MTHFR C677T 基因多態(tài)性在佳木斯地區(qū)健康人及復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者中的分布頻率①

方 芳，方 舟，沈慶明，荊洪英

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥劑科，黑龍江 佳木斯 154003)

MTHFR C677T 基因多態(tài)性在佳木斯地區(qū)健康人及復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者中的分布頻率①

方 芳，方 舟，沈慶明，荊洪英

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥劑科，黑龍江 佳木斯 154003)

目的：探究MTHFR C677T基因在佳木斯地區(qū)健康人和復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者的基因型及等位基因的分布頻率。方法：采用熒光染色原位雜交方法檢測(cè)健康人與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者的MTHFR C677T基因型。結(jié)果：健康人CC型、CT型、TT型分別為11.9%、46.6%、41.5%，C等位基因和T等位基因分別為35.2%和64.8%，流產(chǎn)患者CC型、CT型、TT型分別為24.3%、36.8%、38.9%，C等位基因和T等位基因分別為42.7%和57.3%。結(jié)論：佳木斯地區(qū)健康人和復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者的MTHFR C677T基因型及等位基因的分布頻率有顯著性差異。

MTHFR C677T；熒光染色原位雜交；復(fù)發(fā)性流產(chǎn)；等位基因

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(recurrent pregnancy loss,RPL)是指妊娠20周之前與同一性伴侶連續(xù)發(fā)生≥3次的自然流產(chǎn)，且不存在染色體、解剖、內(nèi)分泌和自身免疫功能異常以及生殖道感染等病因，發(fā)病率約為1%～3%[1]。這種情況嚴(yán)重影響著孕婦。本文通過(guò)對(duì)居住在佳木斯及其周邊婦女的MTHFR(677C>T)多態(tài)性分布情況，研究復(fù)發(fā)性流產(chǎn)與MTHFR C677T基因多態(tài)性的關(guān)系，為復(fù)發(fā)性流產(chǎn)疾病的基因診斷和基因?qū)蛩幬镏委熖剿鞒鲆粭l新的方法與手段。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

健康人：為我院育齡女性健康志愿者118例，無(wú)流產(chǎn)史及不良病史。流產(chǎn)患者：自2014-12～2015-10在我院計(jì)劃生育門(mén)診就診的患者144例，年齡26～39歲。入選試驗(yàn)對(duì)象需使用EDTA真空采血管采集外周靜脈血5mL，用來(lái)檢測(cè)MTHFR C677T基因型。

1.2 方法

本文采用的方法是熒光染色原位雜交方法。(1)富集白細(xì)胞:取200μL新鮮全血加入1100μL氯化銨溶液中。顛倒幾次混勻后室溫放置5min。然后離心機(jī)3000r/min (700g) 離心5min，用移液槍吸出上清液，保留管底白細(xì)胞。(2)裂解保存:在富集了白細(xì)胞的管中加入50μL耀金保，用槍吹吸或震蕩試管混勻。(3)加樣:取1.5μL直接加入待測(cè)基因?qū)?yīng)的耀金分試劑中，上機(jī)檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為具有顯著性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

MTHFR C677T基因型和等位基因分布情況，見(jiàn)表1。以下數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS 17.0軟件進(jìn)行處理，健康人與流產(chǎn)患者CC/CT/TT三種基因型經(jīng)χ2檢驗(yàn)，(χ2=6.992，P<0.05)，C/T等位基因經(jīng)χ2檢驗(yàn)(χ2=3.090，P>0.05)，流產(chǎn)患者與健康人基因型分布之間的差異有顯著性。

表1 健康人和流產(chǎn)患者M(jìn)THFR C677T基因型及等位基因頻率分布(%)

本地區(qū)健康人與報(bào)道健康人CC/CT/TT三種基因型經(jīng)χ2檢驗(yàn)(χ2=79.436，P<0.01)，C/T等位基因經(jīng)χ2檢驗(yàn)(χ2=83.351，P<0.01)，本地區(qū)健康人與報(bào)道健康人基因型分布及等位基因頻率分布之間的差異有高度顯著性。流產(chǎn)患者與報(bào)道流產(chǎn)患者CC/CT/TT三種基因型經(jīng)χ2檢驗(yàn)(χ2=62.827，P<0.01)，C/T等位基因經(jīng)χ2檢驗(yàn)(χ2=9.395，P<0.01)，流產(chǎn)患者與報(bào)道流產(chǎn)患者基因型分布及等位基因頻率分布之間的差異有高度顯著性。

從上述結(jié)果可以看出：本地區(qū)人與報(bào)道的基因型分布及等位基因頻率分布之間的差異具有高度顯著性，說(shuō)明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)生存在地域性差異。本地區(qū)T等位基因所占比例為64.8%，說(shuō)明T等位基因在佳木斯東部地區(qū)突變率較高。

3 討論

3.1 MTHFR C677T是一個(gè)常見(jiàn)的突變位點(diǎn)， Frosst[3]等在1995年首次發(fā)現(xiàn)?？煞譃橐吧?CC)、突變雜合型(CT)和突變純合型(TT) 3種。MTHFR C677T位點(diǎn)發(fā)生突變的基因?yàn)榈?77位上的胸腺嘧啶取代了胞嘧啶，造成了丙氨酸被纈氨酸取代，最為顯著的表現(xiàn)為MTHFR酶活性下降，是他們改變了MTHFR的氨基酸結(jié)構(gòu)，影響了MTHFR酶的活性，這就使得同型半胱氨酸無(wú)法正常完成向蛋氨酸的轉(zhuǎn)化，造成血中同型半胱氨酸的含量明顯升高[4]。

3.2 首次報(bào)道佳木斯東部地區(qū)女性與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者的MTHFR C677T基因分布情況，CC型、CT型、TT型分別為11.9%、46.6%、41.5%，C等位基因和T等位基因分別為35.2%和64.8%，與報(bào)道有顯著性差異，說(shuō)明可能存在地域性差異，說(shuō)明T等位基因在佳木斯東部地區(qū)突變率較高。

3.3 本地區(qū)流產(chǎn)患者CC型、CT型、TT型分別為24.3%、36.8%、38.9%，C等位基因和T等位基因分別為42.7%和57.3%；報(bào)道流產(chǎn)患者CC型、CT型、TT型分別為30.8%、43.4%、25.8%，C等位基因和T等位基因分別為52.5%和47.5%。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，流產(chǎn)患者與報(bào)道流產(chǎn)患者基因型分布及等位基因頻率分布之間的差異有高度顯著性。

3.4 隨著分子生物學(xué)和精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的快速發(fā)展，疾病與一些藥物相關(guān)的基因多態(tài)性之間的相關(guān)性研究越來(lái)越受關(guān)注[5～9]，為臨床疾病的診斷與治療提供了依據(jù)。本文通過(guò)檢測(cè)MTHFR C677T堿基突變，比較了佳木斯地區(qū)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者和健康人之間的差異。結(jié)果顯示，佳木斯地區(qū)健康人與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者3種基因型分布及等位基因分布頻率都具有顯著性，但由于檢驗(yàn)數(shù)據(jù)比較少，有待進(jìn)一步探討本地區(qū)MTHFR C677T與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)之間的關(guān)系。

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佳木斯大學(xué)科學(xué)技術(shù)面上項(xiàng)目，編號(hào)：13Z1201549。

方芳(1979～)女，黑龍江佳木斯人，碩士，主管藥師。

荊洪英(1958～)女，黑龍江佳木斯人，學(xué)士，主任藥師，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail:wjinghongying@126.com。

R714.21

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1008-0104(2017)06-0054-02

2017-03-16)