知母須根化學(xué)成分研究

黃 琪，肖曦晨，金傳山，吳德玲

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230012； 2.現(xiàn)代中藥安徽省重點實驗室，安徽 合肥 230012)

知母為百合科植物知母(AnemarrhenaasphodeloideBunge.)的干燥根莖[1]，是臨床常見的清熱藥。知母須根較為發(fā)達(dá)，其須根量是根莖采收量的30%左右。然而在知母產(chǎn)地加工時其須根作為非藥用部位常被棄去不用。大量須根丟棄造成了資源浪費。

1 儀器與試劑

Bruker DRX-500和Bruker Avance Ⅲ-600型超導(dǎo)核磁共振儀：德國布魯克科技有限公司，四甲基硅烷(TMS)為內(nèi)標(biāo)；EYELA SB-1100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：東京理化器械株式會社；薄層色譜用硅膠G和GF254：青島海洋化工廠；Sephadex LH-20凝膠：瑞典安瑪西亞生物科技公司；化學(xué)試劑均為分析純。

知母須根于2015年11月采集于安徽省亳州市十九里鎮(zhèn)，由安徽中醫(yī)藥大學(xué)劉守金教授鑒定為百合科植物知母(AnemarrhenaasphodeloideBunge.)的須根。藥材標(biāo)本保存于安徽中醫(yī)藥大學(xué)天然藥物化學(xué)研究室。

2 提取分離

知母須根6 kg，用70%乙醇滲漉提取，提取液減壓濃縮得浸膏1.56 kg。浸膏用水混懸，用等容積乙酸乙酯萃取5次，回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯部位(400 g)。采用硅膠柱層析對乙酸乙酯部位進(jìn)行分離，以二氯甲烷-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫，洗脫液經(jīng)薄層檢識，合并相似流分，得到15個洗脫部位。對洗脫部位3～10共8個部位采用硅膠柱色譜并結(jié)合Sephadex LH-20及中壓制備色譜技術(shù)對其進(jìn)行分離，共得到化合物1～15。

3 結(jié)果

(1)化合物1 白色粉末，易溶于吡啶、甲醇。Molish和Libermann-Burchard反應(yīng)呈陽性，與胡蘿卜苷對照品共薄層，在3種溶劑系統(tǒng)下展開行為一致，且混合熔點不下降，鑒定化合物1為胡蘿卜苷。

(2)化合物2 白色粉末，易溶于甲醇。與菝葜皂苷元對照品共薄層，在3種溶劑系統(tǒng)下展開行為一致，且混合熔點不下降，鑒定化合物2為菝葜皂苷元。

當(dāng)孔隙氣壓力與孔隙水壓力大小相同時，式(3)為飽和抗剪強(qiáng)度公式。式(3)與邵龍?zhí)兜萚16]的非飽和土的土骨架應(yīng)力方程及黃強(qiáng)等[17]基于混合物理論和熱力學(xué)原理推導(dǎo)出的非飽和土有效應(yīng)力方程一致。

(3)化合物3 淡黃色粉末狀，易溶于甲醇。1H-NMR(600 MHz, DMSO-d6) δ:13.75 (1H, s,1-OH),10.6(1H,s,3-OH),10.5(1H,s,6-OH),9.81(1H,s,7-OH),7.38(1H,s,H-8),6.86(1H,s,H-5),6.37(1H,s,H-4),4.59(1H,d,J=9.8 Hz,H-1′),3.13～4.04(5H,br,H-2′,H-3′,H-4′,H-5′,H-6′)。13C-NMR (150 MHz,DMSO-d6)δ:179.1(s,C-9),163.8(s,C-3),161.8(s,C-1),156.2(s,C-4a), 154.1(s, C-6),150.8(s,C-4b),143.7(s,C-7),111.7(s,C-8a),108.1(d,C-8),107.6(s,C-2),102.6(d,C-5),101.3(s,C-8b),93.3(d,C-4),81.6(d,C-1′),79.0(d,C-5′),73.1(d,C-2′),70.6(d,C-3′),70.2(d,C-4′),61.5(t,C-6′)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3]報道基本一致，故鑒定化合物3為芒果苷。

