膠體金免疫層析技術(shù)在食品檢測(cè)中的運(yùn)用

摘 要：膠體金，主要是由氯金酸在還原劑如檸檬酸三鈉、抗壞血酸、檸檬酸鈉、鞣酸等來(lái)共同組成的的一定大小的金顆粒，在靜電的作用下可以形成穩(wěn)定的膠體狀態(tài)。在膠體金當(dāng)中，可以用肉眼進(jìn)行可見(jiàn)紅色的觀察，因此在抗原與抗體結(jié)合部位的金顆粒達(dá)到一定數(shù)量時(shí)，便可觀察到紅色條帶，通過(guò)紅色條帶即可判斷檢測(cè)結(jié)果。在本文當(dāng)中，首先對(duì)免疫層析的類(lèi)型進(jìn)行分類(lèi)；其次對(duì)膠體金免疫層析技術(shù)進(jìn)行了分析；最后講述了膠體金免疫層析技術(shù)在食品檢測(cè)中的應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：膠體金免疫層析；食品檢測(cè)；應(yīng)用

中圖分類(lèi)號(hào)：TS207.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1004-7344（2018）14-0323-02

在現(xiàn)階段當(dāng)中，食品安全問(wèn)題已經(jīng)成為了人們關(guān)注的主要問(wèn)題之一，對(duì)于人類(lèi)的健康會(huì)產(chǎn)生相當(dāng)大的影響，在不法分子的利益驅(qū)使下，在食品當(dāng)中添加了很多的違禁藥物。因此需要對(duì)食品當(dāng)中的所存在的違禁物品進(jìn)行檢測(cè)，在對(duì)食品檢測(cè)的過(guò)程當(dāng)中，需要對(duì)感官、理化、細(xì)菌以及毒劑等多種指標(biāo)進(jìn)行充分的檢測(cè)，從而來(lái)對(duì)食品進(jìn)行定性和半定性的測(cè)量。因此在這個(gè)過(guò)程當(dāng)中，就需要利用膠體金免疫層次技術(shù)來(lái)進(jìn)行免疫學(xué)的檢測(cè)，在操作方面比較簡(jiǎn)單，靈敏度也相對(duì)較高，并且在成本方面也是相對(duì)廉價(jià)的，因此被廣泛應(yīng)用在食品快速檢測(cè)的過(guò)程當(dāng)中。

1 免疫層析類(lèi)型

在免疫層析當(dāng)中需要對(duì)抗原與抗體結(jié)合的方式進(jìn)行分析，其中主要可以分為兩種類(lèi)型，分別為非競(jìng)爭(zhēng)性免疫層析和競(jìng)爭(zhēng)性的免疫層析技術(shù)。

在非競(jìng)爭(zhēng)性的免疫層析方面，也可以被稱(chēng)之為雙抗體夾心法。在實(shí)踐的過(guò)程當(dāng)中，主要對(duì)著色的標(biāo)記物體和待測(cè)抗原本身的特異性抗體做出相連接，從而對(duì)其在結(jié)合區(qū)域當(dāng)中的沉積物進(jìn)行分析。對(duì)于樣品所含有的物質(zhì)，在毛細(xì)管的作用下，會(huì)迅速的滲透到結(jié)合區(qū)域當(dāng)中，在標(biāo)記物體當(dāng)中形成的溶劑現(xiàn)象由于沒(méi)有收到材料本身的吸水漲力的牽引作用沒(méi)有顯示。樣品的溶液會(huì)隨著膜條向前逐漸的移動(dòng)。如果樣品當(dāng)中存在著待測(cè)抗原的話，在和標(biāo)記物結(jié)合的情況下，會(huì)進(jìn)行抗體的捕捉，最終形成結(jié)合物體。利用此種方式進(jìn)行檢測(cè)，一般都會(huì)用于多個(gè)抗原位點(diǎn)的檢測(cè)，也就是致病細(xì)菌以及大分子蛋白質(zhì)等方面的檢測(cè)。

在競(jìng)爭(zhēng)性的免疫層析方面，主要是對(duì)著色標(biāo)物體與待測(cè)抗原的特異性抗體作出連接，從而使其在結(jié)合區(qū)域內(nèi)沉積。在樣品當(dāng)中如果含有待測(cè)抗原的話，對(duì)于樣品本身當(dāng)中的抗原和標(biāo)記物就會(huì)形成復(fù)合物的現(xiàn)象。在利用固相化檢測(cè)的過(guò)程當(dāng)中，需要對(duì)其進(jìn)行待測(cè)抗原或者其他類(lèi)似物體的檢測(cè)。在這個(gè)過(guò)程當(dāng)中，會(huì)存在其他物質(zhì)的競(jìng)爭(zhēng)，不再發(fā)生反應(yīng)，在檢測(cè)線的位置處不會(huì)顯示顏色差異。在對(duì)樣品前移的過(guò)程當(dāng)中，會(huì)產(chǎn)生結(jié)合的現(xiàn)象，最終形成復(fù)合物使得質(zhì)控線顯色。此檢測(cè)方法，主要可以用來(lái)檢測(cè)單一抗原表位的小分子抗原，一般可用來(lái)對(duì)農(nóng)藥殘留以及違禁藥品的檢測(cè)。

