手足口病患兒血清中NSE和S-100β含量的變化

周土木

(浙江衢化醫(yī)院 兒內(nèi)科，浙江 衢州 324004)

手足口病患兒血清中NSE和S-100β含量的變化

周土木

(浙江衢化醫(yī)院 兒內(nèi)科，浙江 衢州 324004)

目的研究血清神經(jīng)元特異性烯醇化酶(Neutron Specific Enolase, NSE)和S-100β含量對(duì)手足口病患兒病情評(píng)估和臨床診斷的意義。方法154例手足口病患兒分為危重型組(32例)、重型組(67例)、輕癥組(55例)，選取同期健康體檢兒30例作為對(duì)照組；采用RT-PCR方法對(duì)病患兒咽拭子樣本進(jìn)行病原學(xué)鑒定，利用酶聯(lián)免疫測(cè)定法檢測(cè)各組血清NSE和S-100β的水平。結(jié)果送檢154份病例中，EV71檢測(cè)呈陽(yáng)性率為59.1%，COXA-16檢測(cè)呈陽(yáng)性率為24.7%。NSE和S-100β水平檢測(cè)結(jié)果顯示，危重型組高于重型組、輕癥組和對(duì)照組，重型組高于輕癥組和對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；但輕癥組和對(duì)照組的含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；危重型組和重型組患兒血清中S-100β和NSE含量水平呈顯著正相關(guān)。結(jié)論手足口病患兒血清中NSE和S-100β水平變化與病情的輕重相關(guān)，該指標(biāo)的檢測(cè)有助于臨床上對(duì)患兒手足口病病情的早期評(píng)估和判斷預(yù)后。

兒童手足口病；神經(jīng)元特異性烯醇化酶；S-100β；病情評(píng)估

手足口病(Hand-foot-mouth Disease，HFMD)是一種全球性的兒科常見(jiàn)傳染病，主要是由多種腸道病毒感染引起，多發(fā)于5歲以下兒童中，常會(huì)引起急性傳染[1]。該病情發(fā)展迅速，常引起心、肺或腦部并發(fā)癥，例如心肌炎、神經(jīng)源性肺水腫、腦膜炎、腦脊髓炎和腦炎等[2]，致死率較高、嚴(yán)重影響了兒童的健康。

目前，臨床上在患兒發(fā)病早期能夠很好地對(duì)手足口病的病情進(jìn)行預(yù)測(cè)和分型的診斷標(biāo)準(zhǔn)不多，特別是對(duì)于判斷繼發(fā)性腦部并發(fā)癥的指標(biāo)十分有限。血清神經(jīng)元特異性烯醇化酶(Neutron Specific Enolase, NSE)和S-100β是目前醫(yī)學(xué)界公認(rèn)的分別能夠特異性反映中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷程度的生物學(xué)標(biāo)志物[3]，越來(lái)越多研究認(rèn)為是檢測(cè)腦損傷程度和預(yù)后評(píng)估的敏感指標(biāo)。本研究通過(guò)檢測(cè)手足口病不同病情程度患兒血清中NSE和S-100β的含量水平變化，探索NSE和S-100β在手足口病患兒的早期病情程度的判斷和治療上的意義，以期為NSE和S-100β作為指示物的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 對(duì)象及分組 選取我院2012年1月—2016年5月收治的154例手足口病患兒，根據(jù)《手足口病診療指南(2010年版)》的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)過(guò)血清學(xué)和病原學(xué)檢查鑒定，均出現(xiàn)手、口、足和臀部的皰疹，部分兒童還伴有發(fā)熱等癥狀；根據(jù)患兒的病情程度分為危重型組(32例)、重型組(67例)、輕癥組(55例)；并選取30例同期健康體檢兒童作為對(duì)照組，病原學(xué)檢測(cè)EV71和COXA-16均呈陰性?；純褐心?3例、女61例，年齡1.2～6.8歲，平均2.5±0.8歲；對(duì)照組兒童中男18例、女12例，年齡1.4～6.5歲，平均2.5±0.5歲；2組年齡、性別差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患兒家長(zhǎng)知情同意。