(4)化合物4 白色粉末。1H-NMR (500 MHz, CD3OD)δ:7.01(2H,d,J=8.4 Hz,H-2′,6′),6.86(1H,d,J=8.4 Hz,H-5),6.72(2H,d,J=8.4 Hz,H-3′, 5′),6.39(1H,dd,J=8.4,2.6 Hz,H-6),6.30(1H,d,J=2.6 Hz,H-8),4.09(1H,ddd,J=10.5,3.0,1.6 Hz,H-2a),3.73(1H,dd,J=10.5,8.2 Hz,H-2b),3.70(3H,s,4′-OCH3),2.68(1H,ddt,J=15.9,5.2,1.1 Hz,H-4a),2.57(1H,dd,J=13.6,7.6 Hz,H-9a),2.51(1H,dd,J=13.6,7.5 Hz,H-9b),2.39(1H,dd,J=15.9,8.6 Hz,H-4b),2.15(1H,m,H-3)。13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:160.4(s,C-4′),156.8(s,C-8a),156.6(s,C-7),131.7(s,C-1′),131.3(d, C-5),131.0(d,C-2′,6′),116.1(d,C-3′,5′),114.9(s,C-4a),107.9(d,C-6),102.2(d,C-8),71.0(t,C-2)，55.6(q,4′-OCH3),38.0(t,C-9),35.9(d,C-3),31.3(t,C-4)。上述核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報道基本一致，故鑒定該化合物為7-hydroxy-3-(4-methoxybenzyl)-chroman。

(5)化合物5 白色粉末。1H-NMR(500 MHz,CDCl3),δ:7.17(2H,d,J=8.1 Hz,H-2,6),6.84(1H,d,J=2.2 Hz,H-2′),6.79(2H,d,J=8.1 Hz,H-3,5),6.79(1H,d,J=8.4 Hz,H-5′),6.71(1H,dd,J=8.4,2.2 Hz,H-6′),6.51(1H,d,J=11.5 Hz,H-7),6.00(1H,ddd,J=17.2,10.2, 6.0 Hz,H-8′),5.68(1H,dd,J=11.5,10.0 Hz,H-8),5.58(1H,br s,4-OH),5.16(1H,dt,J=17.2,1.6 Hz,H-9a),5.14(1H,dt,J=10.2,1.6 Hz,H-9b),4.99(1H,s,3′-OH),4.46(1H,dd,J=10.1,6.1 Hz,H-7′), 3.87(3H,s,4′-OCH3)。13C-NMR(125 MHz,CDCl3),δ:154.5(s,C-4),145.6(s,C-4′),145.1(s,C-3′), 140.6(d,C-8′),136.7(s,C-1′),131.6(d,C-8),130.0(d,C-2,6),129.8(s,C-1),128.6(d,C-7),119.0(d,C-6′),115.11(d,C-3,5),115.06(t,C-9′),114.0(d,C-2′),110.7(d,C-5′),56.0(q,4′-OCH3),47.0(d, C-7′)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報道基本一致，故鑒定該化合物為3′-hydroxy-4′-methoxy-4-dehydroxynyasol。

(6)化合物6 白色粉末。1H-NMR(500 MHz,CDCl3),δ:12.11(1H,s,5-OH),7.10(2H,d,J=7.8 Hz,H-2′,6′),6.79(2H,d,J=7.8 Hz,H-3′,5′),6.06(1H,d,J=2.3 Hz,H-6),5.97(1H,d,J=2.3 Hz,H-8),4.84(1H,br s,7-OH),4.28(1H,dd,J=11.4,4.1 Hz,H-2a),4.11(1H,dd,J=11.4,6.9 Hz,H-2b), 3.81(3H,s,4′-OCH3),3.17(1H,dd,J=13.9,4.4 Hz,H-9a),2.80(1H,ddt,J=10.5,6.9,4.3 Hz,H-3),2.70 (1H,dd,J=13.9,10.5 Hz,H-9b)。13C-NMR(125 MHz,CDCl3)δ:198.1(s,C-4),168.0(s,C-7),164.6(s, C-5),163.0(s,C-8a),154.5(s,C-4′),130.5(d,C-2,6′),130.1(s,C-1′),115.7(d,C-3′,5′),102.7(s,C-4a),95.1(d,C-6),94.0(d,C-8),69.1(t,C-2),55.8(q,4′-OCH3),47.0(d,C-3),32.1(t,C-9)。上述核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報道基本一致，故鑒定該化合物為5,7-dihydroxy-3-(4-methoxybenzyl)-chroman-4-one。

