益氣逐瘀法對(duì)AMI/抑郁大鼠神經(jīng)體液的影響及其機(jī)制研究

朱雨玫 胡馨 劉紅旭

摘要 目的：探討參元益氣活血膠囊（參元丹）對(duì)急性心肌梗死（AMI）/抑郁大鼠血清5-羥色胺（5-HT）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平的影響，以研究益氣逐瘀法對(duì)心梗合并抑郁神經(jīng)體液的影響機(jī)制。方法：將30只Sprague-Dawley（SD）大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、參元丹高劑量組、參元丹低劑量組、對(duì)照組，每組各6只，以冠脈結(jié)扎法及慢性輕度不可預(yù)知性刺激合并孤養(yǎng)法制作AMI/抑郁模型，分別予參元丹高劑量、參元丹低劑量、氟西汀或蒸餾水灌胃18 d。造模成功3 d后處死，測(cè)量各組大鼠血清5-HT、TNF-α水平。結(jié)果：血清5-HT濃度比較：與正常組比較，模型組大鼠血清5-HT濃度顯著降低（P<0.05），與模型組比較，參元丹干預(yù)組大鼠血清5-HT濃度均顯著升高（P<0.05）。參元丹干預(yù)組與對(duì)照組比較，血清5-HT濃度均無(wú)顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。血清TNF-α濃度比較：與正常組比較，模型組大鼠TNF-α濃度無(wú)顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。同模型組比較，對(duì)照組、參元丹干預(yù)組大鼠血清TNF-α濃度差異亦未呈現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但L-SYD血清TNF-α較各組明顯升高。結(jié)論：參元丹能改善AMI/抑郁的血清5-HT水平下降的情況，但對(duì)血清TNF-α水平無(wú)顯著影響。

關(guān)鍵詞 急性心肌梗死；抑郁；參元丹；5-羥色胺；腫瘤壞死因子-α

Abstract Objective：To observe the effect of Shen Yuan Dan（SYD） on 5-HT in the serum of Sprague-Dawley （SD） rats with acute myocardial infarction（AMI）/depression，and study the mechanisms of the theory Enhancing-qi in Removing-stasis in treating AMI/depression.Methods：Thirty SD rats were allocated into normal group，model group，H-SYD（high dose SYD） group，L-SYD（Low dose SYD） group and control group randomly.The model was estabished by coronary artery ligation with chronic mild unpredictable stimulation and fed alone.Models were given high dose of SYD，low dose of SYD，fluoxetine and distilled water.All the models were put into death 3 days later.The levels of 5-HT and TNF-α in rats serum of different groups were measured.Results：1） Serum 5-HT concentration.Compared with the normal group，5-HT concentration in the model group significantly decreased （P<0.05）； The serum concentration of 5-HT between the SYD group was significantly higher than that of the model group （P<0.05）.The concentration of 5-HT in serum of SYD group and control group had no statistical difference （P>0.05）.2） Serum TNF-α concentration.Compared with the normal group，the serum TNF-α concentration in the model group has no statistical difference （P>0.05），besides，TNF-α in serum of L-SYD group was higher than those of the normal group，control group and H-SYD group but without any significant difference（P>0.05）.Conclusion：SYD can reduce the level of 5-HT in serum but failed to affect TNF-α level.