1.2 病原學(xué)檢查 用消毒的采樣棉簽，輕柔適度的抹拭患兒兩側(cè)扁桃體和咽后壁部位，取樣過(guò)程中應(yīng)盡量避免棉簽接觸到舌部。獲取咽拭子樣本后，迅速將取樣棉簽轉(zhuǎn)入到采樣管中(含有1 mL的Hanks平衡鹽保存液)，并旋蓋擰緊密封，保持濕潤(rùn)環(huán)境。對(duì)照組的正常兒童用同樣的方法獲取咽拭子樣本。將獲取的保存于Hanks平衡鹽溶液的咽拭子樣本在12 h內(nèi)在冰浴的低溫條件下，通過(guò)冷藏運(yùn)輸途徑及時(shí)送予衢州市疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行腸道病毒CoxA16和EV71的特異性核酸定性檢測(cè)。

1.3 樣本采集 本研究中所選擇的患兒病例均是患兒發(fā)病的3天內(nèi)住院治療，在患兒入院的24小時(shí)內(nèi)分別抽取靜脈血3 mL，對(duì)照組的正常兒童在相同的時(shí)間抽取等量的靜脈血作為對(duì)照。所有靜脈血樣本均需要經(jīng)過(guò)離心(3000 rpm, 20 min)處理，然后取上層血清置于-70℃保存，并同時(shí)取1mL行常規(guī)血白細(xì)胞和血糖、血肌酐的生化學(xué)項(xiàng)目檢測(cè)。

1.4 NSE和S-100β水平的檢測(cè) 從-70℃確認(rèn)溫度冰箱中取出各患兒血清樣本，采用酶聯(lián)免疫測(cè)定法(ELISA)檢測(cè)NSE和S-100β的水平，測(cè)定方法嚴(yán)格按照NSE ELISA試劑盒(R&D Systems, USA)和S-100β ELISA試劑盒(R&D Systems, USA)說(shuō)明書的方法操作，并記錄好各樣本的指標(biāo)數(shù)據(jù)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 利用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料2組間采用t檢驗(yàn)，多組間采用單因素方差分析LSD檢驗(yàn)方法，數(shù)據(jù)均符合正態(tài)分布；計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用Pearson直線相關(guān)性分析方法。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 基本臨床資料 各組患兒和對(duì)照組在年齡、性別構(gòu)成、血肌酐含量和血白細(xì)胞計(jì)數(shù)方面，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；但危重組患兒的血清中血糖含量顯著高于重型組、輕癥組和對(duì)照組(P<0.05)，而重型組、輕癥組和對(duì)照組之間血糖含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 病原學(xué)檢測(cè) 送檢154份咽拭子樣本，經(jīng)RT-PCR鑒定，結(jié)果顯示EV71陽(yáng)性患兒91例，占比59.1%，COXA-16陽(yáng)性患兒38例，占比24.7%，EV71和COXA-16均呈陽(yáng)性的患兒共8例，占比5.2%，兩者均呈陰性的患兒共17例，占比11.0%。在危重型患兒中，EV71陽(yáng)性和COXA-16陽(yáng)性病例分別占66%和18%；而在重型患兒中，EV71陽(yáng)性和COXA-16陽(yáng)性病例分別占70%和9%。輕癥組患兒中，引起手足口病的病原主要為EV71(42%)和COXA-16(47%)，對(duì)照組健康兒童均未檢測(cè)出EV71和COXA-16。

表1 各組患兒和對(duì)照組的基本臨床資料比較

2.3 血清中NSE和S-100β水平 危重型患兒血清中NSE和S-100β水平均高于重型組、輕癥組和對(duì)照組，重型組患兒血清中NSE和S-100β水平也高于輕癥組和對(duì)照組；差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而輕癥組和對(duì)照組患兒的NSE和S-100β水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