(7)化合物7 黃色針狀結(jié)晶。1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:12.67(1H,s,2-OH),7.62(2H,d,J=8.6 Hz,H-2′,6′),7.55(1H,d,J=8.9 Hz,H-6),6.93(2H,d,J=8.6 Hz,H-3′,5′),6.52(1H,d,J=2.5 Hz,H-3),6.42(1H,dd,J=8.9,2.5 Hz,H-5),3.87(3H,s,4-OCH3)。13C-NMR(125 MHz,CDCl3),δ:114.6 (s,C-1),164.6(s,C-2),101.3(d,C-3),162.9(s,C-4),106.5(d,C-5),133.9(d,C-6),128.7(s,C-1′),131.8(d,C-2′,C-6′),115.1(d,C-3′,5′),161.4(s,C-4′),196.9(s,C-7),55.62(q,4-OCH3)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報道基本一致，故鑒定該化合物為2,4′-dihydroxy-4-methoxybenzophenone。

(8)化合物8 黃色針晶，易溶于甲醇。1H-NMR(600 MHz,CD3OD)δ:7.84(2H,d,J=8.8 Hz,H-2,6),7.05(2H,d,J=8.5 Hz,H-2′,6′),6.81(2H,d,J=8.8 Hz,H-3,5),6.69(2H,d,J=8.5 Hz,H-3′,5′),6.01(1H,ddd,J=17.2,10.2,7.2 Hz,H-8′),4.97(1H,dd,J=10.2,1.4 Hz,H-9′a),4.95 (1H,dt,J=17.2,1.4 Hz,H-9′b),3.92(1H,q,J=7.2 Hz,H-7′),3.30(1H,dd,J=15.9,7.4 Hz,H-8a),3.27(1H,dd,J=15.9,7.4 Hz,H-8b)。13C-NMR(150 MHz,CD3OD)δ:200.2(s,C-7),164.0(s, C-4′),157.1(s,C-4),143.1(d,C-2′,6′),135.4(s,C-1′),132.1(d,C-3′,5′),130.5(s,C-1),129.9(d, C-2,6),116.4(d,C-3,5),114.4(t,C-8),46.3(d,C-8′),44.9(t,C-9′)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報道基本一致，故鑒定該化合物為1,3-bis(4-hydroxyphenyl)pent-4-en-1-one。

(9)化合物9 黃色針晶，易溶于甲醇。分子式為C22H26O8,1H-NMR(600 MHz,CD3OD),δ:6.66(4H,s,H-2′,6′,2″,6″),4.72(2H,d,J=4.1 Hz,H-2,6),4.27(2H,dd,J=9.0,6.9 Hz,H-4a,8a),3.88(2H,dd,J=9.0,3.4 Hz,H-4b,8b),3.85(12H,s,3′,5′,3″,5″-OCH3),3.15(2H,dt,J=6.9,3.7 Hz,H-1,5′)。13C-NMR(150 MHz,CD3OD),δ:55.7(d,C-1,C-5)，87.8(d,C-2，C-6)，72.9(t,C-4，C-8),133.3(s,C-1′,C-1″),104.6(d,C-2′,6′,2″,6″),149.5(s,C-3′,5′,3″,5″)，136.3(s,C-4′,4″),56.9(q,-OCH3)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報道基本一致，故鑒定該化合物為(+)-syringaresinol。

