高效液相—蒸發(fā)光散射法測定藿膽滴丸中豬去氧膽酸含量

郭文婷 王磊

摘 要：本文采用高校液相測定了藿膽滴丸中豬去氧膽酸的含量，固定相為：安捷倫Cl8（4.6mm×250mm，5um），甲醇-乙腈-0.1%冰醋酸溶液（20∶40∶40）為流動(dòng)相，ELSD檢測器漂移管溫度85℃，氣體流速：2.5L·min-1，柱溫：30℃。豬去氧膽酸在20～350微克/毫升范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。豬去氧膽酸的平均回收率為99.1%，RSD為0.98%（n=6）；此方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于藿膽滴丸中豬去氧膽酸的含量測定。

關(guān)鍵詞：藿膽滴丸；豬去氧膽酸；含量

藿膽滴丸為黃白色的滴丸，由豬膽酸、藿香油、聚乙二醇（6000）組成。藿膽滴丸具有清熱化濁，宣通鼻竅的功效，常用于風(fēng)寒化熱，膽火上攻引起的鼻塞欠通，鼻淵頭痛。豬膽粉來源本品為豬科動(dòng)物豬Sus scrofa dommestica Brisson.膽汁的干燥品。豬膽粉具有清熱，潤燥，解毒，止咳平喘的功效，常用于熱病燥渴、痢疾、便秘、喉痹、百日咳、癰瘡腫毒等。本文采用高校液相測定了藿膽滴丸中豬去氧膽酸的含量。

1 儀器與試藥

VWR天平防震墊（北京慧龍環(huán)科環(huán)境儀器有限公司）；JJ-BF 0.001g天平（上海仁沃實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司）；YL9100液相色譜儀（汕頭市科毅儀器設(shè)備有限公司）；蒸發(fā)光散射檢測器（上海通微分析技術(shù)有限公司）；Milli-Q Direct水純化系統(tǒng)（上海力晶科學(xué)儀器有限公司）；DX-208恒溫水浴槽（北京長流科學(xué)儀器有限公司）；美國澤拉布Super超越系列全觸屏超純水系統(tǒng)（上海和泰儀器有限公司）；10升數(shù)控型超聲波清洗器（天津市瑞普電子儀器公司）。豬去氧膽酸對(duì)照品由中國藥品生物制品檢定所提供。乙腈（北京市津同樂泰化工產(chǎn)品有限公司）、甲醇（安徽勝達(dá)化工科技有限公司）、冰醋酸（北京市津同樂泰化工產(chǎn)品有限公司）、乙醇（北京市津同樂泰化工產(chǎn)品有限公司）、磷酸（上海展云化工有限公司）、三乙胺（北京市津同樂泰化工產(chǎn)品有限公司）、正丁醇（昆山諾普森實(shí)驗(yàn)室用品科技有限公司）。

2 含量測定

2.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[1-6]。色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為（4.6mm×250mm，5um）；甲醇-乙腈-0.1%冰醋酸溶液（20∶40∶40）為流動(dòng)相，ELSD檢測器漂移管溫度85℃，氣體流速：2.5L·min-1。理論板數(shù)按豬去氧膽酸峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取藿膽滴丸粗粉，精密稱取，置索氏提取器中，加甲醇80ml，回流1小時(shí)，提取液回收甲醇并濃縮至干，殘?jiān)?0毫升純化水溶解，用二氯甲烷萃取三次，每次30毫升，合并二氯甲烷，水浴蒸干，殘?jiān)眉状既芤喝芙廪D(zhuǎn)移至10毫升容量瓶內(nèi)并分次洗滌容器，洗液濾入同一量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取豬去氧膽酸對(duì)照品約5毫克，用流動(dòng)相溶解并稀釋成每1ml中含200微克的溶液，作為對(duì)照溶液。

2.4 陰性溶液的制備

取藿香油、聚乙二醇（6000），依上述方法測定，結(jié)果在豬去氧膽酸出峰處陰性液無色譜峰，結(jié)果陰性試驗(yàn)沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5 準(zhǔn)曲線的制備

制備濃度為20微克/毫升、50微克/毫升、100微克/毫升、150微克/毫升、200微克/毫升、250微克/毫升、300微克/毫升、350微克/毫升的對(duì)照品溶液，分別精密吸取10μL注入HPLC，記錄色譜圖。以峰面積積分值A(chǔ)（微克）為橫坐標(biāo)，進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。試驗(yàn)表明，豬去氧膽酸對(duì)照品在20～350微克/毫升范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn)

依照2.3項(xiàng)下制備對(duì)照品溶液，精密吸取豬去氧膽酸對(duì)照品溶液10μL重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積積分值，對(duì)照品峰面積積分值的RSD為0.76%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱取同一批的藿膽滴丸樣品6份，按測定方法項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.77%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.8 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收試驗(yàn)，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱定，分精密添加一定量的豬去氧膽酸對(duì)照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測定含量（同時(shí)測定樣品含量），計(jì)算回收率。6次測定的平均回收率為99.1%，RSD為0.98%。

2.9 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定藿膽滴丸三批樣品中豬去氧膽酸的含量見表1。

3 討論

分別考察甲醇-乙腈-0.1%冰醋酸溶液（20∶40∶40），乙腈-0.1%磷酸（50∶50），甲醇-乙腈-水（10∶30∶60），甲醇-水（80：20，含0.1%三乙胺），0.02mol/L磷酸二氫鈉∶甲醇（體積比為15∶85）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以甲醇-乙腈-0.1%冰醋酸溶液（20∶40∶40）為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用甲醇-乙腈-0.1%冰醋酸溶液（20∶40∶40）為流動(dòng)相。此方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于藿膽滴丸中豬去氧膽酸的含量測定。藿膽滴丸中豬去氧膽酸的含量應(yīng)為不少于3.5mg/丸。

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