2.4 血清中NSE和S-100β水平相關(guān)分析 對(duì)手足口病不同病情程度的患兒血清中NSE與S-100β含量水平進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，手足口病病情危重型組和重型組患兒血清中S-100β與NSE的含量水平呈顯著正相關(guān)(r=0.641、0.512，均P<0.05)。但是在手足口病病情輕癥組和對(duì)照組健康患兒的血清中S-100β與NSE的含量水平并未顯示出明顯的相關(guān)性(P>0.05)。見(jiàn)圖1。

NSES?100β危重型組(n=32)2463±282?#213±038?#重型組(n=67)1837±246?165±029?輕癥組(n=55)1065±171083±015對(duì)照組(n=30)959±113079±011F94005119334P00000000

注：*分別與輕癥組、對(duì)照組比較，P<0.05；#與重型組比較，P<0.05。

圖1 手足口病患兒血清中NSE與S-100Β含量水平Pearson相關(guān)性分析

2.5 轉(zhuǎn)歸分析 手足口病輕癥組中有21例患兒的血清中S-100β含量水平高于1.2 ng/mL，定義為高水平組，有34例患兒血清中S-100β含量水平低于1.2 ng/mL，定義為低水平組[4]。預(yù)后轉(zhuǎn)歸結(jié)果顯示，高水平組有10例患兒轉(zhuǎn)化為手足口病重癥或危重癥病情(47.6%)，低水平組患兒有8例(23.5%)轉(zhuǎn)化為重癥或危重癥病情；S-100β高水平組患兒轉(zhuǎn)化為重癥或危重癥的發(fā)生率高于低水平組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.637，P<0.05)。

3 討論

手足口病是由多種腸道病毒感染所引起，其中尤以屬于小RNA病毒科的腸道病毒71型(EV71)和柯薩奇病毒A組16型(COXA16)的致病性最高，對(duì)兒童的危害性也極其嚴(yán)重[5]。EV71病毒可以直接感染患兒的髓質(zhì)和脊髓，引發(fā)不同程度的中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變的癥狀，繼而導(dǎo)致腦脊髓膜炎、神經(jīng)源性肺水腫等與神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病的發(fā)生，EV71病毒感染的情況多發(fā)生在手足口病重癥或危重癥病例中。本研究中，危重癥組和重癥組患兒血清中檢測(cè)出EV71呈陽(yáng)性的比例分別達(dá)到了66%和70%，顯著高于輕癥組中EV71陽(yáng)性率(42%)，這一結(jié)果與之前研究者的報(bào)道一致[6]。HFMD具有傳播途徑多且復(fù)雜和傳染性強(qiáng)等特點(diǎn)，尤其是對(duì)于重癥HFMD患兒，其致死率和致殘率一致高居不下。因此，尋找合適的生物標(biāo)志物，在早期診斷中就能夠發(fā)現(xiàn)重癥患兒以及評(píng)估患兒腦神經(jīng)損傷程度，及早進(jìn)行針對(duì)性的治療是目前HFMD的臨床治療亟需解決的問(wèn)題。

血清神經(jīng)元特異性烯醇化酶(Neutron Specific Enolase, NSE)和S-100β是目前醫(yī)學(xué)界公認(rèn)的能夠特異性反映患者腦損傷程度的生物學(xué)標(biāo)志物[3]。NSE主要存在于神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞中，正常情況下，血清中的NSE的含量水平很低，但當(dāng)神經(jīng)組織遭到破壞后，腦部的包膜和血-腦脊液屏障受損而通透性升高，NSE隨之大量滲透到血液中，導(dǎo)致血液中NSE水平升高[7]。因此，NSE常被認(rèn)為是檢測(cè)腦損傷程度和預(yù)后評(píng)估的敏感指標(biāo)[8]。李俊等[9]研究發(fā)現(xiàn)重型顱腦損傷患者血清NSE的水平顯著升高；張永英[10]發(fā)現(xiàn)病毒性腦炎患兒的血清中NSE含量水平顯著高于健康兒。本研究中，手足口病重型組或危重型組患兒的血清中NSE含量均維持在較高水平，且隨著病情的加重，其含量水平也隨之而升高，相較于輕癥組和對(duì)照組差異顯著。這說(shuō)明患兒血清中NSE的含量水平對(duì)于患兒病情程度具有良好的指示性。