Key Words AMI； Depression； SYD； 5-HT； TNF-α

中圖分類號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2017.02.004

自1977年生理-心理-社會(huì)醫(yī)學(xué)模式的提出，心理、社會(huì)因素在人體疾病發(fā)生中的作用逐漸被重視。抑郁障礙是心肌梗死（Myocardialinfarction，MI）患者常見(jiàn)的情緒障礙，2014年2月24日美國(guó)心臟協(xié)會(huì)（AHA）專家組在《Circulation》上發(fā)表的科學(xué)聲明[1]，正式將抑郁列為與肥胖、糖尿病、高血壓和吸煙有同等地位的急性冠脈綜合征（ACS）危險(xiǎn)因素。兩者共病的機(jī)制仍不甚清楚，其發(fā)病機(jī)制可能與血管系統(tǒng)、自主神經(jīng)系統(tǒng)、下丘腦-垂體-腎上腺軸、免疫系統(tǒng)等人的情緒與心血管系統(tǒng)之間的深層聯(lián)系及神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)有關(guān)[2]。有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明心肌梗死后TNF-α在炎性反應(yīng)級(jí)聯(lián)反應(yīng)中起決定性作用。其發(fā)病機(jī)制包括心肌梗死后免疫系統(tǒng)的激活和TNF-α對(duì)BBB的通透性的增加，其中TNF-α破壞BBB的機(jī)制有環(huán)加氧酶通路的激活、NO的釋放、細(xì)胞間粘附分子表達(dá)增加3方面[3]。5-HT升高介導(dǎo)的血小板聚集是抑郁合并心梗的另一潛在機(jī)制。血小板的聚集與冠心病發(fā)病有關(guān)，血小板活性增高會(huì)增加心梗伴抑郁癥患者心臟病事件發(fā)生的幾率。本研究據(jù)上述研究成果，對(duì)參元丹干預(yù)下AMI/抑郁大鼠的5-HT及TNF-α水平進(jìn)行研究，從而探索益氣逐瘀法對(duì)AMI/抑郁大鼠神經(jīng)體液的影響及機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 SD雄性大鼠，SPF級(jí)，體質(zhì)量（200±23）g。北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，許可證編號(hào)：SCXK（京）2007-0001。飼養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)均在清潔動(dòng)物房?jī)?nèi)進(jìn)行，人工控光（12 h明暗交替，6：00 am—18：00 pm光照）、控溫（20 ℃±3 ℃）。

1.1.2 藥物 參元丹（SYD，制劑名稱：參元益氣活血膠囊，北京市藥監(jiān)局批準(zhǔn)文號(hào)99京衛(wèi)字[056]第F203號(hào)）

1.2 方法

1.2.1 模型制備 急性心肌梗死大鼠模型的建立：腹腔注射3%戊巴比妥鈉（30 mg/kg）麻醉后，背位固定，氣管插管，連接小型動(dòng)物呼吸機(jī)行人工呼吸，（呼吸頻率90次/min，潮氣量10～12 mL，呼吸比設(shè)為1∶1）。胸骨左旁第3～4肋間切開(kāi)皮膚，長(zhǎng)約1～1.5 cm，逐層鈍性分離皮下組織、肌肉，于2～3肋骨間進(jìn)胸，向右上方推開(kāi)胸腺，暴露心臟及大血管根部，剪開(kāi)心包，用6-0 Prolene線在左心耳與肺動(dòng)脈圓錐交界稍下2 mm處，結(jié)扎前降支血管。正常組不進(jìn)行手術(shù)。慢性輕不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激抑郁模型的建立：在手術(shù)成功第2天開(kāi)始，對(duì)動(dòng)物進(jìn)行18 d的隨機(jī)輕度應(yīng)激刺激，包括禁水（24 h）、禁食（24 h）、夾尾（1 min）、熱應(yīng)激（40 ℃、3 min）、冰水游泳（4 ℃、5 min）、搖晃（每次160 Hz、5 min）、電擊足底（30 V、5 s）、晝夜顛倒24 h、行為限制2 h共9種刺激，隨機(jī)安排到18 d內(nèi)，每日采用1種刺激，平均每種刺激被采用2次，同種刺激不能連續(xù)出現(xiàn)，使動(dòng)物不能預(yù)料刺激的發(fā)生。正常組不予任何刺激。

1.2.2 分組與給藥方法 30只大鼠隨機(jī)分為：1）正常對(duì)照組（正常組），2）心肌梗死并抑郁模型對(duì)照組[模型組，蒸餾水4.5 mL/（kg·d）]，3）參元丹低劑量試驗(yàn)組[L-SYD組，生藥1 g/mL的清膏，1.5 g/（kg·d）]，4）參元丹高劑量試驗(yàn)組[H-SYD組，4.5 g/（kg·d）]，5）氟西汀對(duì)照組[對(duì)照組，0.04%鹽酸氟西汀液，4.5 mL/（kg·d）]。每組6只術(shù)后連續(xù)給藥18 d。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)與方法 各組動(dòng)物統(tǒng)一于實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的次日下午3：00，在心尖博動(dòng)最強(qiáng)處經(jīng)皮穿刺取血2 mL，放于5 mL無(wú)菌EP管中靜置30 min，2 000 r/min離心15 min（離心半徑為15 cm）。分離血清，保存于-80 ℃冰箱，用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清1）TNF-α；2）5-HT的含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有的數(shù)據(jù)均以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組間總體比較方差齊者采用方差分析（ANOVA），兩兩比較采用q檢驗(yàn)，方差不齊時(shí)采用Tamhane檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。統(tǒng)計(jì)分析用SPSS 15.0軟件完成。