(10)化合物10 白色固體。1H-NMR(600 MHz, CD3OD),δ:1.87(1H,m,H-1a),0.82(1H,td,J=13.3,4.2 Hz,H-1b),1.94(1H,br,H-2a),1.40(1H,br,H-2b),2.12(1H,dt,J=13.3,3.3 Hz,H-3a),1.05(1H, m,H-3b),1.63(1H,m,H-7b),1.49(1H,m,H-9),1.01(1H,m,H-11a),1.61(1H,m,H-12a),1.52(1H,m, H-13),1.65(1H,m,H-14a),2.02(1H,m,H-14b),1.95(1H,m,H-15a),1.54(1H,m,H-15b),3.70(1H,d,J=11.4 Hz,H-17a),3.60(1H,d,J=11.4 Hz,H-17b),1.17(3H,s,H-18),0.99(3H,s,H-20)。13C-NMR(150 MHz,CD3OD),δ:178.8(s,C-19),82.9(s,C-16),66.8(t,C-17),58.2(d,C-5),57.4(d,C-9),53.7(t,C-15), 46.2(d,C-13),45.8(s,C-8),44.9(s,C-4),43.4(t,C-7),42.0(t,C-1),40.9(s,C-10),39.4(t,C-3),38.2(t, C-14),29.7(q,C-18),27.3(t,C-12),23.5(t,C-6),20.4(t,C-2),19.6(t,C-11),16.4(q,C-20)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報道基本一致。故鑒定該化合物為ent-16,17-dihydroxy-kauran-19-oic acid。

(11)化合物11 淡黃色固體，易溶于甲醇。1H-NMR(600 MHz,CD3OD),δ:6.95(2H,d,J= 1.9 Hz,H-6′,6″),6.82(2H,dd,J=8.1,1.9 Hz,H-2′,2″),6.77(2H,d,J=8.1 Hz,H-3′,3″),4.71(2H, d,J=4.0 Hz,H-3,7),4.23(2H,dd,J=8.9,5.5 Hz,H-1a,5a),3.86(6H,s,3,3′-OCH3),3.84(2H,dd,J=8.9, 3.4 Hz,H-1b,5b),3.15(2H,dt,J=5.5,3.7 Hz,H-4,8)。13C-NMR(150 MHz,CD3OD),δ:149.5(s,C-3′, 3″),147.4(s,C-4′,4″),133.6(s,C-1′,1″),120.0(d,C-6′,6″),116.0(d,C-5′,5″),111.1(d, C-2′,2″),87.6(d,C-3,7),72.7(t,C-1,5),56.5(q,-OCH3),55.4(d,C-4,8)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報道基本一致，故鑒定該化合物為(+)-pinoresinol。

(12)化合物12 白色無定型粉末。1H-NMR(600 MHz,CD3OD),δ:7.88(2H,d,J=8.8 Hz,H-2, 6),6.82(2H,d,J=8.8 Hz,H-3,5)。13C-NMR(125 MHz,DMSO-d6),δ:121.7(C-1),130.4(C-2,6), 114.8(C-3,5),160.4(C-4),167.7(C-7)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報道基本一致，故鑒定該化合物為對羥基苯甲酸。

(13)化合物13 淡黃色粉末，易溶于甲醇、氯仿-甲醇混合溶劑。與新芒果苷對照品共薄層，在3種溶劑系統(tǒng)下展開行為一致，且混合熔點不下降，鑒定化合物13為新芒果苷。

(14)化合物14 白色針晶。1H-NMR(600 MHz,CD3OD),δ:7.33(2H,s,H-2,6),3.88(s, 3,5-OCH3)。13C-NMR(150 MHz,CD3OD),δ:123.1(C-1),108.4(C-2,6),148.9(C-3,5),141.6(C-4), 170.5(C-7),56.9(3,5-OCH3)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報道基本一致，故鑒定為丁香酸。