2 膠體金免疫層析技術(shù)

膠體金免疫層析檢測(cè)技術(shù)，主要是氯金酸（chloroauricacid）的水溶液，氯金酸在還原劑如白磷、檸檬酸三鈉等，在聚合作用下所形成的特定大小的金顆粒。在靜電作用下可以形成一種穩(wěn)定的膠體溶液。在膠體金顆粒當(dāng)中的高電子密度是相對(duì)較大的，在顆粒聚集達(dá)到一定濃度的時(shí)候，就可以進(jìn)行粉紅色斑點(diǎn)的顯示，因此在此種特性下可以利用其作為免疫層析的檢測(cè)試驗(yàn)。

在膠體金進(jìn)行制作的過(guò)程中，需要利用還原法劑來(lái)對(duì)氯金酸進(jìn)行還原制備，其中現(xiàn)階段經(jīng)常用到的還原劑有：白磷、乙醇、過(guò)氧化氫、硼氫化鈉、抗壞血酸、檸檬酸三鈉、鞣酸等，一般來(lái)說(shuō)都會(huì)用到檸檬酸三鈉還原法來(lái)進(jìn)行還原。通過(guò)此種方式下制備出的膠體金顆粒的直徑相對(duì)較大。膠體金進(jìn)行蛋白制備，主要是對(duì)蛋白質(zhì)等多種大分子物質(zhì)在進(jìn)行電解過(guò)程，從吸附到包裹的過(guò)程[1]。其中需要保持在較小濃度的蛋白離子，在標(biāo)記之前需要利用雙蒸水透析以除去多余的離子。對(duì)于制備好的膠體金-蛋白質(zhì)復(fù)合物需要做出進(jìn)一步的純化，從而可以實(shí)現(xiàn)對(duì)集合物體當(dāng)中的蛋白或者膠體金顆粒進(jìn)行去除，在去除的過(guò)程當(dāng)中一般會(huì)采用超速離心法和凝膠過(guò)濾法。

3 膠體金免疫層析技術(shù)在食品檢測(cè)中的應(yīng)用

膠體金免疫層析技術(shù)在實(shí)際的應(yīng)用當(dāng)中，是相當(dāng)廣泛的，在食品檢測(cè)領(lǐng)域當(dāng)中屬于近些年才發(fā)展起來(lái)的技術(shù)。在本文當(dāng)中，主要可以分為以下幾個(gè)方面來(lái)進(jìn)行分析：

（1）在食品控制領(lǐng)域當(dāng)中，食品中的致病菌含量一旦超標(biāo)，就很可能導(dǎo)致食用者生病。目前，食源性致病菌的檢測(cè)仍是按照細(xì)菌分離、培養(yǎng)及生化鑒定的方法進(jìn)行檢測(cè)。這種方法耗時(shí)長(zhǎng)、操作繁瑣、環(huán)境和主觀因素影響較大，從而給食品檢測(cè)帶來(lái)較多不便。而使用膠體金免疫層析技術(shù)，則能夠解決該方面檢測(cè)的操作復(fù)雜、靈敏度低和特異性低的問(wèn)題。例如，在大腸桿菌檢測(cè)方面，進(jìn)行膠體金結(jié)合墊的制備只需要進(jìn)行2次離心就可以消除標(biāo)記過(guò)程中多余抗體。相較于其他方法，膠體金免疫層析技術(shù)明顯能夠提高結(jié)合墊的性能和檢驗(yàn)靈敏度。

（2）在食品安全檢測(cè)的領(lǐng)域當(dāng)中，一些不法的商人為了行業(yè)競(jìng)爭(zhēng)會(huì)采取不正當(dāng)?shù)氖侄?，在食品?dāng)中進(jìn)行違禁物品的添加，給食品安全問(wèn)題帶來(lái)了相當(dāng)大的隱患和威脅。利用膠體金免疫層析技術(shù)來(lái)進(jìn)行檢測(cè)，可以操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)時(shí)間短、便于現(xiàn)場(chǎng)操作，可以為現(xiàn)場(chǎng)執(zhí)法帶來(lái)科學(xué)依據(jù)。在對(duì)有害微生物的檢測(cè)過(guò)程當(dāng)中，一般都會(huì)對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門(mén)氏菌、布氏桿菌、霍亂弧菌等各種細(xì)菌來(lái)做出檢測(cè)和分析，其中膠體金標(biāo)記的EHECO157單抗作為一抗包被于結(jié)合墊，EHECO157抗血清作為二抗固相化于硝酸纖維素膜的檢測(cè)帶上，在質(zhì)控帶上會(huì)形成固相化的免疫球蛋白。在利用此種方式及逆行檢測(cè)時(shí)間大約是在15min的左右，對(duì)于大腸桿菌O157的最低檢出濃度為0.1cfu/mL[2]。