2 結(jié)果

2.1 5組血清5-HT比較 與正常組比較，模型組大鼠血清5-HT濃度顯著降低（P<0.05），與模型組比較，參元丹干預(yù)組大鼠血清5-HT濃度均顯著升高（P<0.05）。參元丹干預(yù)組與對(duì)照組比較，血清5-HT濃度均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.2 5組血清TNF-α比較 與正常組比較，模型組大鼠TNF-α濃度無(wú)顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。同模型組比較，對(duì)照組、參元丹干預(yù)組大鼠血清TNF-α濃度差異亦未呈現(xiàn)出統(tǒng)

3 討論

5-HT，是重要的血管調(diào)節(jié)物質(zhì)，也是中樞神經(jīng)系統(tǒng)重要的神經(jīng)遞質(zhì)。5-HT對(duì)血管的作用主要取決于5-HT受體及內(nèi)皮功能[4]。生理狀態(tài)下，5-HT能夠舒張小血管，能使血管平滑肌和成纖維細(xì)胞增殖，血小板聚集，并能放大生長(zhǎng)因子的作用。機(jī)體應(yīng)激時(shí)，5-HT反應(yīng)性增高，對(duì)外周血管及組織起到保護(hù)作用。然而，持續(xù)應(yīng)激作用時(shí)，機(jī)體處于病理狀態(tài)，5-HT過(guò)度增高，則會(huì)損傷內(nèi)皮功能，導(dǎo)致機(jī)體損傷[5]。Frishman WH[6]等人研究認(rèn)為，心臟分布有多種5-HT受體，5-HT對(duì)心臟有直接的作用，參與了多種心血管疾病的發(fā)病。機(jī)體處于應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，5-HT水平增高，進(jìn)而引起多種心理和行為異常[7]。本研究中模型組的血清5-HT較正常組明顯下降，這表明應(yīng)激損傷會(huì)消耗血清中的5-HT，合并海馬神經(jīng)遞質(zhì)生成不足，5-HT遞質(zhì)系統(tǒng)的功能明顯減退，故5-HT水平下降。對(duì)于應(yīng)用參元丹干預(yù)的實(shí)驗(yàn)組與模型組比較，參元丹干預(yù)后可顯著提高抑郁大鼠海馬神經(jīng)遞質(zhì)的生成并增強(qiáng)5-HT遞質(zhì)系統(tǒng)功能，而同種藥物干預(yù)的高低劑量組間并無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

抑郁癥與一定程度的炎性反應(yīng)激活相伴發(fā)生，促炎性細(xì)胞因子升高已成為抑郁癥的標(biāo)志性現(xiàn)象。抗抑郁藥能夠阻斷臨床上應(yīng)用細(xì)胞因子免疫治療的患者出現(xiàn)的抑郁樣癥狀[8]。TNF-α屬于前炎癥細(xì)胞因子，是一系列炎性反應(yīng)中最早產(chǎn)生的細(xì)胞因子。研究表明，心理性應(yīng)激反應(yīng)能使腦內(nèi)情感調(diào)節(jié)區(qū)的TNF-α等促炎癥性細(xì)胞因子濃度增加[9]。本研究結(jié)果未觀察到參元丹干預(yù)大鼠血清TNF-α濃度與模型組的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但參元丹高劑量組血清TNF-α較各組明顯下降，提示高劑量參元丹干預(yù)可能對(duì)AMI/抑郁大鼠的炎性反應(yīng)有所調(diào)控。

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