(15)化合物15 黃色粉末。1H-NMR(600 MHz,CD3OD),δ:7.62(2H,d,J=8.7 Hz,H-2′,6′), 6.81(2H,d,J=8.7 Hz,H-3′,5′),6.17(1H,s,H-5),3.98(1H,d,J=4.7 Hz,H-3″),3.87(3H,s,4-OCH3), 3.78(1H,dd,J=7.0,4.7 Hz,H-4″),3.76(1H,m,H-5″),3.75(1H,dd,J=12.7,2.5 Hz,H-6″a),3.60(1H, dd,J=12.7,5.6 Hz,H-6″b),3.38(1H,d,J=16.6 Hz,H-1″a),2.86(1H,d,J=16.6 Hz,H-1″b)。13C-NMR(150 MHz,CD3OD)δ:197.2(s,C-7),164.7(s,C-4′),163.0(s,C-6),162.2(s,C-2),159.7(s, C-4),133.2(d,C-2′,6′),132.0(s,C-1′),121.7(s,C-2″),115.6(d,C-3′,5′),105.2(s,C-3),103.1(s,C-1),93.5(d,C-5),84.0(d,C-5″),82.6(d,C-3″),78.1(d,C-4″),62.4(t,C-6″),56.2(q,4-OCH3),33.0(t, C-1″)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報道基本一致，故鑒定該化合物為4′,6-dihydroxy-4-methoxybenzophenone-2-O-(2″),3-C-(1″)-1″-desoxy-α-L-fructofuranoside。

4 討論

知母須根是知母產(chǎn)地加工過程中所產(chǎn)生的資源廢棄物，大量知母須根在產(chǎn)地加工過程中被棄去不用，造成了一定程度的資源浪費。本研究通過各種色譜分離方法從知母須根中分離得到高異黃酮類、木脂素類、甾體類等化學(xué)成分，而這些化學(xué)成分均具有一定的生物活性。目前研究多集中在對知母主根化學(xué)成分的分析，對于知母須根化學(xué)成分的研究較少，后期應(yīng)以知母須根中活性化合物分離為導(dǎo)向，結(jié)合藥理學(xué)實驗，以期為知母藥材資源綜合開發(fā)利用提供一定的理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015:212.

[2] 魏樹奇,崔同淑,楊繼凡,等.知母須根與主根主要成分及藥理作用的初步實驗比較[J].中藥材,2008,31(11):1666-1668.

[3] 陳銀華.射干化學(xué)成分芒果苷的分離鑒定及藥材高效液相指紋圖譜的研究[D].武漢：湖北中醫(yī)學(xué)院,2007:10.

[4] TINTO W F, SIMMONS-BOYCE J L, MCLEAN S, et al. Constituents of Agave americana, and Agave barbadensis[J]. Fitoterapia,2005,76(6):594-597.

[5] 楊妍妍.天門冬的化學(xué)成分研究[D].沈陽：沈陽藥科大學(xué)，2008:22-32.

[6] MORALES-SERNA J A, JIMéNEZ A, ESTRADA-REYES R, et al. Homisoflavanones from Agave tequilana Weber[J].Molecules,2010,15(5):3295-3301.

[7] JORGE T,MARIANA L,FRANCISCO J P,et al.Chemical constituents of Tolpis species[J].Fitoterapia,2009,80(6):437-441.

[8] EONJEONG P, YOON J Y, AEJIN K, et al. Synthesis of norlignans andinvitroinhibitory activity of antigen-induced degranulation[J]. Bioorganic Medicinal Chemistry Letters,2012,4(22):3653-3655.

[9] AN J P, HA T K, KIM J, et al. Protein tyrosine phosphatase 1B inhibitors from the stems of Akebia quinata[J].Molecules,2016,21(8):1091-1102.

[10] PECHWANG J, SIHANONTH P, PORNPAKAKUL S, et al. Biotransformation of ent-kaur-16-en-19-oic acid by Psilocybe cubensis.[J]. Natural Product Research, 2010,24(10):905-914.

[11] MOON S S, RAHMAN A A, KIM J Y, et al. Hanultarin, a cytotoxic lignan as an inhibitor of actin cytoskeleton polymerization from the seeds of Trichosanthes kirilowii[J].Bioorganic Medicinal Chemistry, 2008, 40(3):7264-7269.

[12] 閻新佳，項崢，溫靜，等. 中藥連翹的酚酸類化學(xué)成分研究[J].中國藥學(xué)雜志,2017,52 (2):105-108.

[13] 劉方樂，陳德金，馮秀麗，等.溪黃草的化學(xué)成分研究[J].中藥新藥與臨床藥理,2016,27(2):242-245.

[14] PAN J, YI X, WANG Y, et al. Benzophenones from mango leaves exhibit α-glucosidase and no inhibitory activities[J]. J Agric Food Chem,2016,64(12):7475-7480.