（3）在使用膠體金對(duì)食品當(dāng)中的農(nóng)藥、獸藥等藥物殘留物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)的過(guò)程當(dāng)中，由于農(nóng)藥、獸藥等藥物殘留物質(zhì)一般都為小分子的物質(zhì)，屬于半抗原，在進(jìn)行制備抗體的過(guò)程當(dāng)中需要將其和大分子蛋白進(jìn)行連接，從而制備人工抗原。其中的磺胺甲噁唑（sulfamethoxazole，sinomin，SMZ，又名新諾明）作為獸醫(yī)臨床上常用的磺胺類(lèi)藥物，可以對(duì)動(dòng)物的全身感染進(jìn)行良好的應(yīng)用，在對(duì)動(dòng)物性的食品檢測(cè)當(dāng)中可以進(jìn)行超細(xì)菌耐藥性的提升，在長(zhǎng)期使用的情況下可以使得該藥物殘留食品的消費(fèi)者患皮炎、白細(xì)胞減少、溶血性貧血等疾病。采用SMZ-HSA（磺胺甲噁唑-人血清白蛋白）免疫新西蘭白兔制得抗體，并用膠體金進(jìn)行標(biāo)記，將其包被于結(jié)合墊上。將SMZOVA（磺胺甲噁唑-卵清白蛋白）固相化在檢測(cè)帶上，試紙條無(wú)質(zhì)控帶。樣品中的SMZ與SMZ-OVA競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體，由于試紙條只有檢測(cè)帶，所以每次檢測(cè)必須設(shè)陰性對(duì)照試紙條，檢測(cè)時(shí)陰性呈現(xiàn)出紅色條帶，而陽(yáng)性無(wú)紅色條帶。該方法對(duì)SMZ標(biāo)準(zhǔn)溶液的靈敏度達(dá)到50ng/mL，整個(gè)檢測(cè)反應(yīng)在5～10min內(nèi)完成。在對(duì)食品當(dāng)中的違禁藥物做出檢測(cè)的過(guò)程當(dāng)中，一般都會(huì)對(duì)食物當(dāng)中所含有的類(lèi)似于農(nóng)藥殘留物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，其中可以利用競(jìng)爭(zhēng)免疫層析的方式進(jìn)行檢測(cè)，最小檢測(cè)質(zhì)量為45μg/mL。

（4）在非食品添加成分檢測(cè)方面，膠體金免疫層析技術(shù)也得到運(yùn)用。例如，在三聚氰胺這種化工物質(zhì)的檢測(cè)上，使用膠體免疫層析技術(shù)可以對(duì)乳制品中的三聚氰胺進(jìn)行定性和定量檢測(cè)，試紙條具有較好的穩(wěn)定性、重復(fù)性和靈敏度。在蘇丹紅I的檢測(cè)上可以使用利用膠體金免疫層析技術(shù)制作成的蘇丹紅I測(cè)試紙條，然后使用金標(biāo)抗原方法將抗體固定在NC膜上就可以對(duì)食品中的蘇丹紅I進(jìn)行定量檢測(cè)[3]。

（5）食品中如果含有霉菌毒素等物質(zhì)，易導(dǎo)致人體和動(dòng)物產(chǎn)生病理變化，繼而給人類(lèi)健康帶來(lái)嚴(yán)重危害。使用膠體金免疫層析技術(shù)，能夠有效鑒定黃曲霉毒素、赭曲霉毒素和葡萄球菌腸毒素等多種霉菌毒素。例如，在檢測(cè)黃曲霉毒素B1時(shí)，使用膠體金免疫層析試紙法進(jìn)行檢測(cè)，可以與高效液相色譜法達(dá)到90.5%的相符率。同時(shí)，使用該方法能夠?qū)崿F(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)[4]，并且可以用于糧食中的黃曲霉毒素B1的初篩。此外，使用該技術(shù)還能鑒定巧克力奶、嬰兒奶粉和鮮牛奶等物質(zhì)中的葡萄球菌腸毒素，毒素最低檢出限為10mg/L。

4 結(jié) 語(yǔ)

綜上所述，隨著現(xiàn)在科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，膠體金免疫層析技術(shù)已經(jīng)在食品檢測(cè)領(lǐng)域當(dāng)中有相當(dāng)廣泛的應(yīng)用，在檢測(cè)方面的效果相對(duì)較好，并且操作簡(jiǎn)單快速，因此在很大程度上提高了其食品檢測(cè)應(yīng)用頻率。在實(shí)際的應(yīng)用過(guò)程當(dāng)中，需要實(shí)現(xiàn)對(duì)最大限度的提升食品檢測(cè)的敏感程度和特異性，增強(qiáng)其食品檢測(cè)的快捷程度，最終為食品檢測(cè)工作提供出更加便利的條件。

參考文獻(xiàn)

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收稿日期：2018-4-14