，深翻土地，平整作畦，施用殺菌劑和殺蟲劑，進(jìn)行土壤消毒。播種方法和田間管理與一般生產(chǎn)性苗圃相同。

2.4無性系砧木培育

無性系砧木繁殖材料，必須來自無病毒母本園。繁殖方法：（1）直接從無病毒母本園引進(jìn)無性系砧木自根苗，經(jīng)過一年集中培育，秋季嫁接栽培品種；（2）從無病毒母本園采集無性系砧木種條，嫁接在無病毒的實(shí)生砧木上，準(zhǔn)備培養(yǎng)中間砧木，然后再嫁接無毒品種接穗；（3）用組織培養(yǎng)方法快速繁殖無病毒無性系砧木。

2.5嫁接苗的管理

2.5.1接穗的采集

接穗必須從無病毒蘋果品種采穗圃采集，剪下的接穗立即剪去葉片，按株分扎成捆，并登記母本樹的品種（品系）名稱及采集時(shí)間。

2.5.2嫁接

秋季采用芽接法，春季采用枝接法，接后要按品種、品系分別記載。補(bǔ)接時(shí)，必須保證與原來嫁接的母株相同，否則不予補(bǔ)接。

結(jié)語：

從原種培育和保存、母本園的建立、病毒檢測、檢察記載及苗木繁育管理技術(shù)等方面，詳細(xì)介紹了無病毒苗木繁育體系的各個(gè)組成部分及詳細(xì)操作規(guī)程，以期規(guī)范我國無病毒苗木繁育行為，推進(jìn)我國苗木繁育產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展。

【參考文獻(xiàn)】：

[1]李亞蕓，蘇瑞芳，陳小飛。蘋果無病毒苗木繁育技術(shù)規(guī)程[J].山西果樹，2012（3）：42-44.

[2]李德智。蘋果無病毒苗木繁育技術(shù)及品種[J].北京農(nóng)業(yè)，2006（6）：24.

[3]孫運(yùn)村，徐德坤，崔梅，等。蘋果無毒苗嫁接繁育技術(shù)[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016（5）：27.