S-100β蛋白存在于星形膠質(zhì)細(xì)胞和雪旺細(xì)胞中，當(dāng)顱腦受到外力打擊而受損后，中樞神經(jīng)系統(tǒng)的組織遭到破壞，進(jìn)而神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中的S-100β蛋白會(huì)因此而滲入到腦脊液，然后通過(guò)已受到損傷的血-腦屏障進(jìn)入到外周血中，引起血清中S-100β含量的升高。因此，通常將S-100β作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)星形膠質(zhì)細(xì)胞完整性的特異標(biāo)志物[11]。史艷平等[12]對(duì)189例危重癥或重癥HFMD患兒的腦脊液和血清中S-100β含量水平檢測(cè)分析發(fā)現(xiàn)，HFMD病情越嚴(yán)重，患兒血清中S-100β含量水平越高。本研究中，HFMD重型組或危重型組患兒的血清中S-100β含量均維持在較高水平，且隨著病情的加重，其含量水平也隨之而升高，相較于輕癥組和對(duì)照組差異顯著。同時(shí)，我們也注意到輕癥組中S-100β含量水平較高的患兒病情轉(zhuǎn)為危重型或重型的概率要高于S-100β含量水平較低的患兒，這提示在臨床治療過(guò)程中，對(duì)于重癥患兒要盡早發(fā)現(xiàn)、及時(shí)治療，同時(shí)要關(guān)注輕癥患兒血清中S-100β含量水平的變化，警惕患兒病情的進(jìn)一步惡化。

Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，HFMD病情危重型組和重型組患兒血清中S-100β與NSE的含量水平呈顯著正相關(guān)，但在輕癥組和對(duì)照組并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)兩者之間存在顯著相關(guān)性。NSE和S-100β作為腦損傷的生物學(xué)指示物，在對(duì)HFMD患兒早期的病情診斷和預(yù)后評(píng)估中能夠提供有價(jià)值的客觀依據(jù)，特別是反映危重型和重型患兒的腦損傷程度，對(duì)于臨床上HFMD危重型和重型患兒的發(fā)現(xiàn)和及時(shí)治療具有重要的指導(dǎo)作用。

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PatternofvariationinthelevelsofserumNSEandS-100βinchildrenwithhand-foot-mouthdisease

ZHOU Tu-mu

(DepartmentofPediatrics,ZhejiangQuhuaHospital,ZhejiangQuzhou324004,China)

ObjectiveTo evaluate the implications of the recognition of the pattern of variation in the levels of serum neuron specific enolase (NSE) and S-100β for the assessment and diagnosis of hand, foot and mouth disease (HFMD) in children.Methods154 cases of children with HFMD were firstly divided into three experimental groups, namely, critical type group (n=32), severe group (n=67) and mild disorder group (n=55) according to the clinical symptoms and signs; 30 healthy children were chosen as the control group. Secondly, RT-PCR method was used to identify the virus type of throat swab samples of children with HFMD and the levels of NSE and S-100β were detected by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA).FindingsOf the 154 cases, 59.1% were found positive cases in EV71 test and 24.7% were found positive cases in COXA-16 detection. The results showed that the levels of NSE and S-100β of the critical type group were higher than those in the severe group, the mild disorder group and the control group, and those of the severe group were higher than those in the mild group and the control group. The differences were statistically significant (P<0.05). However, the levels of the mild group and the control group were not significantly different (P>0.05). There was a significant positive correlation between serum S-100β and NSE levels in patients from the critical type group and the severe group.ConclusionThe changes of serum NSE and S-100β levels in children with HFMD are correlated to the severity of the disease. And the detection of these indices can well inform the early assessment and prognosis of the disease.

hand-foot-mouth disease (HFMD); neutron specific enolase (NSE); S-100β; disease assessment

2017-02-17

周土木(1966 - )，男，浙江衢化人，本科，主治醫(yī)師。

10.3969/j.issn.1674-6449.2017.06.015

R725.1

A

1674-6449(2017)06-0647-04